2014年测序、克隆、细胞分析等技术展望
新一代测序 新一代测序(NGS)技术一路走来，逐渐褪下其神秘面纱，进入越来越多的实验室。随着时间的推移，NGS系统从“高端大气上档次”的大型平台演化成满足个性化需求的台式测序仪。MiSeq、Ion Torrent和454 GS Junior这些仪器的上市，也推动了测序平台的普及。同时，MiSeqDx测序仪通过美国FDA认证，成为行业内一大里程碑事件，让NGS的临床应用成为现实。2014年，NGS技术将继续发展，可能会为我们带来更多惊喜。 1.纳米孔测序走出阴影：Oxford Nanopore Technologies公司沉寂了一年之后，终于在11月底启动MinION测序仪的早期试用计划。2014年初，他们会将仪器发送给客户。据称，这个系统不需要文库制备，成本极低，且读长高达几十kb。这究竟是炒作，还是事实?答案将在明年揭晓。届时我们将看到许多有关纳米孔测序仪的数据。 2.“黑客”改造测序仪：随着......阅读全文
无细胞蛋白表达技术介绍
无细胞蛋白表达技术是指用含有蛋白合成必需的组分（核糖体，转运RNA，氨酰合成酶，启动/延伸/终止因子，三磷酸鸟苷，ATP，Mg2+和K+）的细胞裂解物在体外进行蛋白合成。与传统的基于细菌或真核细胞的蛋白表达系统相比较，无细胞蛋白表达系统具有独特的优势，包括节约时间、提高具有功能的、可溶的、全长蛋白的
无需活细胞的蛋白合成新技术
来自美国能源部橡树岭国家实验室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人员研发出了一种无需细胞培养，人工合成蛋白质的新系统，这一研究成果公布在12月22日的Small杂志上。 这个生物反应器采用的是一种混合液，其中包含有大肠杆菌细胞提取物，一种绿色荧光蛋白DNA编码
无需活细胞的蛋白合成新技术
来自美国能源部橡树岭国家实验室（Oak Ridge National Laboratory）的研究人员研发出了一种无需细胞培养，人工合成蛋白质的新系统，这一研究成果公布在12月22日的Small杂志上。 这个生物反应器采用的是一种混合液，其中包含有大肠杆菌细胞提取物，一种绿色荧光蛋白DNA编码
质谱流式技术——蛋白水平的单细胞技术
摘要：在蛋白质水平，流式一直是最为常用的单细胞分析手段。但是由于串色等问题的困扰，流式通常只能进行6～10种蛋白的同时检测。质谱流式技术的出现给研究者带来了惊喜。利用分辨力超强的质谱技术以及独特的金属标记抗体，CyTOF2质谱流式细胞仪在检测通道数量和信号质量两方面都有了质的提升。单细胞技术在近年来
重组CHO细胞分离及蛋白收获技术介绍
简介：现今，通过哺乳动物细胞培养，新一代生物制药得到了前所未有的发展。本文主要介绍通过中空纤维微孔过滤，以分离哺乳动物分泌蛋白的过程。起始浓度为2×105 cell/ml，细胞外蛋白产物是一种与白介素-2相似的10kD淋巴因子，是一种潜在的肿瘤治疗药物。该应用需要去除细胞和颗粒，而不裂解细胞，同时达
古朵技术：细胞裂解提取蛋白的步骤
在实验过程中，我们常常需要证明实验组相对于对照组某些蛋白质是多了还是少了，那么我们就需要先把细胞或组织中的蛋白质提取出来进行测量，今天就给大家介绍一下细胞与组织蛋白质提取的基本知识和步骤。 蛋白样品制备的原则： 1.尽可能采用简单方法，以避免蛋白丢失； 2.细胞和组织样品的制备
单细胞蛋白质定量技术解析干细胞异质性
干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞。体内或体外研究表明, 干细胞具有表型及功能的异质性, 这一特性也决定了其不同的分化和再生能力。越来越多的证据表明, 干细胞自我更新及分化的分子机制以及与干细胞功能失调的相关疾病的产生都是在单细胞水平发生的, 基于异质性的干细胞群体的研究结果
新技术可找到干细胞分化的关键蛋白
就像人类要做选择一样，干细胞也有一个“决定”过程，选择自己是变成某种特殊类型的细胞，还是继续保持“多能”的灵活性。据美国物理学家组织网4月27日报道，美国布朗大学研究人员发明了一种名为MEGA转换的技术，能分析关键转录因子的相互作用，有助于再生医学研究更好地理解干细胞的“多能性”。该研究近日发表
防止细胞内错误的蛋白降解新技术
