DNA&RNA寡聚核苷酸的准确分子质量测定（一）
1. 前言随着人们对核酸结构和功能的深入了解,特异性结合或者裂解致病基因的核酸药物也逐渐成为了药物研究的新热点, 核酸药物的作用效率高、应用范围广，可以对传统药物进行补充，并且在前期的临床诊断中也可以起到重要的指示作用。核酸药物主要是指各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸（RNA）或者寡聚脱氧核糖核甘酸（DNA），主要作用于基因水平，在信息流传递的上游阶段起作用，效率比较高，且通过结合或者裂解特异性的致病基因，而对其它基因没有任何影响。在信息流的传递过程中，信号逐级放大，一个基因可以转录出多个 mRNA，一个 mRNA 又可以翻译出多个蛋白质，所以与作用于信息流最终产物-蛋白质相比，核酸药物具有广泛的应用前景。目前的核酸药物可以与一些转录因子、凝血酶、人类免疫缺陷病毒、双链 DNA 的特殊部位等结合，从而抑制 DNA 的复制或者蛋白、受体等的结合，从而干扰和阻止病毒或者错误基因和蛋白的表达和放大，因此在基因药物的......阅读全文
DNA－－RNA－寡聚核苷酸的准确分子质量测定（一）
1. 前言随着人们对核酸结构和功能的深入了解,特异性结合或者裂解致病基因的核酸药物也逐渐成为了药物研究的新热点, 核酸药物的作用效率高、应用范围广，可以对传统药物进行补充，并且在前期的临床诊断中也可以起到重要的指示作用。核酸药物主要是指各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸（RNA）或者寡聚脱氧核糖核
NA－－RNA－寡聚核苷酸的准确分子质量测定（三）
与低分辨的实验相比，在保持上样量和色谱条件不变的前提下，仅仅改变质谱采集的分辨率，可以看到寡聚核苷酸的色谱保留时间不变，基本在 3.52 min 出峰，不过随着质谱检测器分辨率的提高，原始质谱图发生了显著的变化，如下所示，当使用线性离子阱 LTQ 作为质量检测器时，只检测到一个大包峰，无法分
NA－－RNA－寡聚核苷酸的准确分子质量测定（二）
3. 结果与讨论3.1 低分辨 LTQ 质量检测器测定寡聚核苷酸的分子质量3.1.1 原始色谱质谱图 采用 5 min 的梯度分析，离子阱采集数据，寡聚核酸主要在 3.53 min 出峰。 3.1.2 原始质谱图 将上图中 3.53 min 附件的寡聚核苷酸谱图信号平均后，得到该寡聚核苷酸的平均
测定蛋白质相对分子质量最准确方法
1。根据化学组成测定最低分子量用化学分析方法测出蛋白质中某一微量元素的含量，并假设分子中只有一个这种元素的原子，就可以计算出蛋白质的最低分子量。2. 渗透压法当蛋白质浓度不大时，可用以下公式： M=RT/lim(∏/C) 其中R是气体常数(0.082)，T是绝对温度，∏是渗透压（以大气压计），浓度单
如何检测、评价提取的DNA、RNA质量
4.如何检测、评价提取的DNA、RNA质量，计算提取的DNA、RNA浓度：一般通过OD260/OD280来判断他们的含量，纯DNA的比值一般在1.8，大于1.8，小于2时可能有RNA污染，在1.9到2.0时RNA纯度高，小于1.8时可能有蛋白质污染，大于2.0时可能在提取过程中的化学物质残留。提取原
一种快速鉴定RNA－质量的方法
提 要: 目的 建立一种快速鉴定RNA 完整性的方法。方法 在常规琼脂糖凝胶电泳的基础上,结合甲醛变性琼脂糖凝胶电泳加以改进而成。结果 提取的总RNA 用此方法电泳后可得到28S、18S、5. 8S(5S) 三条清晰的rRNA 条带。结论 此方法可以达到对RNA 完整性进行快速鉴定的目的。 随着分子
用－T4－DNA连接酶连接RNA分子
实验材料 T4DNA 连接酶 T4 多聚核酸激酶 RNA 供体 受体 寡核苷酸 cDNA 模板试剂、试剂盒 10X 连接缓冲液 [Y32P]ATP 无 RNase 水 l0 mmol LATP RNasin。 无 RNase 的 DNase。 5XTBE 2X 变性胶上样缓冲液 TE仪器、耗材 真空
DNA－and－RNA－EXTRACTIONS
A protocol / method / schedule /procedure for extraction / isolation of both DNA and RNA from the same material typically plant leaf / leaves(See also
分子克隆常用技术简介（核酸纯化、浓缩、电泳和DNA、RNA的...
