IHC原理、操作及注意事项

免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的一项技术。IHC的实验流程和方法总体不难,但做出漂亮的染色结果却不容易,所谓“细节决定成败”,也正是IHC实验中尤为重要的关键点。那么“细节”主要是哪一些呢?下面就为您一一道来。(以石蜡组织切片为例介绍) 1.标本固定固定的目的除了使细胞内的蛋白质凝固,减少或终止内源性或外源性细胞内分解酶的反应,防止组织细胞自溶,更是为了保存组织或细胞内的抗原性,使抗原不失活,不发生弥散。不同的抗原对固定液耐受程度不同,因而要选择合适的固定剂。现在常用的固定剂有中性甲醛液,4%多聚甲醛-磷酸盐缓冲液。有些固定剂对特殊组织有更好效果,如苦味酸对于头皮、指甲固定有软化效果,Helly固定液对于胰岛和垂体效果较好,PLP固定液......阅读全文

石蜡切片与冰冻切片

一、组织和细胞标本类型:(一) 组织标本类:1、 石蜡切片:组织形态保存好2、 冰冻切片:抗原性保存好(二)细胞标本类:1、组织印片 2、细胞培养片(细胞爬片) 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。2、组织取材注意事项:(1)标本新鲜:组织要求离体后30min

免疫检查点抑制剂和PDL1抗体检测试剂相关情况概述

近年来,肿瘤免疫治疗迅速发展,以抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体为代表的免疫检查点抑制剂成为临床研究的热点。2018年,两个免疫检查点抑制剂纳武利尤单抗(nivolumab)和帕博利珠单抗(pembrolizumab)相继在我国获准上市。2019年,与免疫检查点抑制剂配套使用的一个PD-L1抗体检测

膀胱癌组织中bFGF蛋白的表达及其临床意义

【摘要】 目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与膀胱癌发生发展的关系。方法:应用免疫组化方法检测了48例膀胱癌存档标本和4例正常膀胱组织中bFGF的蛋白表达。结果:48例膀胱癌存档蜡块中有23例阳性,浸润性癌显著高于浅表癌(P<0.01),除G1和G2之间外各分级阳性率之间差异也有显著性。阳

微卫星不稳定性(MSI)检测概述

  一、微卫星不稳定性(MSI)简介  微卫星不稳定性(Microsatellite Instability,MSI),是指由于在DNA复制时插入或缺失突变引起的微卫星(Microsatellite, MS)序列长度改变的现象,常由错配修复功能(Mismatch repair, MMR)缺陷引起。M

基因检测助力肿瘤精准医疗,精准定位FGFR抑制剂敏感的患者人群

  成纤维细胞生长因子受体(FGFR)在多种恶性肿瘤中存在异常激活,并与肿瘤的发生发展密切相关,已成为目前“不限癌种”的热点研究靶标之一。目前国外已有靶向FGFR的抑制剂上市,用于胆管癌、尿路上皮癌等适应症。佩米替尼作为国内首款获批上市的FGFR抑制剂,填补了国内胆管癌靶向治疗的空白,也开启了胆管癌

免疫组化病理诊断(一)

在临床病理诊断中,免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段,从20世纪70年代开始,免疫组化技术就应用于病理诊断,对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响,同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识,提高了病理诊断与研究水平。但是,随着免疫组化的广泛应用,发现免疫组化技术存在一些

免疫组织化学的常见问题

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

免疫组织化学的常见问题有哪些

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

金域、腾讯和舜宇光学共同研发的智能显微镜获批入临床

  记者从金域医学获悉,由金域医学与腾讯AI Lab、舜宇光学科技共同研发的智能显微镜,近日已获得NMPA颁发的注册证,成为国内首个获准临床用智能显微镜产品。金域医学病理医生使用智能显微镜读片。林捷/供图  该显微镜可以在免疫组织化学(IHC)场景中为病理医生的镜下判读提供精准的定量分析。在确定视野

关于免疫组织化学实验的相关问题

  免疫组化实验所用的抗体  免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫血清,是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。  免疫组化实验所用的组织和细胞

亲和免疫组织化学实验

实验方法原理 ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法,是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与

SABC法亲和素与生物素系统的操作流程

实验概要本实验介绍了SABC法亲和素与生物素系统的操作步骤。实验原理SABC法或称S-P法、LSAB法,它是采用生物素标记的第二抗体与结合有HRP或AKP酶的链霉亲和素(streptavidin)连接来测定细胞及组织中的抗原。链霉亲和素是一种从链霉菌培养物中提取的蛋白质,相对分子质量60000,不含

如何在Western-Blot中选择一抗?

说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体,本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型,如鼠抗,兔抗,羊抗等等,那么在使用时我们应该怎么选择呢?检测任何一种目的蛋白都

亲和免疫组织化学实验——ABC-法

实验方法原理ABC 法即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法,是许世明于 1981 年在 BAB 法和 LAB 法的基础上改良的,其特点是利用亲和素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。ABC 法与 LAB 法、BAB 法不同的是第一抗体不为生物素所标记,生物素标记的第二抗体与 ABC 复合物

云序Mol-Cancer成果教您如何写出外泌体的10分文章(三)

(5)垂死的肿瘤细胞释放的PGE2促进TRC的增殖如前所述,垂死的肿瘤细胞能促进报告细胞的增殖,这暗示着TRCs被除了外泌体miR-194以外的物质驱使加速了增殖。众所周知,受辐射的垂死肿瘤细胞还释放了PGE2,这是一种脂质代谢产物,被认为是化学放疗后肿瘤重生的重要介质。因此,作者通过ELISA定量

