焦磷酸测序技术原理及应用
焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术，焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析，其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美，而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力，为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行DNA甲基化、SNP等单个/连续多个核苷酸变异进行实时定量检测提供了非常理想的技术操作平台。一. 焦磷酸测序技术原理焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。焦磷酸测序技术的原理是：引物与模板DNA退火后，在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase)．荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下，将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来，通过检测荧光的释放和强度，达到......阅读全文
基因测序技术破译生命密码，让基因“说话”
完成“人类基因组计划”所用的第一代基因测序技术，通量低、成本高、对人力需求大。而第二代基因测序技术可以一次性对几百万到几十亿条核酸分子进行序列测定，终结了漫长、浩大的测序时代，给生命科学研究和生物医学应用带来了全新突破。 在不久前公布的2022年度科学突破奖获奖名单中，开发二代DNA测序技术（
－2014年测序、克隆、细胞分析等技术展望
新一代测序 新一代测序(NGS)技术一路走来，逐渐褪下其神秘面纱，进入越来越多的实验室。随着时间的推移，NGS系统从“高端大气上档次”的大型平台演化成满足个性化需求的台式测序仪。MiSeq、Ion Torrent和454 GS Junior这些仪器的上市，也推动了测序平台的普及。同
同济大学发布单细胞测序新技术
单细胞转录组和甲基化组分析已经成为了单细胞研究的强大工具。然而，在单细胞中揭示DNA甲基化与基因表达的直接关联还比较困难。这是因为细胞之间存在较大的差异，又不能同时检测一个细胞的转录组和甲基化组。 加州大学范国平教授和同济大学薛志刚教授领导团队解决了这个问题。他们在五月五日的Geno
官方叫停“基因测序”因未获批－无关技术
日前，国家食药监总局和国家卫生计生委联合发出通知，要求在相关的准入标准、管理规范出台以前，任何医疗机构不得开展基因测序临床应用，已经开展的，要立即停止。官方给出的原因是，目前国内使用的基因测序仪及相关试剂、软件，均未获得国家对医疗器械的审评审批，属于“违法医用”。 什么是基因测序? 这一技
北大生科院PNAS发布单细胞测序新技术
来自北京大学生命科学学院等处的研究人员发表了题为“Microfluidic single-cell whole-transcriptome sequencing”的文章，开发出了一种新型微流控单细胞全转录测序新方法，这种方法有效地消除转录组高度动态特性所带来的测量差异，提高单细胞全转录组分析的准
测序技术临床应用潜力无限－“叫停”只是暂停
近年来，随着第二代测序技术的发明与推广，基因序列测序速度极大提升、成本大幅下降，使得基因组测序的大规模应用成为可能。现在个人全基因组测序的成本大概在5,000美元，有望在未来几年缩减至1,000美元以下。 测序技术的飞速发展将推动DNA序列数据的大量积累，同时伴随着相应的个体疾病、体
基因测序技术：就像考试做“问答题”
原文地址：http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2024/1/516468.shtm
赵可吉博士Nature发布重要测序技术
DNase I超敏感位点（DHS）是对DNaseⅠ高度敏感的活性染色质区域。哺乳动物细胞的DHS定位，能够提供转录调控元件和染色质状态的重要信息，一直是科学家们的研究热点。DNase测序（DNase-seq）是进行全基因组DHS分析的常用方法，不过DNase-seq需要数百万细胞，大大限制了该技
