DNA&RNA寡聚核苷酸的准确分子质量测定(一)
1. 前言随着人们对核酸结构和功能的深入了解,特异性结合或者裂解致病基因的核酸药物也逐渐成为了药物研究的新热点, 核酸药物的作用效率高、应用范围广,可以对传统药物进行补充,并且在前期的临床诊断中也可以起到重要的指示作用。核酸药物主要是指各种具有不同功能的寡聚核糖核苷酸(RNA)或者寡聚脱氧核糖核甘酸(DNA),主要作用于基因水平,在信息流传递的上游阶段起作用,效率比较高,且通过结合或者裂解特异性的致病基因,而对其它基因没有任何影响。在信息流的传递过程中,信号逐级放大,一个基因可以转录出多个 mRNA,一个 mRNA 又可以翻译出多个蛋白质,所以与作用于信息流最终产物-蛋白质相比,核酸药物具有广泛的应用前景。目前的核酸药物可以与一些转录因子、凝血酶、人类免疫缺陷病毒、双链 DNA 的特殊部位等结合,从而抑制 DNA 的复制或者蛋白、受体等的结合,从而干扰和阻止病毒或者错误基因和蛋白的表达和放大,因此在基因药物的......阅读全文
基因探针的标记方法介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同时在3´端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分子DNA标记,(>100
简述探针标记方法
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´;端核苷酸,同时在3´;端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分
探针标记方法的主要类型介绍
①缺口平移标记法。利用的是DNA聚合酶I能修复DNA链的功能。该法先由DNaseI在DNA双链上随机切出切口,然后DNA聚合酶I沿缺口水解5´端核苷酸,同时在3´端修复加入被标记核苷酸,切口平行推移。缺口平移法快速、简便、成本相对较低、比活性相对较高、标记均匀,多用于大分子DNA标记,(>1000b
《自然—方法学》:一种分子海绵可吞食调控性RNA
研究人员在8月在线出版的《自然—方法学》上报告,通过基因工程合成的一种抑制剂能够吞食哺乳类动物细胞中的小分子RNA。抑制小分子RNA的活性有助于深入认识它们在正常发育和疾病中的功能。 与更长的信使RNA不一样,小分子RNA没有含有制造蛋白质的信息,它只拥有21个核苷酸,但这种序列却能调控信使RNA的
关于煤质量热仪的煤发热量测定准确性的探讨
精密度意味着平行性好,但不等于准确性好和再现性好,而准确性好,则可以保证精密度高,再现性好。环境温度与量热仪量热仪就结构而言,通常由内、外桶两层组成,外桶外面即为环境。当环境温度稳定在某个点不变,且外桶温度与环境温度充分一致时,量热仪测热体系的热容量是确定的,可以获得再现性和准确性都不错的测试结果。
关于煤质量热仪的煤发热量测定准确性的探讨
精密度意味着平行性好,但不等于准确性好和再现性好,而准确性好,则可以保证精密度高,再现性好。环境温度与量热仪量热仪就结构而言,通常由内、外桶两层组成,外桶外面即为环境。当环境温度稳定在某个点不变,且外桶温度与环境温度充分一致时,量热仪测热体系的热容量是确定的,可以获得再现性和准确性都不错的测试结果。
实验室分析仪器质谱分析的词汇准确测定的质量
以一定误差值测得的化合物质量数,如测量误差为5ppm。精确测定的质量通常也用于指具体的技术,而不是测量的质量。精确质量是化合物质量的准确理论值。
RNA-和-DNA-提取的纯度低的原因
如果提取的 DNA 被蛋白质污染(低 260/280),那么您可能开始时样品过多,而蛋白质没有完全去除或溶解。如果 DNA 的 260/230 比率不佳,则问题通常是结合或洗涤缓冲液中的盐分。确保使用最高质量的乙醇来制备洗涤缓冲液,如果问题仍然存在,请再次洗涤色谱柱。与其他样品相比,一些样品含有更多
