免疫荧光实验原理及操作

免 疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体 分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是:非特异性染色问题尚未完全解决,结果判定的客观性不足,技术程序也还比较复杂。荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM用试剂盒,有相当一部分即属于此类,并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。由于一般荧光测定中的本底较高等问题,荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。近年来发展了几种特殊的荧光免疫测定,与酶免疫测定和放射免疫分析一样,在临床检验中应用。免 疫学的基......阅读全文

免疫荧光实验原理及操作

免 疫荧光技术(Immunofluorescence technique )又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体 分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。

免疫荧光染色原理及步骤

免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。下面详细介绍免疫荧光染色步骤:1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待

免疫荧光试验的实验目的和原理

中文名称免疫荧光试验英文名称immunofluorescence test定  义一种免疫标记技术。用于检测相应抗原或抗体。即用荧光素与抗体连接成荧光抗体,再与待检标本中的抗原反应,置荧光显微镜下观察,抗原抗体复合物散发出荧光,借此对标本中的抗原进行鉴定或定位。应用学科免疫学(一级学科),应用免疫(

火箭免疫电泳实验原理及操作

一、实验原理火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉

免疫荧光原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

免疫荧光原理

  免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。  直接法  将

ISSR分子标记的实验原理及操作流程

ISSR(inter-simple sequence repeat)标记是一种类似RAPD,但利用包含重复序列并在3’或5’锚定的单寡聚核酸引物对基因组进行扩增的标记系统,即用SSR引物来扩增重复序列之间的区域。其原理具体是,ISSR标记根据生物广泛存在SSR的特点,利用在生物基因组常出现的SSR本

RAPD分子标记的实验原理及操作流程

RAPD标记RAPD技术的全称是随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA),此技术建立于PCR基础之上,使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物,对基因组的DNA全部进行PCR扩增,以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列,因此须对每一随机

免疫荧光技术操作步骤

基本原理将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。试剂与仪器磷酸盐缓冲盐水(PBS):0.01mol/L,pH7.4荧光标记的抗体溶液:以 0.01mol/L,pH7.4 的 PBS 进行稀释缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油

细胞免疫荧光操作步骤

1.细胞爬片;2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮);3.PBS漂洗5min;4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理);5.PBS漂洗2次,每次5min;6.1%BSA封闭30min;7.加入1%BSA稀释的一抗,于37℃杂交2h;8.

细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤

单位实验室做过,小编顺便推荐一下细胞爬片是从上海晶安生物公司买的,实验效果不错.细胞爬片免疫荧光步骤:1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干

细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤

1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可,我选择在培养皿中爬。一为节约经费(培养皿可以重复利用)

细胞爬片免疫荧光实验具体操作步骤

细胞爬片免疫荧光步骤:1.晶安生物细胞爬片;首先是玻片的处理,普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块,先用洗衣粉洗干净,用水冲静烤干,然后泡酸过夜,捞酸后流水洗净,烤干,置于器皿中高压灭菌,然后再烤箱中大约8小时烤干备用。爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可,我选择在培养皿中爬。一为节约经费

免疫荧光的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先

免疫荧光的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先

免疫荧光的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。 如检查未知抗原,先

免疫荧光的原理

  免疫荧光(Immunofluorescence,IF)原理免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在

卫星实验原理及操作鉴别流感嗜血杆菌

卫星现象(satellite phenomenon)概念:当将金黄色葡萄球菌与流感嗜血杆菌在同一血琼脂平板上共同培养时,由于前者能合成较多的V因子,促进后者生长,故在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌菌落较大,距离越远的菌落越小,此现象称为“卫星现象”(satellite phen

免疫荧光实验流程

免疫荧光实验步骤实验流程:(1) 细胞准备。对单层生长细胞,在传代培养时,将细胞接种到预先放置有处理过的盖玻片的培养皿中,待细胞接近长成单层后取出盖玻片,PBS洗两次;对悬浮生长细胞,取对数生长细胞,用PBS离心洗涤(1000rpm,5min)2次,用细胞离心甩片机制备细胞片或直接制备细胞涂

病毒免疫荧光实验

实验方法原理 实验材料 待检测病毒试剂、试剂盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯仪器、耗材 玻片实验步骤 1. 培养细胞小玻片标本的制备 根据所检测病毒种类,选择敏感细胞进行培养,如乙型肝炎病毒用乳地鼠肾细胞 (BHK21 细胞)培养,森林脑炎病毒用绿猴肾细胞 (Vero 细胞)培养

免疫荧光技术技术原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。直接法将标记的特异性

免疫荧光技术的原理

免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

免疫荧光定量检测原理

  将特异的荧光抗体先固体于硝酸纤维素膜的某一区带,当该干燥的硝酸纤维素一端滴加样品后,由于毛细管作用,样品将沿着该膜向前移动,当移动至固定有抗体的区域时,样品中相应的抗原即与该荧光体发生特异性结合,随着进一步的层析作用,用此抗原的另一个抗体对此复合物进行捕捉,多余的荧光抗体用其二抗进行捕捉,两次捕

免疫荧光补体法实验

实验方法原理用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。实验材料抗补体荧光抗体试剂、试剂盒PBS甘

免疫荧光实验方法

 免疫荧光技术是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。它是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)。利用荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

免疫荧光补体法实验

实验方法原理 用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。实验材料 抗补体荧光抗体试剂、试剂盒 P

细胞免疫荧光染色实验

实验原理利用抗原抗体反应,鉴定细胞是否表达某种蛋白。细胞经固定后,用特异性抗体(一抗)识别目的蛋白,再用一抗的抗体(二抗)识别一抗,二抗一般耦联荧光基团或化学反应基团,通过荧光或化学发光显示目的蛋白。主要试剂防淬灭剂、DPBS、指甲油、4% PFA、10 μg/mL PI、10 μg/mL Hoec

细胞免疫荧光实验步骤

细胞免疫荧光主要用于蛋白定位研究和细胞内信号转导,细胞免疫荧光技术是利用免疫技术和荧光标记技术相结合,原理就是利用抗原-抗体反应之后,采用荧光标记,标记完成后,显微镜下观察细胞内某种抗原成分的多少,从而做出一个定位研究,也可以为细胞内信号传导提供一个明确的指导,细胞免疫荧光具有敏感性强、特异性高、速

免疫荧光实验TIRF成像

  Kindlin-2和talin共同作用于桩蛋白激活整合素的表达  整合素是一种跨膜蛋白,在介导细胞黏附到细胞外基质(ECM)过程中发挥重要的作用。整合素在和配位体结合并发挥作用之前需要被激活。Kindlin和talin如何在非造血细胞中介入激活整合素这一过程的原理并不十分清晰。美国的科研人员发现