焦磷酸测序技术原理及应用

焦磷酸测序技术(pyrosequencing)是由Nyren等人于1987年发展起来的一种新型的酶联级联测序技术,焦磷酸测序法适于对已知的短序列的测序分析,其可重复性和精确性能与SangerDNA测序法相媲美,而速度却大大的提高。焦磷酸测序技术产品具备同时对大量样品进行测序分析的能力,为大通量、低成本、适时、快速、直观地进行DNA甲基化、SNP等单个/连续多个核苷酸变异进行实时定量检测提供了非常理想的技术操作平台。一. 焦磷酸测序技术原理焦磷酸测序技术是由4种酶催化的同一反应体系中的酶级联化学发光反应。焦磷酸测序技术的原理是:引物与模板DNA退火后,在DNA聚合酶(DNA polymerase)、ATP硫酸化酶(ATP sulfurytase).荧光素酶(1uciferase)和三磷酸腺苷双磷酸酶(Apyrase)4种酶的协同作用下,将引物上每一个dNTP的聚合与一次荧光信号的释放偶联起来,通过检测荧光的释放和强度,达到......阅读全文

三代测序技术的优点有哪些

第三代测序技术是指单分子测序技术。DNA测序时,不需要经过PCR扩增,实现了对每一条DNA分子的单独测序。第三代测序技术也叫从头测序技术,即单分子实时DNA测序。第三代测序技术发明人:Stephen W Turner1 & Jonas Korlach1博士。基因测序技术逐渐成为临床分子诊断中重要技术

DNA测序技术的发展的重要意义

  DNA测序方法的飞速发展让我们不仅知晓了人类的全基因组序列,小麦、水稻、家蚕以及很多细菌的序列也都尽在掌握,这时探明一段序列所代表的生物学意义成了科学家的新目标。  通过对人类基因组序列的分析,科学家发现30亿对核苷酸组成的庞大序列中只有1.5%用于编码基因,另外还有少许扮演调控基因表达的角色,

基因测序技术:就像考试做“问答题”

  基因测序技术是人类探索生命奥秘的重要手段之一。随着测序技术的发展,通过测序技术对遗传信息的解码和基因组数据库的构建,人类不仅得以窥探生命的密码,更能从基因层面对人类疾病进行检测甚至干预。为进一步了解基因测序技术的优势及应用,《中国科学报》采访了清华大学药学院研究员白净卫和北京大学化学学院教授黄岩

单细胞测序技术的研究进展如何?

单细胞测序技术在近年来取得了显著的研究进展,主要体现在以下几个方面:  1. 技术改进:    - 提高了测序的通量和准确性,能够同时对更多的单细胞进行测序,并且降低了测序错误率。    - 开发了新的单细胞分离和捕获方法,如微流控技术的不断优化,提高了细胞捕获的效率和纯度。  2. 多组学

基因测序技术:就像考试做“问答题”

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测序技术临床应用潜力无限-“叫停”只是暂停

  近年来,随着第二代测序技术的发明与推广,基因序列测序速度极大提升、成本大幅下降,使得基因组测序的大规模应用成为可能。现在个人全基因组测序的成本大概在5,000美元,有望在未来几年缩减至1,000美元以下。  测序技术的飞速发展将推动DNA序列数据的大量积累,同时伴随着相应的个体疾病、体

澳将用基因测序技术诊断罕见基因疾病

  澳大利亚加文医学研究所27日宣布,全澳罕见病患者现在可以通过全基因测序技术获得更准确的诊断。澳大利亚也成为继美国后第二个向公众提供该项测试的国家。  全基因测序技术可以将罕见病的确诊几率提高三倍。这项前沿技术现在已经走出实验室,应用于遗传病检测。加文研究所主任、约翰·马蒂克教授认为,这项技术的普

官方叫停“基因测序”因未获批-无关技术

  日前,国家食药监总局和国家卫生计生委联合发出通知,要求在相关的准入标准、管理规范出台以前,任何医疗机构不得开展基因测序临床应用,已经开展的,要立即停止。官方给出的原因是,目前国内使用的基因测序仪及相关试剂、软件,均未获得国家对医疗器械的审评审批,属于“违法医用”。   什么是基因测序? 这一技