如何说明DNA提取中有RNA污染
测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明
如何说明DNA提取中有RNA污染
测OD的方法是测不出RNA污染的,因为RNA的260/280的值和DNA近似.电泳检测的话,主要是看RNA的含量.换而言之,实际上最相关的是你提取的时候的组织的生长状况.一般来说,如果是分生组织等提取的DNA,会有较大的RNA污染.这时候你做电泳可以明确看到RNA的条带,而且有时候会比DNA带更为明
HIV是DNA病毒还是RNA病毒
RNA病毒HIV:人类免疫缺陷病毒直径约120纳米,大致呈球形。病毒外膜是类脂包膜,来自宿主细胞,并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41;gp41是跨膜蛋白,gp120位于表面,并与gp41通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形成的球形基质,以及蛋白p24形成的半锥形衣壳,衣壳在电镜下呈高电子密度。
核酸电泳(RNA电泳与DNA电泳)
(一)DNA的凝胶电泳:凝胶电泳是分子克隆的中心技术之一。琼脂糖凝胶用于分离大于200~1000bp的片段;操作简单、快速,且分离范围广,分辨率高。2.聚丙烯酰胺凝胶用于分离5-500bp的片段; 效果好、分辨率极高,相差1bp的DNA片断就能分开,能容纳相对大量的DNA ,用于核苷酸多态性的分析。
DNA和RNA定量利器:Qubit-4
新一代测序(NGS)实验中,我们需要将精确量的DNA文库分子上样到测序仪中。如果测序运行时的文库分子过多或过少,都会使数据质量受损。这不仅浪费宝贵的样本和试剂,也浪费我们和仪器的时间。对于芯片分析(Microarray)和实时定量PCR(qPCR)而言,精确测定样本中的DNA或RNA也是必需的。以往
如何确定RNA质量的经验谈
1)检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要注意,当你用Tris
如何评价总RNA或mRNA的质量?
一个细胞有很多种的RNA,如mRNA,rRNA,tRNA总RNA指的是一个细胞(一种生物)里面所有种类的RNA平时说的提取总RNA指的就是提取一个细胞里面的所有种类的RNA 。 mRNA的功能:把DNA模板链上的 碱基 序列 转录 为RNA分子上的碱基序列(mRNA),再从mRNA上
如何确定RNA质量的经验谈
如何确定RNA质量的经验谈 1)检测RNA溶液的吸光度 280、320、230、260nm下的吸光度分别代表了核酸、背景(溶液浑浊度)、盐浓度和蛋白等有机物的值。一般的,我们只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0时,我们认为RNA中蛋白或者时其他有机物的污染是可以容忍的,不过要注
用T4-RNA-连接酶连接-RNA-分子
实验材料 T4RNA连接酶 供体RNA 受体RNA 试剂、试剂盒 10XT4RNA连接酶缓冲液
用T4-RNA-连接酶连接-RNA-分子
实验材料 T4RNA连接酶供体RNA受体RNA试剂、试剂盒 10XT4RNA连接酶缓冲液无核酸酶的水FEGRNA酶抑制剂实验步骤 一材料与设备1)10XT4RNA 连接酶缓冲液:50 mmol/LTris (pH7,8),l0 mmol/L MgCl2,5 mmol/LDTT,1 mmol/L AT
DNA质量检测相关方法
对于基因组DNA质量检测主要包括:基因组DNA片段大小的确定,基因组DNA浓度的测定,基因组DNA纯度的测定三方面。用到的技术方法有:琼脂糖凝胶电泳(确定片段大小),使用紫外分光光度计测定基因组DNA溶液的OD值(浓度和纯度的测定,OD260/OD280应该在1.8左右,高了表明有RNA污染,低了表
