Mirrorball高通量抗体筛选平台的应用:一步法检测,抗...2

数据结果 为了比较Mirrorball和ABI 8200在EGFR检测灵敏度方面的差异性,将A431细胞与梯度稀释的EGFR一抗以及AlexaFluor647标记的goat anti-mouse IgG二抗共同孵育。在用Mirroball分析时,用CFSE对细胞进行染色,预先定位细胞并进行计数,细胞量为384孔板每孔2000个。对于ABI的8200, A431细胞量为每孔8000个接种。 图2表明,Mirroball检测灵敏度和ABI8200一样,从5 ng /ml抗EGFR抗体浓度开始,荧光随着浓度升高而逐渐加强。两种方法在一抗浓度高于100ng/ml的时候,都检测到了一个较强的荧光减少。这也是报道过的“钩状效应”(2)。在这里,主要是过量的一抗过饱和了,阻止了荧光二抗的结合和最终的实验读数。 图2抗EGFT抗体和 A431细胞结合的抗体浓度依赖的荧光强度曲线&nb......阅读全文

Mirrorball高通量抗体筛选平台的应用:一步法检测,抗...2

数据结果 为了比较Mirrorball和ABI 8200在EGFR检测灵敏度方面的差异性,将A431细胞与梯度稀释的EGFR一抗以及AlexaFluor647标记的goat anti-mouse IgG二抗共同孵育。在用Mirroball分析时,用CFSE对细胞进行染色,预先定位细胞并进

Mirrorball高通量抗体筛选平台的应用:一步法检测,抗...1

Mirrorball高通量抗体筛选平台的应用:一步法检测,抗体药筛选研发的新模式以抗体技术为基础的免疫检测应用和相关的疾病治疗领域如癌症,自身免疫系统疾病等一直推动着抗体筛选的研究。单克隆抗体由特定的细胞系分泌到上清液中,而对上清液中特异性抗体的筛选则成为了药物初期研发的核心领域。 均相结合实验尽管

双转盘共聚焦技术:长时间活细胞3D动态观察和分析...1

一、ELISA和流式的痛点 单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅识别某一特定抗原表位的抗体,具有特异性强、灵敏度高、重复性好等众多优点。单克隆抗体技术的问世经历了人鼠嵌合单抗、人源化单抗阶段,这些工程改造抗体不仅为免疫学领域带来了一次革命,而且在生物医学的各个领域得到极广泛的应用。如今在临

ABI-8200-FMAT的理想替代技术:“混合即读一步法检测”模式-3

图3 Mirrorball允许不依赖荧光抗体的结合量来测量CFSE标记的细胞。而在ABI 8200平台上,细胞必须有荧光抗体的结合才能被检测的到不仅Mirrorball提供了和ABI 8200一样的高灵敏度,而且与ABI 8200只能扫描1 mm2的区域相比,它能够扫描整个孔内的细胞并且不受细胞分布

高通量筛选平台(HTS)在抗体药物开发中的应用

细胞株开发和培养基优化是生物药物的开发的第一步,工业界一直致力于寻找一个高效快速的解决方案,我们将分两期给大家介绍一下默克提供的解决方案。这一期将分享HTS技术。HTS全称为高通量筛选(High Throughput Screen ),这里要划一下重点:1)高通量,是指通过大量不同的培养基筛选,

ABI-8200-FMAT的理想替代技术:“混合即读一步法检测”模式-1

ABI 8200 FMAT的理想替代技术:“混合即读一步法检测”模式,给您带来不用于ELISA和流式的抗体筛选新体验以抗体技术为基础的免疫检测应用和相关的疾病治疗领域如癌症,自身免疫系统疾病等一直推动着抗体筛选的研究。单克隆抗体由特定的细胞系分泌到上清液中,而对上清液中特异性抗体的筛选则成为了药物初

双转盘共聚焦技术:长时间活细胞3D动态观察和分析...2

可导出直观的hot map 2. 多重检测(multiplex):mirrorball可以在一个孔内同时检测阴性和阳性对照并进行多指标分析。具体方法为,用蓝色的染料如Hoechst标记阴性细胞,用绿色染料如Dio标记阳性对照细胞,将两种细胞混在一起后,在加入待测的抗体以及相应的荧光二抗。mirror

