DNA&RNA寡聚核苷酸的准确分子质量测定（一）
1. 前言随着人们对核酸结构和功能的深入了解,特异性结合或者裂解致病基因的核酸药物也逐渐成为了药物研究的新热点, 核酸药物的作用效率高、应用范围广，可以对传统药物进行补充，并且在前期的临床诊断中也可以起到重要的指示作用。核酸药物主要是指各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸（RNA）或者寡聚脱氧核糖核甘酸（DNA），主要作用于基因水平，在信息流传递的上游阶段起作用，效率比较高，且通过结合或者裂解特异性的致病基因，而对其它基因没有任何影响。在信息流的传递过程中，信号逐级放大，一个基因可以转录出多个 mRNA，一个 mRNA 又可以翻译出多个蛋白质，所以与作用于信息流最终产物-蛋白质相比，核酸药物具有广泛的应用前景。目前的核酸药物可以与一些转录因子、凝血酶、人类免疫缺陷病毒、双链 DNA 的特殊部位等结合，从而抑制 DNA 的复制或者蛋白、受体等的结合，从而干扰和阻止病毒或者错误基因和蛋白的表达和放大，因此在基因药物的......阅读全文
高质量－DNA－的纯化实验
实验材料 乳腺瘤组织 试剂、试剂盒 EDTA 异丙醇裂解缓冲液 细胞核裂解缓冲液
高质量－DNA－的纯化实验
应用经过修改的 Miller 等（1988) 的盐沉淀方法纯化 DNA，不使用酚和氯仿，比较温和，有效防止了长的染色体 DNA 的断裂。在第 9 章中讲述了另一种 DNA 纯化的方法。这种方法可以沉淀细胞核，已被成功地用于对血液样品、培养的细胞和乳腺瘤组织DNA 的纯化。本实验来源于 PCR 实验指
高质量－DNA－的纯化实验
实验材料 乳腺瘤组织试剂、试剂盒 EDTA异丙醇裂解缓冲液细胞核裂解缓冲液Triton 裂解缓冲液仪器、耗材 水浴锅破璃棒实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂EDTA，100 mmol/L异丙醇裂解缓冲液10 mmol/LTris-HCl1mmol/LEDTA150 mmol/LNaCl0.5
小分子RNA的识别方法的介绍
多个研究小组采用生物化学结合以及生物信息学的方法开展对miRNAs的研究工作。由于据推测都是由Dicer酶降解RNA得到的，21—23个碱基大小、有5’端磷酸基和3’羟基的RNA片段，有的实验室采用改良的定向克隆方法来筛选具有相同特征的小分子——筛选一定大小的RNA分子，连接到3’和5’的适配子
细胞化学词汇核仁小分子RNA
中文名称：核仁小分子RNA外文名称：small nucleolar RNA定 义：核仁小RNA（small nucleolar RNA），是近来生物学研究的热点，由内含子编码，分布于真核生物细胞核仁的小分子非编码RNA，具有保守的结构元件。已证明有多种功能，主要参与rRNA的加工；反义s
分子遗传学词汇互补RNA
中文名称：互补RNA英文名称：complementary RNA定 义：能与另一条核酸(DNA或RNA)链互补的RNA分子。应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
分子遗传学词汇引物RNA
中文名称：引物RNA外文名称：primer定义：引物RNA是一小段单链DNA或RNA,作为DNA复制的起始点，存在于自然中生物的DNA复制。
生物检测常用仪器
各种规格的的单道和多道微量移液器。 1958年发明了世界第一只活塞微升移液器， 1960年获得该发明的ZL权。 其小型台式离心机风靡全世界各个实验室。高速冷冻台式离心机等产品以性能稳定而著称。离心容量从0.5ml到4×400ml不等，可满足不同的实验需求。 目前最稳定的普
能做工的DNA－分子马达面世
一项7月20日发表于《自然》的研究中，物理学家用DNA链构建了一个分子级马达，并可通过“拧紧”DNA“弹簧”来储存能量。该技术为旨在寻找合成化学和药物递送等领域应用的“DNA折纸术”提供了新技巧。研究团队成员之一、德国慕尼黑工业大学的生物物理学家Hendrik Dietz指出，这不是第一个以DNA为