核仁小分子RNA的定义和分布
核仁小RNA与其它RNA的处理和修饰有关,如核糖体和剪接体核小RNA、gRNA等。核仁小RNA是一个与特性化的非编码RNA相关的大家族。核仁小分子RNA调节细胞死亡,即便是血糖得到合适地调控,糖尿病病人经常会遭受并发症带来的痛苦,如心力衰竭(heart failure)、肾功能不全和免疫系统中B细胞
分子杂交技术RNA探针的相关介绍
许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP,则可合成RNA探针。RNA探针一般都是单链,它具有单链DNA探针的优
关于核仁小分子RNA的基本介绍
核仁小RNA(small nucleolar RNA),是近来生物学研究的热点,由内含子编码,分布于真核生物细胞核仁的小分子非编码RNA,具有保守的结构元件。已证明有多种功能,主要参与rRNA的加工;反义snoRNA指导rRNA核糖甲基化。 核仁小RNA与其它RNA的处理和修饰有关,如核糖
RNA干扰的分子机制首次被发现
日本东京大学官网近日宣布,东京大学和京都大学研究人员发现了核糖核酸干扰(RNAi)的分子机制。所谓核糖核酸干扰,就是单分子RNA分裂时出现的某种蛋白质合成受到抑制的现象。 由于借助RNAi可以关闭特定基因的表达,科学家一直期待RNAi现象在医疗领域得到应用。在先前研究中,科学家已经发现RNAi
关于小分子RNA的作用方式介绍
microRNA-RISC对靶基因mRNA的作用主要取决于它与靶基因转录体序列互补的程度,有三种方式。 第一种是切断靶基因的mRNA分子——miRNA与靶基因完全互补结合,作用方式和功能与siRNA非常相似,最后切割靶mRNA。在植物中,大部分miRNA都以这种方式,靶基因mRNA断裂后,无p
诱骗RNA结合蛋白不与癌细胞中的天然RNA分子结合
科学家也开始变得“狡猾”,开始用欺骗来对抗癌症。希伯莱大学的研究人员发明了一种诱饵,可以阻止癌症用于转移的RNA结合蛋白。 近年来,RNA结合蛋白在肿瘤生长中起着重要作用已经成为不争的事实。这些蛋白在所有细胞中都很活跃,尤其是在癌细胞中,它们与RNA分子结合,加速癌细胞的生长。不幸的是,目前还
相对分子质量的概念
相对分子质量(Relative molecular mass),是指化学式中各个原子的相对原子质量(Ar)的总和,用符号Mr表示,单位是1。对于聚合物而言,其相对分子量可达几万甚至几十万;相对分子质量最小的氧化物的化学式为H₂O。
如何准确测定磷含量
磷在酸性条件下与铝酸铁结合生成磷钼酸铵。此化合物经对苯二酚、亚硫酸钠还原成蓝色化合物——铝蓝。用分光光客计在波长660nm处测定铝蓝的吸光值,以定量分析磷含量。本方法最低检出限为2μg。
SDSPAGE电泳测定蛋白质相对分子质量
实验目的了解SDS-PAGE垂直板型电泳法的基本原理及操作技术。学习并掌握SDS-PAGE法测定蛋白质相对分子量的技术。实验原理 SDS-PAGE电泳法,即十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳法,。1.在蛋白质混合样品中各蛋白质组分的迁移率主要取决于分子大小和形状以及所带电荷多少。2.在聚丙烯酰
蛋白质的相对分子质量一般有多大
蛋白质是一种相对分子质量很大,变化范围也很大的生物分子,从几千到100万以上,比如:牛胰岛素相对分子质量5700,人的血红蛋白的相对分子质量则是64500。
提取RNA的时候总是有DNA污染
不管RNA还是RT之后做pcr,RNA都要变成cDNA之后才能做pcr。确定用DNase I处理过,电泳没有DNA条带了。一般RT用oligo dt或者随机引物做扩增。也有用你想的目的片段的扩增引物做RT的。你看看你现在用的是什么引物,换oligo试试,不行换成你的基因特异性引物做了RT之后,再来p