基因测序技术：就像考试做“问答题”
基因测序技术是人类探索生命奥秘的重要手段之一。随着测序技术的发展，通过测序技术对遗传信息的解码和基因组数据库的构建，人类不仅得以窥探生命的密码，更能从基因层面对人类疾病进行检测甚至干预。为进一步了解基因测序技术的优势及应用，《中国科学报》采访了清华大学药学院研究员白净卫和北京大学化学学院教授黄岩
SNP检测技术（测序、taqman探针和snp芯片）
snp现有检测技术有主要的3大类别1、测序 主要发现新的snp位点和比较集中的snp位点，如hla区域，但成本较高，工作量大，不适合大样本做疾病关联分析。 2、taqman探针 结果比较可靠，国外文章也大量应用，不过对于国内成本偏高，同类还有snpshot技术，abi和贝克曼
T7－DNA聚合酶测序技术
一、概述T7 DNA聚合酶最初具有5'→3'聚合酶活性以及单链和双链3'→5'外切酶活性。当T7 DNA聚合酶用适当方法处理后，可使3'→5'外切酶活力明显下降。改造后的T7 DNA聚合酶又称T7测序酶。使用T7测序酶得到的测序数据具有在每个碱
高通量测序技术的两大难点
没有测序的癌症诊断是不完整的，完整的癌症诊断应该包括一系列基于细胞遗传学技术、荧光原位杂交技术、标准分子技术以及NGS的预后与预测性分析。对于早期癌症患者来说，NGS序列分析在多种癌症的筛查技术中具有不容忽视的代表性;而对于晚期癌症患者，大量的侵入性测试往往只能筛查出少数几个药物靶点。 随着
DNA测序技术的发展的重要意义
DNA测序方法的飞速发展让我们不仅知晓了人类的全基因组序列，小麦、水稻、家蚕以及很多细菌的序列也都尽在掌握，这时探明一段序列所代表的生物学意义成了科学家的新目标。 通过对人类基因组序列的分析，科学家发现30亿对核苷酸组成的庞大序列中只有1.5%用于编码基因，另外还有少许扮演调控基因表达的角色，
基因测序技术未来40年的发展展望
1977年，Science的两篇论文描述了第一种用于确定DNA片段中化学碱基顺序方法。而在这些文章发表之前，分子生物学家已经能够排列片段。四十年过去了，如今，DNA测序技术正以惊人的速度向前发展。在过去十年中，高通量测序技术使数据生成呈指数级增长态势。 由此产生的大量数据在基础生物学领域的应用已经产
－Science：宏基因组学测序技术
宏基因组学技术(Metagenomic approaches)正快速拓宽我们对微生物代谢能力(microbial metabolic potential)的认识。 长期以来，对微生物(microorganism)功能开展的研究主要依赖的都是以在实验室里培养的单一物种(individua
三代测序技术的优点有哪些
第三代测序技术是指单分子测序技术。DNA测序时，不需要经过PCR扩增，实现了对每一条DNA分子的单独测序。第三代测序技术也叫从头测序技术，即单分子实时DNA测序。第三代测序技术发明人：Stephen W Turner1 & Jonas Korlach1博士。基因测序技术逐渐成为临床分子诊断中重要技术
新一代测序技术（下）SOLiD－(ABI)
【摘要】 2005年454公司首推划时代的新一代测序仪，从而引发了测序市场上454、Illumina、ABI等公司在新一代测序技术上的比拼高潮。也正是这种你追我赶，让绘制人类全基因组图谱由过去的耗费4.37亿美元和13年时间，骤然缩短到如今SOLiD 3运行一次即获得50GB可定位测序数据。新一代
三代测序技术和原理介绍（二）
Solid技术 Solid测序技术是ABI公司于2007年开始投入用于商业测序应用的仪器。它基于连接酶法，即利用DNA连接酶在连接过程之中测序（图6）2,4。它的原理是： 图6-a. Solid测序技术 （1）DNA文库构建 片段打断并在片段两端加上测序接头，连接载体，构建单链DNA文库。
DNA芯片技术和RNA测序有啥不同？
日本推理小说家东野圭吾的作品《白金数据》中描述了这样一个未来世界：日本政府秘密建立名为“白金数据”的数据库。该库搜集了全国人民的DNA数据，通过对犯罪分子留在现场的毛发、体液等证物进行比对，警方可以高效、快速、准确锁定真凶。借助“白金数据”的帮助，一个检举率100%、冤案率0%的理想法制社会构建完
