活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(五)

SNAP-tag技术在STED超高分辨率显微成像中的应用近十年中,显微成像技术得到了飞跃的发展,填补光学显微镜(~200 nm)到电子显微镜(~0.1 nm)分辨率缺口,打破光学衍射极限的超高分辨率显微镜也越来越趋于成熟化。其中,德国马普研究所的Stefan Hell教授凭借其研发的受激发射损耗(Stimulatedemission depletion,STED)技术荣获2014年的诺贝尔化学奖。STED超高分辨率显微镜是架构在共聚焦显微镜上,因此其成像速度非常快,可以广泛的应用于活细胞的超高分辨率成像。除了传统的YFP等荧光蛋白可以用于STED活细胞超高分辨率成像,SNAP-tag和CLIP-tag可以非常简便的的将AlexaFluo等有机染料引入活细胞,实现活细胞中多色超高分辨率成像。有机染料具有更好的光稳定性,光谱的选择也更加灵活,配合SNAP-tag和CLIP-tag标记的特异性和稳定性,可以更优秀的服务于长......阅读全文

活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(五)

SNAP-tag技术在STED超高分辨率显微成像中的应用近十年中,显微成像技术得到了飞跃的发展,填补光学显微镜(~200 nm)到电子显微镜(~0.1 nm)分辨率缺口,打破光学衍射极限的超高分辨率显微镜也越来越趋于成熟化。其中,德国马普研究所的Stefan Hell教授凭借其研发的受激发射

活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(三)

细胞骨架如微管、微丝等一直是生命科学研究的重点。近期Johnsson等科学家将SiR直接标记于与微管和微丝分别特异性结合的小分子docetaxel和jasplakinolide,即形成SiR-tubulin和SiR-actin,实现了在不对细胞或组织进行任何转染或基因组修饰的条件下直接进行活细胞成像

活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(一)

如何免除活细胞标记中的清洗(washout)步骤?SNAP-tag等标记方法为活细胞显微成像带来了革命性的变化,也因此被Nature杂志评为2004年最热门的科研技术之一。但是传统的SNAP-tag标记仍然有很大的缺陷。将带有荧光探针的底物BG加入细胞后需要多次清洗细胞,才能将未结合的BG去除从而消

活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(四)

荧光显微镜在研究活细胞中蛋白质分子的定位、相互作用及动力学等生命活动中起着不可或缺的作用。将荧光蛋白如绿色荧光蛋白和目的蛋白融合表达,然后利用荧光蛋白发出的特异性荧光来观察和追踪目的蛋白分子在科学研究中得到了广泛的应用。但是荧光蛋白具有量子产量低、成熟速度受限、光谱容易受到环境因素影响及容易形成聚集

活细胞荧光成像的新型标记法及其在STED中的应用(二)

图5.EGFR在细胞中转运的实时记录。(a)示意图,用于解释如何利用FAPL探针来实时追踪EGFR相关的细胞膜转运过程。(b)COS7细胞中表达的EGFR用DRBG-488标记(绿色),溶酶体用lysosometracker(红色)标记。(c)对表达SNAP-EGFR–CFP的MDCK细胞进行共聚焦

活细胞成像要求在成像过程中的知识

活细胞成像要求在成像过程中始终保持镜台上细胞的存活.应注愈使用zui小强度的激光,因为激光束造成的光损伤在多次扫描时可以录加起来。抗氧化剂(如维生素C)加人培养液可减少来自激发的荧光分子产生的权.因为级可引起自由基形成并杀死细胞。对于一些荧光标记实验.需评价光基礴对标本的影响.一般应进行成像后组织活

突破!研究团队攻克荧光蛋白和染料在活细胞成像中的局限

近日,我所生物技术研究部分子探针与荧光成像研究组(1818组)徐兆超研究员、苗露副研究员团队通过调控荧光蛋白与荧光染料之间的荧光共振能量转移(Fluorescence resonance energy transfer,FRET),提高了荧光蛋白的光稳定性,并基于化学遗传学策略赋予外源荧光染料遗传编

活细胞成像系统在实际应用上有哪些功能?