分子克隆常用技术简介（核酸纯化、浓缩、电泳和DNA、RNA的定量）一、核酸的纯化在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的
3.6.1－用－T4－DNA连接酶连接RNA分子
T4 DNA 连接酶可将双链复合物缺刻连接，其中包括 RNA-DNA 杂合链及 RNA-RNA 杂合链。实验材料T4DNA 连接酶T4 多聚核酸激酶RNA 供体受体寡核苷酸 cDNA 模板试剂、试剂盒10X 连接缓冲液[Y32P]ATP无 RNase 水l0 mmol LATPRNasin。无 RN
小分子RNA
RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比我们早前设想的更为重要。RNA 干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化/替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，
非编码RNA准确预测精子质量，有望提高试管婴儿成功率
近几十年来，辅助生殖技术（ART）已广泛用于治疗人类不孕症。然而，只有大约30％的体外受精（IVF）和卵胞浆内单精子注射（ICSI）能够成功怀孕。经典的精液质量参数，如精子密度、形态和运动性，不足以有效评估精子的生育能力。 因此，非常需要一种用于从具有正常精液参数的样品中区分高质量精子样品的方
微卫星DNA分子标记及其应用（一）
微卫星（Microsatellite，MS）又称短串联重复（Short Tandem Repeats，STR）或简单序列重复（Simple Sequnce Repeat，SSR），是指基因组中以少数几个核苷酸（多数为2-4个）为单位多次串联重复组成的长达几十个核苷酸的序列。其中最常见的是双核
如何确认RNA的质量？
1）检测RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景（溶液浑浊度）、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的，我们只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0时，我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的，不过要注意，当你用Tris作为缓
如何确认RNA的质量
1、RNA胶（凝胶成像）检测。例如：原核生物的核糖体所含的rRNA有5S、16S及23S三种。在胶上就有三条明显大小不一的条带。2、凝胶迁移分析。可以用来研究RNA-蛋白相互作用。基本原理是：结合了蛋白的RNA在凝胶中的迁移速率更慢，因而可以区分出结合蛋白与未结合蛋白的RNA条带。3、RNA-seq
TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质（一）
TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA
DNA提取方法洗涤－DNA（或－RNA）
当裂解物通过硅胶膜进行离心分离,现在所提取的 DNA 或 RNA 应该与柱子结合,杂质、细胞蛋白和多糖应该已经通过了。 但是,膜仍然被残留的细胞蛋白质和盐弄脏。如果样品来自植物,仍然会有多糖,也许一些色素留在膜上,或者如果样品是血液,膜可能会被染成棕色或黄色。洗涤步骤用于去除这些杂质。通常有两次洗涤
小分子RNA的简介
MicroRNA (miRNA) 是一类内生的、长度约为20-24个核苷酸的小RNA，其在细胞内具有多种重要的调节作用。每个miRNA可以有多个靶基因，而几个miRNA也可以调节同一个基因。这种复杂的调节网络既可以通过一个miRNA来调控多个基因的表达，也可以通过几个miRNA的组合来精细调控某
研究发现评估IVF中精子质量的小RNA分子标志物
4月9日，国际学术期刊Cell Discovery 在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所吴立刚研究组、上海市计划生育科学研究所施惠娟实验室和复旦大学附属妇产科医院上海集爱遗传与不育诊疗中心陈国武实验室的合作研究成果“Identification of small noncoding R
Cell－Discovery：评估IVF中精子质量的小RNA分子标志物