细胞中的蛋白酶体通过识别泛素标签来降解丧失功能的蛋白，以维持细胞稳态。错误的泛素标记会导致功能完整的蛋白被降解，从而诱发相关疾病，例如部分癌症和神经退行性疾病的发生归咎于这种原因。美国加州大学伯克利分校的研究团队开发出清除蛋白错误泛素化标记的新技术，相关成果在《Nature Chemical
质谱流式细胞仪：蛋白水平的单细胞技术
【摘要】在蛋白质水平，流式一直是最为常用的单细胞分析手段。但是由于串色等问题的困扰，流式通常只能进行6～10种蛋白的同时检测。质谱流式技术的出现给研 究者带来了惊喜。利用分辨力超强的质谱技术以及独特的金属标记抗体，CyTOF2质谱流式细胞仪在检测通道数量和信号质量两方面都有了质的提升。
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白
在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是zui早被我们应 用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋 白。它们都可以
蛋白定量技术
（一）双缩脲测定法1．原理 蛋白质中的肽键有双缩脲反应，在碱性溶液中与二价铜离子形成蓝紫色的络合物，在一定的范围内，颜色的深浅与蛋白质的含量成正比。此法特异性强，游离的氨基酸、小肽和核酸均不产生这种反应，但此法不够敏感，仅能测出毫克水平。 2．试剂配制 硫酸铜（CuSO4·5H2O）
给鸡蛋换蛋白：解读细胞核移植“三父母”技术
新华社华盛顿１０月１９日电（记者林小春）美国新希望生殖医学中心张进团队１９日在美国生殖医学学会会议上宣布，世界首个细胞核移植“三父母”婴儿于今年４月诞生。那么，什么是细胞核移植“三父母”技术？张进对新华社记者解释道，简单而言，就相当于给鸡蛋换蛋白。 每个人都从父母那里继承三份遗传物质，分别是
活细胞蛋白质光遗传控制技术获重要进展
基因编辑、转录调控和RNA干扰是目前广泛应用的活细胞蛋白质操纵方法，可以用于研究特定蛋白在复杂生物过程中的功能。作为一种灵活而强大的基因组编辑工具，CRISPR-Cas系统近年来得到了广泛应用。然而，这些技术是在基因或mRNA水平对蛋白质进行控制，而mRNA转录生成和翻译均需要时间，使得这些方法在表
基于尺度集成细胞（MuSIC）技术发现新的胞内蛋白
近期，美国科学家开发了一种结合显微镜、生物化学和人工智能（AI）的技术——尺度集成细胞（MuSIC）技术，实现了直接从细胞显微镜图像绘制细胞图谱，从而发现了大量未知的胞内蛋白。研究成果发表在《Nature》期刊，标题为“A multi-scale map of cell structure fu
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（二）
下一步就是要结合信号/背景优化结果确定最佳激发和发射波长。因为初步检测结果的斯托克顿位移偏小(22nm)，显然是要通过降低激发波长和增大发射波长来扩大两者之间的差异，其次还需要找到合适的发射光阻隔滤片优化最佳灵敏度。最终，我们使用5 5 0nm的激发波长来激发， 同时使用570nm的发射光阻
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
活细胞蛋白质光遗传控制技术获重要进展
近日，华东理工大学药学院教授杨弋团队在《自然—通讯》发表论文，描述了一种超高灵敏的光诱导蛋白质稳定标签，可用于调控活细胞蛋白质稳定性。 基因编辑、转录调控和RNA干扰是目前广泛应用的活细胞蛋白质操纵方法，可以用于研究特定蛋白在复杂生物过程中的功能。作为一种灵活而强大的基因组编辑工具，CRISP
技术和方案13－已固定细胞的肌动蛋白染色
试剂、试剂盒PBS固定液实验步骤鬼笔环肽专一性地结合 F 肌动蛋白，荧光标记的鬼笔环肽染细胞与肌动蛋白抗体的染色模式类似。1.在 500 ml 三角瓶中振荡培养 25 ml 酵母菌至密度为 2X107 个/ml。2.添加 17 ml 10% 甲醛（EM 电子显微级）到培养基中至终浓度 4%，在酵母菌
酶标仪利用”无创”技术检测活细胞荧光蛋白（三）
在本次实验中，ZsGreen和DsRed细胞系在底读模式都有着相似的检测限，而且两者都比AcGFP细胞系的检测下限低3到4倍。本次实验一共重复了三次，但是DsRed实验结果并不是每次都能表现的足够好。在一次实验中，它的检测下限近似于AcGFP，但是在另一次实验中，它的检测下限又会很高。我们将这些区别