 活细胞成像系统是用于活细胞长时间、高清晰度、高灵敏度成像的设备。当用活细胞染料标记细胞内特定生物大分子,或者使用荧光蛋白标记体内特定蛋白时,使用该荧光染料或者荧光分子特定的激发光线激发,通过探测其特用的发射光线即可探测到该生物大分子。活细胞成像系统一方面控制细胞生存的外部环境,提供合适的温度、适度

LED光源在荧光显微成像中的应用简述(二)

目前可以使用的LED芯片的功率与100W汞灯泡中等离子弧产生的辐射相差甚远。灯泡能够发射极宽谱段范围的能量,但在给定的约20nm的谱段范围内,LED更有优势甚至超过了汞灯泡在360nm至800nm的大部分区域。LED的过度使用在荧光应用领域非常常见,这使热量管理变得极为重要。冷却技术包括珀尔帖(Pe

LED光源在荧光显微成像中的应用简述(一)

荧光显微镜中的LED光源具有便利与绿色环保的优点。这些LED能够保持研究成分的有效性,特别是对成像和敏感样品的保存。LED技术在我们的生活中发挥越来越重要的作用。在过去的50年里,该技术的应用已从简单的电子产品指示灯扩展到替代白炽灯以节约大量能源。LED具有高强度、使用寿命长、可控制性及光谱输出稳定

荧光标记基团的选择及其在荧光定量PCR中的应用

PCR实验室产品选择指南 荧光  基团是吸收一定波长的光子后发射特定波长的光波,可以作为抗体等分子的标记物,实时荧光定量PCR中的Taqman探针常用荧光基团FAM标记荧光基团和TAMRA标记。 荧光基团 吸收特定波长的光子后荧光染料(通常称为“荧光基团”或简称为“荧光素”)的化

荧光定量PCR仪技术及其在医学中的应用

刘向国 谢国明 (重庆医科大 重庆市 400016)摘 要 荧光定量PCR仪技术是一种新的核酸定量技术,该技木在PCR仪反应系统中引人了荧光标记探针,具有可实时监测,高灵敏性,高特异性和高精确性的特点,极大地克服了原有PCR仪技术的不足,扩大了PCR仪的应用范围。关键词 定量pcr;荧光;基因Flu

萘酰亚胺小分子荧光探针在细胞器成像中的应用

  小分子荧光探针凭借其非侵入性、高选择性和实时原位成像的能力,已经为大量的研究提供了技术支持,并极大地促进了细胞生物学、生物化学等领域的研究。作为一种常见的荧光基团,萘酰亚胺(Naphthalimide)被广泛地应用在细胞器成像和示踪等领域。  2021年6月3日,美国杜克大学郑徐军博士和中国科学

新型高分辨成像技术可观察活细胞中酶和细胞传导活性

  分析测试百科网讯 一种新型的荧光生物传感器可以观察到在活细胞中高度特异性位置发生的酶和细胞信号传导活性。  这些活动的发生通常在100纳米大小,观察它们目前是困难或不可能的。例如,可见光的衍射极限会阻止光学显微镜在小于200至250nm的位置捕获动态事件。  超分辨率技术如SOFI(stocha

全自动活细胞实时荧光成像系统概述

  全自动活细胞实时荧光成像系统是一种用于生物学领域的分析仪器,于2018年12月11日启用。  1、显微镜采用全封闭箱式设计,并可通过机身TFT触摸屏进行自动进样,调用预设实验程序自动进行成像实验。  2、全自动成像方式,无需任何手动调节即可实现普通明场、斜照明和高衬度浮雕效果PGC成像,并可在荧

Celigo成像分析技术在细胞增殖中的应用

细胞增殖是肿瘤研究的必备实验之一。最简单直接的检测细胞增殖的方法就是在不同时间点进行细胞计数,但是在96孔板甚至384孔板的实验设置下,这无疑是难以操作的。于是,研究者们更倾向于用间接方法研究细胞增殖,比如基于线粒体内脱氢酶还原能力的MTT, MTS, CCK-8法,还有基于胞内ATP水平的Ce

显微成像技术在干细胞研究中的应用

干细胞涉及到个体发育、器官移植、延缓衰老、癌症治疗等方方面面。单个的干细胞是如何分裂、分化成新的细胞、组织或器官呢?在成体中,干细胞又是如何完成细胞修复更新的使命呢?在下面的文章中,我们将介绍如何借助共聚焦、双光子等显微成像分析技术一一解决在干细胞研究中的这些问题。激光共聚焦扫描显微镜可以精确可控的

荧光定量PCR仪技术及其在医学中的应用(二)

3 在医学中的应用3.1 病原体测定PCR技术的问世使病原体检测能够快速、方便地进行。由于PCR技术假阳性率太高,只要有微量病原体存在就可得到阳性结果,这并不能作为诊断依据, 只有当一定数量的病原体存在时才有临床意义。因此,对模板准确定量显得特别重要,应用荧光技术PCR仪就能够快速、准确地得到结果。