国际学术期刊Cell Discovery在线发表了中国科学院生物化学与细胞生物学研究所吴立刚研究组、上海市计划生育科学研究所施惠娟实验室和复旦大学附属妇产科医院上海集爱遗传与不育诊疗中心陈国武实验室的合作研究成果“Identification of small noncoding RNAs as
将DNA导入酵母细胞实验_单链高分子质量载体DNA的制备
实验材料待转化的酵母菌株试剂、试剂盒 DNA (从鲑鱼精巢制备的DNA III型钠盐 Sigma #D1626)l×TE缓冲液 pH 8.0 缓冲液平衡酚1: 1 (W)酚 氯仿氯仿3 mol L 乙酸钠 pH 5.2100%乙醇 冰冷仪器、耗材超声波发生器实验步骤1) 将DNA溶于pH 8.0的1
RNA和DNA病毒的区别
DNA病毒和RNA病毒的区别，主要是病毒核酸的类型不同，DNA病毒的病毒核酸是DNA，RNA病毒的病毒核酸是RNA。RNA病毒的复制过程比较独特，由于遗传信息直接保存在RNA上，因此复制过程通常发生在细胞质内。RNA病毒是用它们自己的RNA复制酶来对基因组进行复制，但是DNA病毒基因组的复制发生在细
RNA测序，真的有那么准确吗？
RNA测序是遗传学家工具箱中的一种常用工具。利用RNA测序，研究人员能够定量地检测各种生物体的基因表达，从而更好地了解细胞中正在发生的事情以及特定基因的功能。由于在药物发现、疾病诊断和基因鉴定中具有潜在作用，RNA测序的应用似乎无极限。RNA测序的准确性早在2014年，《Nature Biotech
紫外吸收法测定核酸浓度与纯度
实验概要学习测定DNA或RNA的浓度与纯度。实验原理核酸分子中的碱基集团含有共轭双键，它们对紫外光有强烈的吸收。核酸的最大吸收波长在260 nm，吸收低峰在230 nm。可以利用核酸的这一特性对其浓度进行测定。在波长260 nm下，A260=1时，双链DNA的含量为50 µg/ml，单链DN
新方法可批量生产高质量DNA分子
据物理学家组织网6月3日(北京时间)报道，瑞典卡罗林斯卡研究所和美国哈佛大学合作开发出一种用于制造短的单链DNA分子的新方法，可以解决许多目前生产中的问题。新方法对DNA纳米技术以及开发由DNA片段组成的药物都很有价值。相关论文发表在最近的科学期刊《自然·方法学》上。 短的单链D
RNA－和－DNA－提取：洗脱
DNA 提取方案的还剩余IDE步骤步就是从硅胶中释放纯 DNA 或 RNA。对于 DNA 制备,通常使用 pH 值为 8-9 的 10 mM Tris。DNA 在弱碱性 pH 值下更稳定,在缓冲液中溶解得更快。即使对于 DNA 颗粒也是如此。水的 pH 值往往较低,低至 4-5,并且高分子量 DNA
DNA和RNA提取原理
TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚／SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质．TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，R
DNA、RNA斑点杂交
实验概要将RNA 或DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，同探针进行杂交，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为斑点印迹。与Southern 及Nouthern 印迹法相比，其优点是简单、迅速，可在一张膜上同时进行多个样品的检测，特别是对于核酸粗提样晶的检测。缺点是不能鉴定所测基
高质量RNA的标准
real time RT-qPCR 是检测样本中特定基因表达量的有效方法，包含逆转录步骤和定量PCR步骤。好的开始是成功的一半，获得高质量的、能正确反应样品中转录情况的RNA，对于其后的定量结果，自然是非常重要的。Mikael Kubista，教授, R&D TATAA Biocenter主任：RN
小分子RNA的特征介绍
已经被鉴定的miRNAs据推测大都是由具有发夹结构，约70个碱基大小形成发夹结构的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成的，有5’端磷酸基和3’羟基，大小约21—25nt的小分子RNA片段，定位于RNA前体的3’端或者5’端。 3个研究小组分别从线虫、果蝇和Hela细胞中鉴定的100个新mi