T7RNA聚合酶／启动子表达实验
实验材料 载体试剂、试剂盒 氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养过夜。 2. 挑取独立的转化菌落于LB/氨苄青霉素培养基中，37℃培养，通过小量制备方法获得质粒DNA。以限制性酶谱分析确证基因正确插入与否。 3. 从pGP1-2转化大肠杆菌K38株涂布LB/卡那霉素平皿上，30℃下培养过夜（24 h）。挑取单个的转化菌落于LB/卡那霉素培养基中，30℃培养。4. 将一含有Pt7控制下的待表达基因的载体转化入大肠杆菌K38/pGP1-2，于LB/卡那霉素培养基上生长（转化期间细胞可经热激处理），将转化物涂布于LB/氨苄青霉......阅读全文
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验
基本方案 备选方案 备选方案2 实验材料 载体 试剂、
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验
实验材料 载体试剂、试剂盒 氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验1
在适宜的条件下，T7 RNA聚合酶/启动子系统表达的基因产物可占细胞总蛋白的25%以上，但多数情况下产量比这个比例要低得多。实验材料载体试剂、试剂盒氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材培养箱分光光度计离心机实验步骤1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验3
实验材料噬菌体试剂、试剂盒PEGIPTG仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1. 制备从M13噬菌体mGP1-2原种，加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基，滴定其滴度。 2. 将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞，转化物涂布于氨苄青霉素平皿上，3
T7－RNA聚合酶/启动子表达实验2
实验材料蛋白质试剂、试剂盒氨基酸混合物M9培养基甲硫氨酸甲醇仪器、耗材荧光显微镜离心机分光光度计实验步骤1. 将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中，转化一种标准大肠杆菌菌株，此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿，于37℃温育培养过
RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子
实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA
启动子—基因表达的发动机
众所周知，一段基因从转录开始，最终形成蛋白质执行功能，离不开一个高效、匹配的启动子。启动子的一般结构包括核心启动子元件和上游调控元件。核心启动子元件又包括转录起始点和TATA框，主要作为RNA聚合酶结合并起始转录的位点，上游调控元件能够通过与对应的反式作用因子相结合改变转录的效率，如图1。
启动子—基因表达的发动机
众所周知，一段基因从转录开始，最终形成蛋白质执行功能，离不开一个高效、匹配的启动子。启动子的一般结构包括核心启动子元件和上游调控元件。核心启动子元件又包括转录起始点和TATA框，主要作为RNA聚合酶结合并起始转录的位点，上游调控元件能够通过与对应的反式作用因子相结合改变转录的效率，如图1。
启动子与转录因子/基因表达调控蛋白
目的基因的表达调控生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗，不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达，表达产生的一些特殊蛋白（如转录因子、调控蛋白）反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点，涉及到生命活动的各个过程，也是各类
用λ噬菌体－PL－启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
实验材料 载体和细菌菌株PL 表达载体阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液L-色氨酸SDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段LB 琼脂平板LB 培养基M9 基本培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或相当的转头沸水浴振荡培养器实验步骤 材料缓冲液和
用λ噬菌体－PL－启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
实验材料 载体和细菌菌株 PL 表达载体 阳性对照质粒 试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液
用λ噬菌体－PL－启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
λ噬菌体 PL 启动子是受控于温度敏感阻抑物（cIts857) 的强效启动子，阻抑物可在低温下阻抑 PL 启动子的转录，但在髙温下不能。因此带有λ噬菌体启动子的载体必须以带有 cIts857 基因的菌株作为宿主。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞
关于原核表达载体的原件启动子的介绍
启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，对mRNA的合成
用碱性磷酸酶启动子和信号序列分泌表达外源蛋白实验
实验材料 大肠杆菌菌株 pTA1529 或 pBAce 阳性对照质粒 试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色
用－IPTG－诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验
实验材料 带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株 IPTG 诱导的表达载体 试剂、试剂盒
用－IPTG－诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验
实验材料 带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株IPTG 诱导的表达载体试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液IPTGSDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段LB 琼脂平板LB 培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或相当的转头沸水
用－IPTG－诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验
本方案将在疑难解析和诱导启动子表达蛋白的优化部分讨论影响质粒表达效率的因素。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株IPTG 诱导的表达载体试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色溶液或
用碱性磷酸酶启动子和信号序列分泌表达外源蛋白实验
实验材料 大肠杆菌菌株pTA1529 或 pBAce阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液微量营养MOPS 盐中性磷酸盐缓冲液SDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段诱导培养基 LB 琼脂平板LB 培养基仪器、耗材 Sorvall GSA 转头或相当的转头
用碱性磷酸酶启动子和信号序列分泌表达外源蛋白实验
本实验介绍关于用碱性磷酸酶启动子（phoA) 和信号序列在大肠杆菌中分泌表达外源蛋白的过程。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料大肠杆菌菌株pTA1529 或 pBAce阳性对照质粒试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液微量营养MOP
用－T7－噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
实验材料 大肠杆菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3) pET 载体或同类载体 阳性对照质粒 试剂、试剂盒
用－T7－噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
实验材料 大肠杆菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3)pET 载体或同类载体阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液IPTGSDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段NZCYM 琼脂平板NZCYM 培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或
用－T7－噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验
Tabor 和 Richardson 在 1985 年及 Studier 和 Moffatt 在 1986 年提出了一个新的利用 T7 噬菌体启动子的表达系统，使用的是从 T7 噬菌体基因组获得的转录信号。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实
表达蛋白检测实验
实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性（细胞内）蛋白的，如果重组蛋白是分泌到培养基中的，可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒
表达蛋白检测实验
免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法 实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后，免疫印迹可用于鉴定重组蛋白，并检测其是否有预期的大小以及是
原核表达载体的重要调控元件（启动子、SD序列与终止子）
1．启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列，它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子，基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子，因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成，
iRNA干扰GFP表达实验
实验概要本文介绍了iRNA干扰GFP表达实验的原理及方法步骤。实验原理RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特
iRNA干扰GFP表达实验
【原理】RNA沉默是发生在植物（转录后基因沉默或共抑制）、动物（RNA干扰，RNAi）和真菌（消除作用）等真核生物细胞中的的特异性和高效率的mRNA降解机制。在哺乳动物细胞中，RNAi通常用于阻断特定基因的表达从而研究基因的功能。将靶向特定基因的大约21碱基长短的双链siRNAs(smallinte
痘苗病毒系统基因表达实验
重组痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂质体转染 两种重组痘苗病毒共感染细胞 实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质
基因表达的系列分析实验
实验材料 玻璃及塑料器皿试剂、试剂盒 溶液与缓冲液引物仪器、耗材 试剂盒MPC-EPCR仪Gene PulserII 型系统实验步骤 一、一般原则若用于 SAGE 的 RNA 有足够的量，最好用 2.5~5 ug polyA+RNA, 可按实验方案 A 进行。这里我们还提供了实验方案 B，它在多
痘苗病毒系统基因表达实验
实验方法原理 本方案从构建外源基因位于 PT7 和 T7 终止子之间的质粒载体开始，然后用重组质粒通过脂质体介导转染已经被vTF7-3（可以持续表达T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的细胞。收获后，基因产物在细胞内的表达可以用脉冲标记的方法或用「重组痘苗病毒及其产物的鉴定实验」中叙述的方法分