高分辨熔解曲线法HRM实现基因分型
HRM实现基因分型基因分型在动物、植物、微生物的物种、菌种筛查、筛选、缺陷、突变基因的检测，根据个体基因类型实现对诸如癌症治疗、监测等的精准用药，以及消费类基因检测如酒精代谢能力基因检测等等领域有很多应用。通常，基因分型SNP采用荧光探针终点法，检测一个位点需要两个荧光探针，如一个探针的荧光报告基团用FAM通道，另一个用HEX(VIC)通道来检测。由于合成PCR荧光探针的成本较高，为降低成本，可以采用较小的反应体系，如在384孔荧光定量PCR仪上使用5uL的反应体系。对于一些非临床及消费类、或者需要检测几十个位点以上、对成本敏感的基因分型检测应用项目，可以考虑使用饱和染料的高分辨熔解曲线法HRM（High Resolution Melting Curve分辨率优于0.1°C），如果不包括核酸提取的费用，与探针法比，成本可降低10倍，甚至100倍。 HRM法为了能够在熔化温度Tm上区分出只差一个碱基的两个DNA片段，在......阅读全文
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常规制备DNA盐析法1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动1
通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测...（二）
表1 比较每个目的基因使用温度内标前后四个重复的Tm。在所有情况下，校准后差异降低。可以看出，校准后标准差和非感兴趣区域差异都降低。 表1.校准对Tm值影响的统计表1. 每个重复盘包含了相同设
通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测...（一）
通过温度内标提高高分辨熔解曲线中纯合子检测的灵敏度摘要应用高分辨率熔解曲线技术进行基因分型不仅简单而且有效。基于熔解曲线的分析方法中，探针法是进行基因分型的金标准，能够全面的检测匹配的目的等位基因。小片段扩增法是一种不需要设计探针进行基因分型的方法。由于异源双链的存在，杂合子很容易检测，而这很大程度
小片段法进行基因分型（二）
结果： 图1显示的是校正之前的完整的熔解峰显示。 从低温和高温内标及扩增子熔解的中部区分熔解信号。图1：派生熔解曲线显示校准和扩增子的熔解峰。左边和右边的峰是校准内标的峰。94的熔解剖面图，接近76℃，从独立的PCR反应中生成。校准分子没有对其，纯合子的扩增峰没有清楚的分开。中部最窄且
小片段法进行基因分型（一）
摘要： 背景：用于基因分型的高分辨率熔解曲线技术既简单又有效。在以熔解为基础的方法中，探针法是基因分型的黄金标准，可以将等位基因与目标的匹配完全区分开。小片段基因分型法是代替探针的基因分型法。异源双链核酸分子的存在使得检测纯合子变得容易，其熔解峰的形状有明显的改变。纯合子G/C或A/T的基
关于HLA分型高分辨分型应用的介绍
1、地中海贫血治疗 2、造血干细胞移植异基因造血干细胞移植是现能根治重型Β地贫的方法。如有HLA相配的造血干细胞供者，应作为治疗重型Β地贫的首选方法。 3、急性白血病，骨髓移植。 4、对ANLL疗效较好。 ①同基因骨髓移植，供者为同卵孪生子。 ②同种异基因骨髓移植，供者为患者的兄弟姐妹
荧光定量PCR仪的技术指标
独特设计的快速加热块可在极速运行的时候保证热均一性 TaqMan? Fast Universal PCR Master Mix和Fast SYBR? Green Master Mix可保证与标准实时PCR反应一样出色性能，并快速得到反应结果 快速光学反应板可确保在5-30?L反应体积下出色的检测
Rotorgene－Q－一款独具创新的荧光定量PCR仪
荧光定量PCR检测在中国的应用已经有超过10年的历史，也是目前分子诊断领域最主要的技术方法。随着该项检测的广泛开展，临床对于检测的敏感性、重复性、通量和速度等都提出了更高的要求。作为该方法的重要检测平台，荧光定量PCR仪器也在不断推陈出新。过去的10年中，国内外先后有10多个品牌，推出了几十种型号的
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
定量PCR的新技术
1992年，Sano等人将免疫测定技术与PCR结合，创建了一种全新的极其敏感的抗原分子检测技术，即免疫-PCR（Immuno-PCR），随着这种技术的不断发展，2000年，Sim等使用荧光定量PCR代替普通PCR，发展了免疫定量PCR技术（real-timeimmuno-PCR）。该技术把抗原抗体反
数字PCR和HRM在肿瘤样本中的应用
摘要：Vogelstein和Kinzler（美国国家科学院院刊，1999年）第一次描述了Digital PCR（dPCR）的概念，一种在微量细胞群中（如原发性肿瘤组织）鉴定突变的方法。通过稀释样品DNA到一个单个分子水平，它可以把PCR自然模拟指数转化为数字信号。当PCR成功的扩增出这些单个
解读《肿瘤个体化治疗检测技术指南》：9大检测技术
肿瘤的个体化治疗基因检测已在临床广泛应用，实现肿瘤个体化用药基因检测标准化和规范化，是一项意义重大的紧迫任务。 为进一步提高肿瘤个体化用药基因检测技术的规范化水平，7月31日，国家卫生计生委个体化医学检测技术专家委员会，在广泛征求意见的基础上，制订了《肿瘤个体化治疗检测技术指南（试行）》。
多个序列突变的筛查HRMA（二）
突变检测 高分辨熔解曲线分析已用于DNA序列突变的检测，是第一个用于基因分型中的技术[Wittwer等,2003]。简便、廉价、容易使用、高灵敏性和高特异性是它的突出特点，使它成为一种用于基因分型和诊断应用实验室中有吸引力的新工具。在萨普，表S1给出了我们所能找到的基于人类基因的实验。高分辨熔