北大生科院PNAS发布单细胞测序新技术

  来自北京大学生命科学学院等处的研究人员发表了题为“Microfluidic single-cell whole-transcriptome sequencing”的文章,开发出了一种新型微流控单细胞全转录测序新方法,这种方法有效地消除转录组高度动态特性所带来的测量差异,提高单细胞全转录组分析的准

中国首个基因测序技术与产业联盟成立

  9月9日,中国基因测序技术与产业联盟(Chinese Gene Sequencing Technology and Industry Alliance,CSTIA)在北京正式成立并设立联盟办事机构。  “中国基因测序技术与产业联盟”由国内从事基因测序技术研究开发的知名学者专家和行业领军企业发起成

基因诊断技术的DNA测序的相关介绍

  目前在实验室手工测序常用Sanger双脱氧链终止法。Sanger法就是使用DNA聚合酶和双脱氧链终止物测定DNA核苷酸序列的方法。它要求使用一种单链的DNA模板或经变性的双链DNA模板和一种恰当的DNA合成引物。其基本原理是DNA聚合酶利用单链的DNA模板,合成出准确互补链,在合成时,某种dNT

赵可吉博士Nature发布重要测序技术

  DNase I超敏感位点(DHS)是对DNaseⅠ高度敏感的活性染色质区域。哺乳动物细胞的DHS定位,能够提供转录调控元件和染色质状态的重要信息,一直是科学家们的研究热点。DNase测序(DNase-seq)是进行全基因组DHS分析的常用方法,不过DNase-seq需要数百万细胞,大大限制了该技

SNP检测技术(测序、taqman探针和snp芯片)

snp现有检测技术有主要的3大类别1、测序 主要发现新的snp位点和比较集中的snp位点,如hla区域,但成本较高,工作量大,不适合大样本做疾病关联分析。 2、taqman探针 结果比较可靠,国外文章也大量应用,不过对于国内成本偏高,同类还有snpshot技术,abi和贝克曼

DNA芯片技术和RNA测序有啥不同?

 日本推理小说家东野圭吾的作品《白金数据》中描述了这样一个未来世界:日本政府秘密建立名为“白金数据”的数据库。该库搜集了全国人民的DNA数据,通过对犯罪分子留在现场的毛发、体液等证物进行比对,警方可以高效、快速、准确锁定真凶。借助“白金数据”的帮助,一个检举率100%、冤案率0%的理想法制社会构建完

单细胞测序技术(single-cell-sequencing)-综述(一)

单细胞生物学最近几年是非常热门的研究方向。在这一领域中,最前沿的则是单细胞测序技术。传统测序方法一次处理成千上万个细胞,得到的变异水平也是成千上万个细胞的平均后水平。但是,就如同世界上没有完全相同的两片树叶一样,没有两个细胞是完全相同的。所以,单细胞测序对于研究单个细胞就显得至关重要。单细胞测序可以

单细胞测序技术(single-cell-sequencing)-综述(二)

DroNC-seq10月,Broad研究所张锋教授团队在Nature Methods上发表题为“Massively Parallel Single-Nucleus RNA-Seq with DroNc-Seq (doi: 10.1038/nmeth.4407)” 的文章,提出了一个新的测

全面解读第四代测序技术

纳米孔测序技术(又称第四代测序技术)是最近几年兴起的新一代测序技术。目前测序长度可以达到150kb。这项技术开始于90年代,经历了三个主要的技术革新:一、单分子DNA从纳米孔通过;二、纳米孔上的酶对于测序分子在单核苷酸精度的控制;三、单核苷酸的测序精度控制。目前市场上广泛接受的纳米孔测序平台是Oxf

三代测序技术和原理介绍(二)

Solid技术  Solid测序技术是ABI公司于2007年开始投入用于商业测序应用的仪器。它基于连接酶法,即利用DNA连接酶在连接过程之中测序(图6)2,4。它的原理是:   图6-a. Solid测序技术  (1)DNA文库构建  片段打断并在片段两端加上测序接头,连接载体,构建单链DNA文库。

菌种检定16S-rDNA测序技术介绍

一、简介微生物鉴定是指借助现有的分类系统,通过对未知微生物的特征测定,对其进行细菌、酵母菌和霉菌大类的区分,或属、种及菌株水平确定的过程,它是药品微生物检验中的重要环节。菌种鉴定的常规手段包括形态学观察、生理生化特性鉴定和分子生物学鉴定等,而通过分子生物学的方法进行菌种鉴定不受生长培养基或分离物活性

