HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常规制备DNA盐析法1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动15s。5．2000r/min离心15min，收集上清。6．加入2.5倍预冷无水乙醇沉淀DNA，－20℃过夜。7．吸取DNA团块用70％乙醇洗3次，每次10 000r/min，10min。再溶于适量TE缓冲液中，4℃保存。 酚抽提法1．采集EDTA抗凝血0.5ml，加双蒸水2.5ml，溶解红细胞。2．离心10 000r/min，5min，弃上清。3．加0.5ml生理盐水，混匀，离心10 000r/min，5min，弃上清。4．加500μl TES，混匀，再加20％ SDS 25μl，蛋白酶K 4μ......阅读全文
HLA基因分型方法：RFLP法
RFLP法1）常规制备DNA盐析法1．用淋巴细胞分离液从抗凝血中分离出白细胞。2．每3ml细胞悬液加10ml红细胞裂解液溶解红细胞两次，再加2ml白细胞裂解液溶解白细胞。3．加50μl 10％ SDS和70μl蛋白酶K消化蛋白质，37℃过夜或55℃ 3h。4．加0.25体积饱和醋酸钠溶液，剧烈摇动1
HLA基因分型方法：PCR－RFLP法
PCR－RFLP法1）提取细胞总DNA方法同前。 2）PCR扩增引物的设计1．引物长度一般为15～30bp，G＋C含量应在45％～55％之间。2．应避免连续出现4个以上的单一碱基。3．不能含有自身互补序列。4．两个引物之间不应有多于4个的互补或同源碱基，不然会形成引物二聚体。5．与非特异扩增序列的同
HLA基因分型方法：PCR－SSP法
PCR－SSP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增操作方法基本同PCR-RFLP，但引物是根据各等位基因的核苷酸序列设计的特异性引物，主要是针对第二外显子区域的多态性，用SSP扩增出来的产物具等位基因特异性。 3）凝胶电泳取PCR扩增的产物与上样缓冲液混合，加入2％琼脂糖凝胶加样孔中，其内
HLA基因分型方法：PCR－SSCP法
PCR－SSCP法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP，也可加入1μCi32P-dCTP标记产物。 3）非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳1．取PCR的扩增产物，加凝胶加样液3μl，95℃加热变性2min，冰浴骤冷。同位素掺入的DNA取1μl稀释10倍，加样3μl。2．取样品用微量
HLA分型方法
1.淋巴细胞毒试验 为HLA抗原分型常用方法。2.混合淋巴细胞培养试验本方法多用于组织相容性方面的研究，临床上主要用于器官移植。3.分子生物学技术一类是PCR为基础的基因分型。另一类是以测序为基础的基因分型。
HLA基因分型方法：PCR－指纹图法
PCR－指纹图法1）提取DNA同前RFLP法 2）PCR扩增同前PCR-RFLP法 3）凝胶电泳取PCR产物10μl，加2μl的6×上样缓冲液，经12％聚丙烯酰胺凝胶电泳，200V，2～3h。再用溴化乙锭染色30min，照相分析结果。
HLA分型的方法
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（＞20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
HLA的分型方法
HLA的分型方法是检验主管技师考试要求掌握的内容，医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。 1.淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率（>20%为阳性反应）。Ⅰ类抗原
HLA有哪些分型方法？
①淋巴细胞毒试验：为HLA抗原分型常用方法。原理：淋巴细胞膜上的HLA抗原与相应抗体结合后，在补体作用下，细胞膜损伤，细胞溶解破裂被染色，计算显微镜下观察着色细胞的百分率(>20%为阳性反应)。Ⅰ类抗原分型时可用T淋巴细胞或外周血淋巴细胞；进行Ⅱ类抗原分型时需用B淋巴细胞。②混合淋巴细胞培养试验：多
HLA细胞法分型试验简介
HLA-D和DP位点的抗原须用细胞法分型进行鉴定，所以又称LD抗原（lymphocytedefinedantigen），其鉴定方法普遍采用混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture，MLC），也称混合淋巴细胞反应（mixedlymphocytereaction，MLR）。 1