DNA修复机制的分子机理
当DNA双链发生断裂时，细胞启动DNA破坏反应（DNA-damage response, DDR）。DDR的一个重要方面是被破坏的DNA位点的信号的反馈和修复因子的聚集。这项研究表明，在高等的真核生物中，DDR机制中向双链破坏位点不断的积聚作用依赖于组蛋白变体（histone varia
DNA分子的自发性损伤
DNA复制中的错误以DNA为模板按碱基配对进行DNA复制是一个严格而精确的事件，但也不是完全不发生错误的。碱基配对的错误频率约为10-1-10-2，在DNA复制酶的作用下碱基错误配对频率降到约10-5-10-6，复制过程中如有错误的核苷酸参入，DNA聚合酶还会暂停催化作用，以其3’-5’外切核酸酶的
DNA分子杂交的方法和过程
DNA分子杂交的基础是，具有互补碱基序列的DNA分子，可以通过碱基对之间形成氢键等，形成稳定的双链区。在进行DNA分子杂交前，先要将两种生物的DNA分子从细胞中提取出来，再通过加热或提高pH的方法，将双链DNA分子分离成为单链，这个过程称为变性。然后，将两种生物的DNA单链放在一起杂交，其中一种生物
DNA－同源重组的关键分子机制
蛋白质与植物基因研究国家重点实验室研究团队揭示 DNA 同源重组的关键分子机制 作为三大DNA代谢途径（DNA 复制、重组、损伤修复）之一，DNA同源重组（Homologous Recombination）是生命体的基本生物事件。它在细胞生长、减数分裂、配子形成、物种进化、DNA双链断裂修复、
分子克隆实验载体DNA的选择
①质粒：质粒是细菌染色体外遗传因子，DNA呈环状，大小为1-200千碱基对(kb)。在细胞中以游离超螺旋状存在，很容易制备。质粒DNA可通过转化引入寄主菌。在细胞中有两种状态，一是“紧密型”；二是“松弛型”。此外还应具有分子量小，易转化，有一至多个选择标记的特点。质粒型载体一般只能携带10kb以下的
3.6.2－用T4－RNA－连接酶连接－RNA－分子
T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。实验材料T4RNA连接酶供体RNA受体
准确度测定方法的评价
准确度(accuracy)是指测得结果与真实值接近的程度，表示分析方法测量的正确性。 由于“真实值”无法准确知道，因此，通常采用回收率试验来表示。生物药物分析中，常用标准添加法来计算回收率，即取已准确测定药物含量P (present)的真实样品(如人血浆样品等)，再加入药物标准品已知量A (
基于数字PCR的单分子DNA定量技术研究进展（一）
摘要 数字PCR是一项针对单分子目标DNA的绝对定量技术。该技术是将含有DNA模板的反应溶液分配到大量独立的反应室中并且发生扩增反应，通过统计反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。DNA样品在反应室中随机和独立分布是单分子成功扩增和准确定量D NA拷贝数的关键因素。本文综述了数字PCR的发展历
提高小麦面筋测定准确度的一点经验
国家对小麦面筋的测定，其方法早有规定。但由于小麦面筋的测定方法及操作、样品、设备等诸方面有所不同，对小麦中所含真实面筋数量具有一定的影响。比如传统的测量方法是采用水洗的方法来进行测定的，但是该方法误差大，操作繁琐，实用性不强，为准确判断面筋含量以及质量造成很大的影响，在经济不断发展的时代，人们对
RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子
实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制，因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的，不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察，也不适于进行文库的筛选。此外，体外制备 siRNA 分子的成本比较高，而且 siRNA
PCR实验的质量控制方法和措施