融合蛋白技术的技术特点
融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。原核表达系统的特点是时程短，费用低，是科研中的主要工具。其缺点是真核蛋白表达没有得到确切修饰；大量蛋 白常常沉淀成不溶性包涵体聚合物，需要复杂的变性和复性过程；大量蛋白的分泌较困难。真核表达系统的特点是蛋白翻译后加工机会多，甚至可被改造成
Milo单细胞蛋白质检测技术解析乳腺癌发生的细胞基础
乳腺癌起源于乳腺上皮细胞，原因是乳腺上皮细胞发生基因改变，导致随后组织稳态的丧失。科学家们经过大量研究将乳腺上皮细胞分为几个不同的亚群，但依然无法完全了解上皮细胞异质性和分化谱加州大学欧文分校（University of California, Irvine）的科学家，在最新一期Nature Com
细胞膜蛋白激光检测技术研制成功
据每日科学网近日报道，美国范德比尔特大学研究人员开发出一种新型激光技术，可检测细胞膜上的蛋白质和其它多种生物分子之间的相互反应。这种检测将在药物开发进程中发挥重要作用。 人类细胞中约有7000种蛋白质，其中30%在细胞膜上，控制细胞分子运作机制的信号有60%—70%由这些膜蛋白产生，
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（二）
结果波长优化用GeminiEM对DsRed进行波长扫描，以此举例如何进行波长优化。为了检测最大激发波长，我们首先固定发射波长为600nm，然后对发射波长进行扫描。扫描结果显示最大激发波长为556nm(图1)。同样为了检测最大发射波长，我们固定激发波长为535nm，然后扫描发射波长，从而得到584nm
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（一）
简介在过去的五年中，荧光蛋白在监测体内生物学研究中，起到越来越重要的作用。源于维多利亚多管发光水母中的绿色荧光蛋白(GFP)是最早被我们应用的荧光蛋白，但是随着时间的推移，现在我们可以使用的荧光蛋白种类也越加丰富，包括加强型的变异GFP蛋白、从其他种类水母中发现的荧光蛋白和珊瑚礁蛋白。它们都可以在众
利用“无创”技术检测活细胞中荧光蛋白表达（三）
细胞混合结果在本次实验中，我们在一个96孔板里混合了多种细胞，保证每个孔大约50,000个细胞。因此，如果是1:1混合，那么每种细胞会有25,000个。如果是1:1:1混合，那么每种细胞将有16,700个。实验板分别用480/510nm(AsGFP和ZsGreen的优化结果)和550/588nm(D
融合蛋白技术简介
在基因操作中，对一些分子数小的多肽基因常采用融合的方法与某一基因（如lac）相连，二者之间接上某一酶（如凝血酶）的切口，以增加在体内表达后产物的稳定性，也有的故意使两个分子串连融合以提高疗效，如IL-3与GM-CSF。也有与分泌性蛋白的信号肽基因组成融合基因，以使表达产物分泌到膜外或胞外。融合蛋白技
蛋白蛋白相互作用技术介绍
技术内容蛋白质并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三维空间结构并与其他蛋白质相互作用，共同执行功能。因此，蛋白质的模块及空间组织与其表达水平具有同样的重要性。为了解析蛋白质组的组织结构单元而开发的基于质谱的蛋白质组学方法通常结合了质谱检测与各种生化试验。其中最经典的技术为1999[1]首次报导的亲和
蛋白蛋白相互作用技术内容
技术内容 蛋白质并非孤立存在的生物分子，而是具有特定三维空间结构并与其他蛋白质相互作用，共同执行功能。因此，蛋白质的模块及空间组织与其表达水平具有同样的重要性。为了解析蛋白质组的组织结构单元而开发的基于质谱的蛋白质组学方法通常结合了质谱检测与各种生化试验。其中最经典的技术为1999[1]
华东师大团队《细胞》子刊发布降解致病蛋白新技术
·ΔTrim-TPD技术最突出的优势在于：它的高度精准可控性和模块化设计，使得TPD技术的应用更为灵活和广泛。该技术还实现了高达80%的蛋白降解效率，分钟级别的降解速度和灵活的调控方式。 我们能精准找到那些出错的蛋白质吗？ 一种被称为“靶向蛋白质降解”（targeted protein de