RNA实验方案和应用（一）
RNA是具有多种不同的功能的生物大分子。信使RNA（mRNA）是DNA转录得到的，用做蛋白质合成的模板。蛋白质的合成是由核糖体完成的，核糖体由核糖体RNA（rRNA）和蛋白质组成。用于蛋白合成的氨基酸，是通过转运RNA（tRNA）输送到核糖体上的。RNA分子也是参与RNA转运过程的核糖蛋白的一部分。非编码RNA也是非常重要的。它们是不翻译成蛋白质的功能RNA分子。这样的RNA分子包括tRNA、rRNA、核仁小RNA（snoRNA）、微小RNA（miRNA）、小干扰RNA和piwi-interacting RNA（piRNA）。它们通常在基因表达的调控中发挥作用。miRNA是一类内源性的（自然产生的），约18–24个核苷酸大小的非编码RNA，在转录后的基因调控中发挥作用。一个miRNA可能在每个细胞中有超过105个拷贝，但是从每个细胞中总RNA质量的角度来看，这些RNA又是微不足道的。由于它们非常短，因此通常需要特别的分......阅读全文
RNA干涉实验
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
RNA干涉实验
化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验 实验方法
RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行，这样就能显著降低RNA 的
总RNA提取实验
实验方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离，使RNA 与蛋白质分离，并将RNA 释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA ，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA 进入水相
病毒RNA提取实验
TE-饱和酚/氯仿提取法 实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；（3）用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
细菌RNA制备实验
革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取 实验材料 RNA 试
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA，方法简单、快速。该系统以膜为基础，根据组织类型的不同，每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤，直接在小离
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
植物RNA提取实验
实验方法原理 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，
RNA实验方法
Solublization of RNA in Formamidecontributed by James McCaughern-Carucci, Yale UniversityResuspending RNA in Formamide (as reported by Chomczynski et
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于：成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
植物RNA提取实验
直接研磨法 液氮研磨法 实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶，植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离
真菌RNA提取实验
液氮研磨法 实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
RNA点杂交实验
实验概要了解RNA点杂交实验，包括纯化的RNA的点杂交和狭线杂交，RNA斑点印迹。实验步骤纯化的RNA的点杂交和狭线杂交：1. 安装印迹装置 1) 切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿，在20×SSC中室温泡1 h。 2) 在膜浸泡期间，先用0.1 mo
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
真菌RNA提取实验
真菌RNA的提取可以：（1）用于真菌RNA干扰机制研究；（2）用于cDNA文库构建等研究；（3）用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成
动物RNA提取实验
SV总RNA试剂盒提取法 Trizol试剂提取法 实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于：成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
RNA干扰回复实验
RNA干扰回复实验，主要是为了说明Off-target效应。Off-target效应Off-target effects（脱靶效应）最早由Dharmacon科学家Jackson和他的同事们提出（Fedorov,Y.,et al. "Off-targeting By siRNA Can Induce
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
纯化RNA实验——从组织中纯化总RNA
实验材料组织试剂、试剂盒RNA 抽提缓冲液氯仿实验步骤1. 从动物取下组织，直接进行第 2 步或在液氮中快速冷冻新鲜解剖的组织。冷冻后的组织可以贮存在 -70℃。2. 组织（0.05~0.3 g）在 2.0 ml RNA 抽提缓冲液中匀浆。3. 每管加 200 μl 氯仿，混合均匀，冰浴 15 分钟
反义RNA的制备实验
实验材料 限制性内切核酸酶酶水解模板 DNA大肠杆菌 DNA 多聚酶胰 DNaseⅠ试剂、试剂盒 氯仿苯酚乙醇DTTrNTP溶液转录缓冲液Tris-Cl盐酸亚精胺NaCl胎盘RNase抑制物牛血清白蛋白RNA聚合酶DEPC仪器、耗材 DNA合成仪琼脂糖凝胶电泳微量离心管实验步骤 一、化学合成的 RN
植物RNA的制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 TELiCl无水乙醇乙酸钠氯仿仪器、耗材 匀浆器离心管离心机水浴锅实验步骤 1. 研钵和研棒先用液氮冷却，称出15 g 冻结植物组织于研钵中（加液氮保持冻结）。2. 用研棒磨成粉末，立即转移到一个盛有150 ml，研磨缓冲液和50 ml TLE缓冲液平衡酚的500