一种针对细胞表面受体进行抗体筛选的多重分析方法--一

本文以人EGFR抗体与细胞表面EGFR抗原结合为例,描述TTP Labtech的mirrorball仪器作为一种“mix-and-read”方法在在抗体筛选中的应用。EGFR配体的蛋白家族参与了细胞迁移,粘附和分化等活动,包括乳腺癌,肺癌,结肠癌在内的许多疾病都和EGFR的过度表达有着密切的关系

关于高通量筛选应用的介绍

  充分利用药用资源 由于高通量筛选依赖数量庞大的样品库,实现了药物筛选的规模化,较大限度地利用了药用物质资源,提高了药物发现的几率,同时提高了发现新药的质量。  微量筛选系统 由于高通量筛选采用的是细胞、分子水平的筛选模型.样品用量一般在微克级(μg),节省了样品资源,奠定了“一药多筛”的物质基础

llumina高通量测序平台的应用

  Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发,利用其ZL核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结(reversible terminator)”,实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收

llumina高通量测序平台的应用

  Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发,利用其ZL核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结(reversible terminator)”,实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收

高通量基因分型检测平台及其应用案例

Agripheno™高通量基因分型检测平台包括高通量Oktopure DNA提取仪、Nexar®模块化内联液体处理与分析系统、Soellex®高通量PCR水浴热循环系统和Araya®内联荧光检测系统。Oktopure DNA提取仪采用磁珠的方法提取DNA,通量达到800个样本/3小时。同时,适用于多

ABI-8200-FMAT的理想替代技术:“混合即读一步法检测”模式-2

EGFR实验抗EGFR抗体在培养基中梯度稀释,并添加20ul到384孔板中(Costar#3712)。对于Mirrorball系统,暂停用CFSE标记A431细胞含有1 ×105个细胞/ mL和6nM抗鼠IgG AlexaFluor647二抗。对于ABI的8200平台,准备A431细胞的悬浮液包含4

抗核抗体(AND)检测的临床应用

抗核抗体(ANA)是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白、DNA、可提取核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称,是自身免疫病最重要的诊断指标之一,包括但不限于抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、抗SSA抗体、抗SSB抗体、抗U1-RNP抗体、抗Scl-70抗体、抗Jo-1抗体、抗核糖体

llumina高通量测序平台的应用(一)

Illumina公司的新一代测序仪Genome Analyzer最早由Solexa公司研发,利用其ZL核心技术“DNA簇”和“可逆性末端终结(reversible terminator)”,实现自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。Illumina公司于2007年花费6亿美金的巨资收购了

llumina高通量测序平台的应用(二)

3、可逆化学阻断技术测序        利用边合成边测序(Sequencing by synthesis)的原理,加入改造过的DNA聚合酶和带有4种荧光标记的dNTP。这些核苷酸是“可逆终止子”,因为3’羟基末端带有可化学切割的部分,每个循环它只容许掺入单个碱基。去除其他多余的dNTP后,用激光扫描

抗线粒体2型抗体检测的简介

  抗线粒体抗体(AMA)是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体,其靶抗原是线粒体膜上的多种蛋白,成分复杂,现知有M1~M99种亚型。M2是原发性胆汁性肝硬化患者血清中抗线粒体抗体反应的主要成分,本质是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶和α-酮酸脱氢酶的复合体。

抗线粒体2型抗体检测的原理

  目前间接免疫荧光法仍然很广泛地用于AMA的筛查。大鼠肾是间接免疫荧光法检测AMA的标准底物。把内因子包被在载片上,制作成生物载片。将稀释的患者样本与生物载片温育,如果样本为阳性,特异性抗体与相应的抗原结合。在第二次温育时,荧光素标记的抗人抗体与结合在生物基质上的抗体反应,形成荧光显微镜下所观察到

抗核小体抗体的检测及应用

  凋亡细胞是核小体的重要来源,当SLE患者的吞噬细胞对凋亡细胞的清除能力受损或降低,导致核小体在患者体内大量存积,多聚核小体与活化的单核细胞结合后被抗原递呈细胞呈递给CD4+Th2细胞,Th2细胞增殖活化,激活B细胞产生抗核小体抗体(AnuA)。  AnuA特异性高,与SLE病情活动性相关,通常采

强磁场中心建成高通量药物筛选和测试技术平台

  近日,由中国科学院强磁场科学中心刘青松研究员课题组承担的中科院合肥物质科学研究院“一三五”战略规划重点支持项目——高通量药物筛选和测试技术平台一期建设初步完成,进入实用阶段。该平台是目前安徽省内少数高水平的高通量药物筛选测试技术平台,也是国内少数以组合药物筛选为主要任务的应用平台,它的建成使用将