单细胞测序技术(single－cell－sequencing)－综述（一）
单细胞生物学最近几年是非常热门的研究方向。在这一领域中，最前沿的则是单细胞测序技术。传统测序方法一次处理成千上万个细胞，得到的变异水平也是成千上万个细胞的平均后水平。但是，就如同世界上没有完全相同的两片树叶一样，没有两个细胞是完全相同的。所以，单细胞测序对于研究单个细胞就显得至关重要。单细胞测序可以
测序技术及DNA序列测定结果分析
实验概要 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的
干货：三代测序技术和原理（二）
Solid技术 Solid测序技术是ABI公司于2007年开始投入用于商业测序应用的仪器。它基于连接酶法，即利用DNA连接酶在连接过程之中测序（图6）2,4。它的原理是： （1）DNA文库构建 片段打断并在片段两端加上测序接头，连接载体，构建单链DNA文库。 （2）Emulsion PCR
单细胞测序技术(single－cell－sequencing)－综述（二）
DroNC-seq10月，Broad研究所张锋教授团队在Nature Methods上发表题为“Massively Parallel Single-Nucleus RNA-Seq with DroNc-Seq (doi: 10.1038/nmeth.4407)” 的文章，提出了一个新的测
全面解读第四代测序技术
纳米孔测序技术（又称第四代测序技术）是最近几年兴起的新一代测序技术。目前测序长度可以达到150kb。这项技术开始于90年代，经历了三个主要的技术革新：一、单分子DNA从纳米孔通过；二、纳米孔上的酶对于测序分子在单核苷酸精度的控制；三、单核苷酸的测序精度控制。目前市场上广泛接受的纳米孔测序平台是Oxf
二代测序及其应用
二代测序为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。二代测序应用如下：1、Illumina 原理：桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像。2、Roche 454：油包
二代测序及其应用
二代测序为高通量测序，采用微珠或高密度芯片边合成边测序，代表有454，solexa，solid，高通量，可一次获得数G数据，相对与第三代，都仍然需要扩增的方法放大信号，扩增后再检测。二代测序应用如下：1、Illumina 原理：桥式PCR+4色荧光可逆终止+激光扫描成像。2、Roche 454：油包
两项尖端分子技术联合：发明新HIV筛选方法
尽管抗HIV药物鸡尾酒在全球减少了HIV相关死亡病例并在一定程度上改善了HIV患者的生命治疗，但是目前越来越多的药物抗性HIV病毒株对目前的治疗药物效果产生威胁。现在，来自美国宾州大学医学院的研究人员开发出一种能够同时分析多种HIV变体的药物抗性筛选方法。 通过结合两种基因化验方法，Frederi
双脱氧法DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 寡核苷酸引物测序酶终止混合液测序酶缓冲液焦磷酸酶混合液仪器、耗材 离心机离心管微量滴定板实验步骤 1. 对于每个单链模板：将下列试剂混合于0.5 ml 微量离心管中（1）0.5 pmol 单链DNA模板（2）0.5 pmol 引物（3）1 μl 10×测序酶缓冲液（4
PYRO测序用于SNP基因分型原理
其实是一种段片段焦磷酸测序技术，在测序引物的引导下，完成段片段（含snp）的测序，从而实现基因分型。缺点：不能检测长片段，对于重复序列没有办法。原理简介1.测序引物与单链，PCR扩增的DNA模板相结合。然后将其与DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和三磷酸腺苷双磷酸酶，以及底物APS和荧光素一起孵
三代基因测序技术以及基因检测技术的发展综述
基因是指携带有遗传信息的DNA序列，是控制性状的基本遗传单位，一段具有功能性的DNA序列。基因通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。人类约有两万至两万五千个基因。广义上的基因检测指通过血液、组织或细胞分泌物，对染色体、DNA分子进行检测的一系列技术。目前在医疗领