抗体制备中你最关心的问题

  抗体制备是免疫学研究的基础。制备一个合适的抗体将会决定着免疫实验的成败。抗体制备过程涉及到很多个方面,比如免疫原如何设计、免疫过程的优化、目的抗体筛选、抗体纯化、应用鉴定等。接下来我们将会对一些关键的技术难点进行解答。   1. 免疫原是如何设计的?有什么原则?   解答:免疫原可以是天然蛋

布鲁克发布新型4DProteomics™-timsTOF技术

  A. 基于人工智能的TIMSquant™软件,实现CCS-enabled非标记定量,可扩展到成千上万的样本;  B. midia-PASEF®采集模式,早期能够用在超灵敏的 timsTOF Ultra 上进行免疫肽组学和蛋白质翻译后修饰(PTMs)研究,实现在dia-PASEF中的类似DDA母离

免疫组化--病理诊断-(一)

在临床病理诊断中,免疫组织化学(IHC)是一种很重要的技术和手段,从20个世纪70年代开始,免疫组化技术就应用于病理诊断,对于诊断肿瘤、肿瘤分类、判断预后产生了巨大的影响,同时也扩展了人们对于各种疾病及肿瘤形成过程的认识,提高了病理诊断与研究水平。但是,随着免疫组化的广泛应用,发现免疫组化技术存在一

Immunohistochemistry-Protocol-for-Frozen-Sections

实验概要The  following is a general procedure guide for preparation and staining of  acetone-fixed frozen tissues using a purified, unconjugated primary  

Immunohistochemistry-Protocol-for-Frozen-Sections

实验概要The  following is a general procedure guide for preparation and staining of  acetone-fixed frozen tissues using a purified, unconjugated primary  

研究人员基于FFPE样本构建甲基化图谱预测癌症原发部位

  9月14日,《自然-通讯》(Nature Communications)在线发表了中国科学院分子细胞科学卓越创新中心石建涛组完成的最新合作研究成果(DNA methylation profiling to determine the primary sites of metastatic can

标记羊抗兔IgG保存策略

辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗兔IgG应用:WB(1:1000 - 1:50000)、ELISA(1:500 - 1:10000) IHC(1:50 - 1:500)。 由于具体实验中检测方法的灵敏度,温度及孵育时间等因素均可影响抗体最适工作浓度,所以实验人员进行特定实验时,需根据具体情况

关于淋巴系肿瘤实验诊断的实验室检查介绍

  1.形态学  (1)血象:当肿瘤细胞进入外周血时,根据淋巴系肿瘤的不同类型,原淋巴细胞、幼淋巴细胞和淋巴细胞的数量有差异,可有白细胞增高,易见白细胞的退化细胞,轻至中度贫血和(或)血小板减少。  (2)骨髓象:原幼淋巴细胞>20%可诊断为急性淋巴细胞白血病(ALL),。一般情况下,骨髓有核细胞可

SPA-在免疫组化中的应用——PAP-法

SPA 可为多种示踪物(如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白)所标记,应用较广泛的为酶标记 SPA 和金标记 SPA 技术。标记 SPA 常用的酶为 HRP,可应用于间接法染色,SPA 在 PAP 法中可代替桥抗体。实验方法原理SPA 除与标记物结合后用于代替第二抗体外,其本身可作为桥抗体用于 PAP 染色

安捷伦-PDL1-检测试剂盒批准,可扩展用于HNSCC伴随诊断

2022 年 11月 17日,北京—— 安捷伦科技有限公司(纽约证交所:A)近日宣布,其 PD-L1 检测试剂盒(免疫组织化学法)PD-L1 IHC 22C3 pharmDx获批准,可扩展用于辅助鉴别可使用 KEYTRUDA®(帕博利珠单抗)治疗的头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者。安捷伦全球副总裁

原位杂交组织化学实验技术5

(8)荧光显示:  ①生物素标记DNA探针的荧光显示。  1)应用PBS含5%无脂干奶(5μl每张盖片),也可用1%牛血清白蛋白(BSA)-PBS覆盖孵育5min室温,以封闭非特异性结合部位。  2)移除多余液体,加抗生素-FITC(5μg/ml在PBS含5%奶粉或1%BSA,5μl/cm2)。在湿

肿瘤个体化治疗检测技术指南

个体化治疗检测技术指南(试行)》包括什么内容?《肿瘤个体化治疗检测技术指南(试行)》主要内容包括肿瘤个体化治疗检测分析前、分析中和分析后质量保证规范,从而使临床医生能够了解所开展检测项目的临床目的、理解检测结果的临床意义及对治疗的作用,并指导临床个体化治疗,提高疗效,减轻不良反应,促进医疗资源的合理

安捷伦获2017科学家选择奖之最佳新型临床实验室产品奖

奖项授予安捷伦 IQFISH 肺癌基因组合   2017年9月11日,北京——安捷伦科技公司(纽约证交所: A)荣获 2017 年度科学家选择奖之最佳新型临床实验室产品奖: IQFISH 肺癌基因组合。 IQFISH 肺癌基因组合可使病理学实验室将高质量的快速 FISH(荧光原位杂交)轻松整合到

Zebrafish-whole-mou...

实验概要Whole mount staining of Zebrafish embryos, now commonly used, requires extra steps to fix and permeabilize to ensure the egg membrane is perme

罗氏新款双原位杂交伴随诊断试剂盒-致力个性化医疗

  罗氏(Roche)近日宣布推出新的VENTANA HER2 Dual ISH DNA Probe Cocktail assay(VENTANA HER2双原位杂交DNA探针鸡尾酒检测法),用于检测乳腺癌和胃癌中的HER2生物标志物。HER2(人表皮生长因子受体2)是乳腺癌和胃癌的重要生物标志物,