关于甲基化检测的检测程序介绍
1．甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP） 用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能
关于基因表观修饰的方式—甲基化检测的程序介绍
1．甲基化特异性的PCR（Methylation-specific PCR，MSP） 用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变；随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能
华大基因新技术实现一次性达到HLA分型最高分辨率
骨髓和其他器官移植时，供者和受者之间人类白细胞抗原（HLA）相容程度越高，排斥反应的发生率就越低，移植成功率和移植器官长期存活率就越高。反之，就越容易发生排斥反应。7月开始，深圳华大基因应用新一代测序技术，只需通过一次实验就能够读取数千份样本的HLA序列数据，并一次性达到HLA分型的最
应用非标记探针法进行基因分型（一）
RET原癌基因单个碱基的突变可以引发多发性内分泌腺瘤2型。RET突变传统的基因分型方法是外显子测序。一种闭管操作的基因分型方法已经成熟，此方法用的是一种饱和DNA染料，非标记探针及高分辨率熔解扩增子分析。此方法需要两个连续的聚合酶链式反应阶段，主要的和第二次实验。主要的实验共用7个反应和8个非标记探
简述HLA低分辨分型的内容
采用序列特异性引物扩增HLA等位基因的特异性片段，经电泳分离，根据PCR结果的反应格局具判断被测标本的HLA等位基因型，具有通量大、正确性好的特点。反映了HLA抗原水平的等位基因类型，用于骨髓、器官移植组织配型的初筛。
关于HLA高分辨分型的介绍
过去治疗白血病通常是通过骨髓移植进行的，由于必须在麻醉状态下抽取骨髓捐献者的部分骨髓，整个过程对捐献者产生非常大的心理压力。现随着科学进步，只需抽取若干毫升静脉血，分离出干细胞，再输入患者体内即可。首先抽取患者和捐献者的静脉血样本，提取DNA，测出各自DNA碱基的顺序，最后通过软件比对分析得出H
罗氏FFPE组织切片核酸纯化试剂盒操作说明
High Pure FFPET DNA Isolation Kit基于离心柱法的抽提原理，免去DNA沉淀和有机试剂抽提的步骤，是快速核酸抽提的理想工具。整个抽提过程仅需3小时（含脱蜡过程）；获得高DNA得率和质量；在qPCR，芯片分析和测序等下游应用中获得强大信号。图1：从FFPET样本中获得高得率
肿瘤个体化治疗检测技术指南
个体化治疗检测技术指南（试行）》包括什么内容？《肿瘤个体化治疗检测技术指南（试行）》主要内容包括肿瘤个体化治疗检测分析前、分析中和分析后质量保证规范，从而使临床医生能够了解所开展检测项目的临床目的、理解检测结果的临床意义及对治疗的作用，并指导临床个体化治疗，提高疗效，减轻不良反应，促进医疗资源的合理
五花八门的DNA甲基化检测（上）
近年来涌现出不少DNA甲基化的检测技术，少说也有十几种。大致可以分为两类：特异位点的甲基化检测和全基因组的甲基化分析，后者也称为甲基化图谱分析(methylation profiling)。下面生物通给大家介绍一些常用的方法。 特异位点的甲基化检测 甲基化特异性PCR(MS-PC
上海宏石将推出新型实时荧光PCR分析系统
上海宏石医疗科技有限公司将在2011年4月正式推出多功能的SLAN-96P、SLAN-96R实时荧光PCR分析系统。SLAN-96P/SLAN-96R实时荧光PCR 新一代SLAN系列具备以下特点： ·高分辨率：可以轻松区分1000与2000模板的拷贝数，满足HRM实验对R
SNP检测——HRM技术应用
HRM技术服务之SNP检测（snp检测的最佳方案） 单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs），指单个核苷酸碱基的改变，包括置换、颠换、缺失和插入，导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中，绝大多数核苷酸序列一
一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法（一）
为了促进斑马鱼的高通量的基因分型，我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析（HRMA）区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高，可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基因分型，包
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
SNP检测——HRM技术应用
单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs），指单个核苷酸碱基的改变，包括置换、颠换、缺失和插入，导致的核酸序列的多态性。在不同个体的同一条染色体或同一位点的核苷酸序列中，绝大多数核苷酸序列一致而只有一个碱基不同的现象，这就是SNP。SNP在人类
关于HLA高分辨分型优势的介绍
HLA高分辨分型技术与过去的低分辨相比配型速度更快，配型更精确，使得移植排斥反应更小，手术成功率和术后存活率更高。 随着医学的发展，像白血病、地中海贫血等能用最新的基因技术进行分型检测，再寻找合适的供体进行移植治疗。现通过HLA高分辨分型的外周血干细胞移植技术能大大提高配型效果，使患者的康复更