必须对DNA和RNA分析的各步进行质量控制,以避免假阳性和假阴性,保证测定结果的准确性和重复性。由于核酸扩增测定的高敏感性,所以标本制备、逆转录、扩增本身和产物分析中的每一步都要求有质控措施。 (1)标本制备: 常用琼脂糖凝胶电泳来检测DNA提取效果,以判断所提取的DNA是否发生降解。用常
最准确的基因表达检测方法——RNA测序遭遇“信任”危机？
当前，RNA测序成为了一种常用工具。 利用RNA测序，研究人员能够定量地检测各种生物体的基因表达，从而更好地了解细胞中正在发生的事情以及特定基因的功能。 RNA测序的准确性 早在2014年，《Nature Biotechnology》上发表了三篇文章。它们属于RNA测序质量控制（SEQC）
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影响蛋白酶 K 的活性。本实
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质
用甲酰胺从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA
实验方法原理 本方案是 Kupiec 等所述方法（1987) 的改良版本，包括用蛋白酶 K 消化细胞和组织，用高浓度甲酰胺分离 DNA-蛋白质复合物（染色质用火棉胶袋充分透析去除蛋白酶和有机溶剂等过程。甲酰胺是一种离子化溶剂，能分离蛋白质-DNA 复合物并使蛋白变性和释放，但他并不明显影
比单细胞DNA测序更胜一筹，准确描述单个癌细胞特征
德克萨斯大学医学院安德森癌症中心的研究人员研发了一种新技术，并由此构建了新型遗传模型，解释了一种常见的早期乳腺癌（乳腺导管内原位癌（ductal carcinoma in situ，DCIS））是如何发展为更具侵袭性的癌症形式。 这一研究成果公布在1月4日的Cell杂志上。 这项研究为了解D
核酸分离与纯化的设计与原则（二）
（四）核酸的浓缩、沉淀与洗涤随着核酸提取试剂的逐步加入，以及去除污染物过程中核酸分子不可避免的丢失，样品中核酸的浓度会逐渐下降，及至影响到后面的实验操作或不能满足后继研究与应用的需要时，需要对核酸进行浓缩。沉淀是核酸浓缩最常用的方法，其优点在于核酸沉淀后，可以很容易地改变溶解缓冲液和调整核酸溶液至所
常规组织样本核酸（DNA/RNA）提取纯化
20 分钟内快速纯化高品质，高产量，即用型 DNA（见图 20）多种规格可选择：Mini Kit 可处理 25 mg 组织，Micro Kit 可处理小于 10 mg 组织完全去除污染物和抑制剂可在 QIAcube 上进行自动化纯化表1 QIAamp DNA Mini Kit纯化各类样本的核酸产量样
分离DNA和RNA主要方法有哪些
盐析法 DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同 利用这一特点 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解 而使杂质沉淀 或者相反 以达到分离目的 DNA在NaCl溶液中的溶解度先增大后减小 在DNA溶解度最低时 DNA从溶液中析出 而其他杂质还留在溶液中 达到粗提取的目的酶水解法 采
DNA合成由RNA引物引发过程
DNA聚合酶不能发动新链的合成，只能催化已有链的延长；RNA聚合酶则不同，只要有模板存在，不需引物，就可以合成新RNA链。因此在体内先由RNA聚合酶合成RNA引物，DNA聚合酶再从RNA引物的3‘-OH端开始合成新的DNA链。催化RNA引物合成的酶称为引物合成酶。引物长度通常只有几个~10多个核苷酸
提取RNA中老混有DNA怎样去除
先用酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）抽提,这时候经常在样品中会有酚残留,所以之后再用氯仿：异戊醇（24：1）抽提,将酚抽干净,以免影响后续的实验.在抽提前还要在DNA样品中加入1/10体积的PH5.2的3M醋酸钠,增加盐浓度,以免DNA沉淀出来的量太少,都被抽走了.还有最好在抽提之前要把DNA样品