基于高通量Peggy-Sue系统建立高效药物筛选平台

  高通量生物医药筛选高精尖仪器应用交流会,在兰州留学人员创业园成功召开,ProteinSimple苏倩博士报告了:“基于高通量Peggy Sue系统建立高效药物筛选平台”。报告内容包括:Peggy Sue基于分子量和等电点分离的技术原理;Peggy Sue的独特优势;Peggy Sue应用于高效新

细胞高通量药物筛选平台,必用透析胎牛血清

高通量药物筛选是当今时髦的新药研发方法。一方面,有机化学的飞速发展使得小分子的化合物库种类越来越多,另一方面,分子生物学为靶蛋白的筛选提供了荧光报告技术。同时,以细胞学为基础分子生物学方法还可用于筛选出的化合物的生物活性检测。 高通量药物筛选作为药物筛选的一个快捷途径,可在三个平台上进行应用:分别为

基于高通量Peggy-Sue系统建立高效药物筛选平台

高通量生物医药筛选高精尖仪器应用交流会,在兰州留学人员创业园成功召开,ProteinSimple苏倩博士报告了:“基于高通量Peggy Sue系统建立高效药物筛选平台”。报告内容包括:Peggy Sue基于分子量和等电点分离的技术原理;Peggy Sue的独特优势;Peggy Sue应用于高

抗线粒体2型抗体检测的标本采集

  1.患者准备检查前一天晚上8点后避免进食和剧烈运动。患者采血前最好休息15分钟以上。2.标本类型常规采集患者空腹静脉血液4ml置于无抗凝剂的一次性真空采血管中备用。3.标本运送标本采集后应明确标识并由专人及时送检,并注意运送过程中的生物危害性。4.标本处理(1)标本置于37℃孵箱孵育待血液完全凝

关于抗线粒体2型抗体检测的简介

  抗线粒体抗体(AMA)是一种无器官特异性也无种属特异性的自身抗体,其靶抗原是线粒体膜上的多种蛋白,成分复杂,现知有M1~M99种亚型。M2是原发性胆汁性肝硬化患者血清中抗线粒体抗体反应的主要成分,本质是线粒体内膜上的丙酮酸脱氢酶和α-酮酸脱氢酶的复合体。

高通量测序技术的原理及各平台优势和实践应用的分析-2

边连接边测序(SOLiD和Complete Genomics)从根本上来说,SBL法包含了杂交和对标记的探针的连接15。探针包含了一到两个特定碱基序列和一系列通用序列,这可以使得探针与模板之间进行互补配对。锚定的片段则包含一段已知的和接头互补的序列用于提供连接位点。连接之后,模板被系统进行测序反应1

一种针对细胞表面受体进行抗体筛选的多重分析方法-三

多激光扫描mirrorball的三激光使得用户可以利用多种荧光标记的标志物进行细胞计数分析。在该研究中,A549细胞被DiO标记(488nm激光激发),同时利用EGFR抗体和AlexaFluor 647标记物进行多重分析。经过过夜的孵育,利用488nm和640nm双重激光进行细胞数和EGFR

ANA抗核抗体检测的临床应用

1957年Holborow等建立间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence,IIF)检测ANA,对ANA检测的临床应用具有里程碑意义。临床上ANA常见于系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)等系统性(非器官特异性)A

抗线粒体2型抗体检测的注意事项

  1.严重溶血、脂血标本,细菌污染标本可对检测结果造成干扰;不采用装有抗凝剂的采血管。2.标本应及时检测。如有特殊情况,分离血清,并于4℃或-20℃保存,以免影响检测结果。标本中不能混入血细胞、纤维蛋白丝、尘埃和气泡,否则会影响其检测结果。

抗线粒体2型抗体检测的临床意义

  排除病毒性肝炎、酒精、药物和化学物质的肝毒性作用及遗传性肝脏疾病;不明原因的转氨酶升高,胆红素、碱性磷酸酶增高,高度怀疑自身免疫性肝病等。抗线粒体2型抗体是诊断PBC的高度特异和敏感的指标,阳性率可达90%以上。此外,慢性肝脏疾病和进行性系统性硬化症中也可检出抗M2抗体,但以低滴度为主。抗M2抗