一文读懂NativeESIMS如何监测SEC分离过程中蛋白质变性
尺寸排阻色谱（SEC）与非变性电喷雾电离质谱（Native ESI-MS）联用技术是研究天然蛋白质的有效工具。但已报道的研究大多集中于技术应用，并未验证蛋白质在所用分离条件下是否处于原始状态，也未评估SEC洗脱条件对蛋白质-固定相的相互作用和蛋白质变性的影响。近期发表在Analytical Chemistry的一篇文章深入分析了挥发性流动相对SEC-ESI-MS分析过程中蛋白质的保留和离子化的影响。该研究使用不同pH和离子强度的洗脱液，评估蛋白质在SEC分离过程中可能发生的结构变化。选择肌红蛋白作为模型蛋白，通过Native ESI-MS技术分析目标蛋白质，揭示SEC分离后使蛋白质变性的条件和原因。最终，得到用于蛋白质Native SEC-ESI-MS分析的合适条件。 作者等人首先研究了不同流动相组成下肌红蛋白的SEC洗脱行为。使用含有4种不同流动相添加剂且pH和离子强度不同的洗脱液，通过紫外吸收检测（UV）获得肌红蛋白......阅读全文
一文读懂Native ESI-MS如何监测SEC分离过程中蛋白质变性
尺寸排阻色谱（SEC）与非变性电喷雾电离质谱（Native ESI-MS）联用技术是研究天然蛋白质的有效工具。但已报道的研究大多集中于技术应用，并未验证蛋白质在所用分离条件下是否处于原始状态，也未评估SEC洗脱条件对蛋白质-固定相的相互作用和蛋白质变性的影响。近期发表在Analytical Ch
Native gel electrophoresis（非变性电泳）
Native gel electrophoresis Under native PAGE conditions, polypeptides retain their higher-order structure and often retain enzymatic activity and inte
总RNA 的非变性电泳(native-PAGE)检测
总RNA 的电泳检测，原来我使用 Lambda DNA/EcoR I （或者 Hind III）酶切 Marker，现在基本上不再用 Marker 了。指示剂一定是溴酚蓝加二甲苯氰，胶浓度 1-1.2%。加样后，开始电泳 (电压的选择的唯一依据是，我后面的时间安排。)。 溴酚蓝出孔 2-3c
ESI-MS实验
ESI 三级四极质谱仪操作 ESI-离子阱质谱仪操作 实验方法原理 在 ESI源中，含有被分析样品（多肽／蛋白质）的溶液流经一个细细的进样针，针头上
ESI-MS实验
实验方法原理在 ESI源中，含有被分析样品（多肽／蛋白质）的溶液流经一个细细的进样针，针头上加高电压(+ 1000-5000V) 用来产生正离子，见图 5.2a。高电压导致样品液流分散为呈喷雾状的带高电荷的微小液滴，质谱仪入口端的有孔平板上加有+ 100--1000V的低电压，引导离子通过入
Blue Native Gel Electrophoresis
Blue Native Gel Electrophoresis Stock solutions 49.5%T, 3%C Acrylamide 24 g acrylamide, 0.75 g bisacrylamide / 50 ml H2O Store at RT 3 x Gel buffer 1
Native chromatin immunoprecipitation protocol
实验概要 Native chromatin immunoprecipitation to query specific chromatin states of individual genes. 主要试剂 10 x TBS 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) 1.5 M
Native chromatin immunoprecipitation protocol
实验概要The method is a native chromatin immunoprecipitation protocol.主要试剂1. 10 x TBS 0.1 M Tris-HCl (pH 7.5) 1.5 M NaCl 30 mM CaCl2 20 mM MgCl2 50 mM Na
蛋白质的变性
蛋白质变性是指当天然蛋白质受到物理或化学因素的影响时，使蛋白质分子内部的二、三、四级结构发生异常变化，从而导致生物功能丧失或物理化学性质改变的现象。 常见的引起蛋白质变性的因素有：物理因素：热作用、高压、剧烈震荡、辐射等；化学因素有：酸、碱、重金属离子、高浓度盐、有机溶剂等。 变性对蛋白质功
非变性胶蛋白电泳
Section 2.1Nondenaturing Polyacrylamide Gel Electrophoresis of ProteinsJohn M. Walker1. IntroductionSDS-PAGE (Section 2.2) is probably the most commo