干货:三代测序技术和原理(二)

Solid技术  Solid测序技术是ABI公司于2007年开始投入用于商业测序应用的仪器。它基于连接酶法,即利用DNA连接酶在连接过程之中测序(图6)2,4。它的原理是:  (1)DNA文库构建  片段打断并在片段两端加上测序接头,连接载体,构建单链DNA文库。  (2)Emulsion PCR 

北大生科院PNAS发布单细胞测序新技术

  来自北京大学生命科学学院等处的研究人员发表了题为“Microfluidic single-cell whole-transcriptome sequencing”的文章,开发出了一种新型微流控单细胞全转录测序新方法,这种方法有效地消除转录组高度动态特性所带来的测量差异,提高单细胞全转录组分析的准

-2014年测序、克隆、细胞分析等技术展望

  新一代测序   新一代测序(NGS)技术一路走来,逐渐褪下其神秘面纱,进入越来越多的实验室。随着时间的推移,NGS系统从“高端大气上档次”的大型平台演化成满足个性化需求的台式测序仪。MiSeq、Ion Torrent和454 GS Junior这些仪器的上市,也推动了测序平台的普及。同

单细胞测序技术未来的发展方向

单细胞测序技术未来可能的发展方向包括:多模态单细胞分析整合多种类型的信息,如同时测量基因表达、染色质可及性、蛋白质水平、代谢物含量等,以更全面地描绘单细胞的状态。更高通量和更低成本能够在更短的时间内处理更多的单细胞,同时降低技术成本,使其更广泛地应用于基础研究和临床实践。时空分辨率提升不仅了解细胞的

单细胞测序技术的检测下限是多少?

单细胞测序技术的检测下限会受到多种因素的影响,包括所采用的具体技术方法、样本质量、实验操作等。一般来说,单个细胞中的 DNA 含量非常少,例如人类单个细胞的 DNA 含量仅有 6pg(皮克),而基因组建库的下限通常为 1ng(纳克),这就需要在单细胞测序建库前对全基因组进行扩增。目前常用的基因组扩增

简述全基因组测序的技术路线

  全基因组测序的技术路线:提取基因组DNA,然后随机打断,电泳回收所需长度的DNA片段(0.2~5Kb),加上接头, 进行DNA簇(Cluster)制备,最后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法对插入片段进行测序。然后对测得的序列组装成Contig,通

-Science:宏基因组学测序技术

  宏基因组学技术(Metagenomic approaches)正快速拓宽我们对微生物代谢能力(microbial metabolic potential)的认识。   长期以来,对微生物(microorganism)功能开展的研究主要依赖的都是以在实验室里培养的单一物种(individua

基因测序格局初定,得技术者得天下

   据统计,中国每4秒就有一个1个新生儿出生,对应这个数字,中国孕妇是一个十分庞大的群体。多年前,为了防止新生儿出生缺陷,准妈妈们选择羊水穿刺的方式进行产前检查,但是这种方式准确率较低,且存在10%的流产风险,这令不少家庭望而却步,而如今依托于基因检测技术的无痛产检得到越来越多人的追捧。  目前将

NGS凭什么是应用最广的测序技术?

“基因测序技术”作为生物科学的重要技术一直都带着一层神秘的面纱。从1984年开始,来自六个国家的数千名科学家共同开启了人类基因组计划,目标是完成一个人类基因组30亿字节的测序。该计划用第一代DNA测序技术,耗时17年,耗资30亿美金,最终于2003年绘制了首个人类全基因组图谱。这是人类首次完成人体生

基因测序技术未来40年的发展展望

1977年,Science的两篇论文描述了第一种用于确定DNA片段中化学碱基顺序方法。而在这些文章发表之前,分子生物学家已经能够排列片段。四十年过去了,如今,DNA测序技术正以惊人的速度向前发展。在过去十年中,高通量测序技术使数据生成呈指数级增长态势。 由此产生的大量数据在基础生物学领域的应用已经产

单细胞测序技术的应用案例有哪些?

以下是一些单细胞测序技术的应用案例:  1. 肿瘤研究:    - 描绘肿瘤细胞的异质性,识别不同的肿瘤细胞亚型,了解肿瘤的发生、发展和转移机制。    - 发现肿瘤微环境中的免疫细胞组成和状态,为免疫治疗提供靶点和策略。  2. 神经科学:    - 解析大脑中不同类型神经元的基因表达