荧光定量PCR仪技术及其在医学中的应用(一)

 1 概述        荧光定量多聚酶链式反应是一种新的核酸定量技术。该技术将荧光能量传递技术(fluorescence resonance energy transfer,FRET)应用于常规多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR仪中,从而进行定量检测。FRE

CIK/DCCIK及其在细胞治疗上的应用(五)

5. 高效CIK血样本采集注意事项 (一)采血前,患者可以饮温开水、低脂清淡饮食; (二)采血前,不可以进行任何输液治疗; (三)采血前1天,患者不可以进行可能损伤、破坏淋巴细胞的治疗和检查项目,如放疗、化疗、核医学检查等; (四)连续两个疗程治疗时,取血和回输细胞在时间上会有交叉,取血必须在细胞回

PNAS:新型荧光cAMP指示器有助于神经元活细胞成像

环磷酸腺苷(cAMP)是一种胞内信使分子,负责包括神经元在内的许多细胞的功能,促进轴突的生长,维持神经元间的通信。cAMP的分子途径已得到充分研究,已知它在调节突触功能中发挥重要作用;然而,能够精确监测其细胞内活动的指标还有待开发。现在,Naoto Saitoh带领的研究团队通过开发一种新型绿色荧光

量子点活细胞成像应用的实验方案

量子点(Quantum dot, QD)是一种新型荧光纳米材料,又称半导体纳米晶,呈近似球形,三维尺寸在2-10nm,具有明显的量子效应,其物理、光学、电学特性优于传统有机荧光染料,是新一代荧光标记探针的优质选择。Chan等将量子点与传统有机荧光染料进行了光学特性的比较,发现量子点的荧光亮度是传统荧

徕卡超高分辨显微技术病毒学相关研究应用(二)

04第四个应用实例,是对病毒基因组复制的观察。标题为:利用STED超高分辨显微镜观察复制的HSV-1病毒【4】。值得一提的是,本文由中科院昆明动物所周巨民老师课题组与徕卡公司合作完成。病毒基因组复制是单纯疱疹病毒 1 (HSV-1) 溶解感染周期的重要事件。目前由于检测和观察方法的局限,病毒复制

激光全息成像分析系统在肿瘤新型药物研究中的应用

前言:目前,随着新型智能制剂的发展,利用天然生物材料将化学药物与RNA干扰过程相结合。不仅增加了生物识别的敏感性,而且能提高生物药物的活性。聚合物胶束作为一种新型的药物载体,胶束内核能够显著增加难溶性药物的溶解度,降低毒副作用,亲水外壳保护药物免受生理环境的破坏;具有主动和被动靶向作用,改变药物的体

俄歇电子能谱原理介绍及其在元素成像中的应用

海南大学周阳副教授  海南大学周阳副教授发表主题为“俄歇电子能谱(Auger electron spectroscopy)原理介绍及其在元素成像中的应用”的精彩报告。俄歇电子能谱(AES)是一种表面科学和材料科学的分析技术,可用于获得元素种类,含量和分布等信息。其原理是:当原子内层电子被激发

STED超高分辨成像

 STED超高分辨成像采用受激发损耗(STED)技术,实现XY最小分辨率≤50nm,Z轴最小分辨率≤130nm。固态长寿命损耗激光器:592nm,660nm,775nm,实现不同染料的超高分辨成像,可见光全光谱覆盖。STED WHITE 油浸物镜 (HC PL APO 100x/1.40 OIL),

叶绿素荧光成像系统在昆虫作物互作研究中的应用

近日,北京易科泰生态技术有限公司为中科院动物研究所安装了一套FluorCam封闭式叶绿素荧光成像系统。该系统可用于研究植物的光合结构和光合活动,其成像的功能能够实现全部叶片和整株植物代谢状态的可视化,解读叶片光化学效率的异质性。中科院动物所相关课题组将使用FluorCam叶绿素荧光成像系统和光合仪开

Celigo成像分析技术在细胞杀伤中的应用(二)

这么好的方法当然需要一个强大的检测仪器来支撑 – Celigo成像细胞定量分析仪:● 明场+四色荧光● 全孔成像,图片清晰,适用于6-1536孔板● 定量分析全孔细胞数目● 软件自带流式设门分析功能● 高速同步成像和分析,15分钟内完成一块96孔板的免疫杀伤检测现在小编就以NK细胞的ADCC(抗体依

Celigo成像分析技术在细胞杀伤中的应用(一)

2018年的诺贝尔生理学或医学奖授予了两位免疫学家,分别是美国的James P Allison和日本的本庶佑教授,以表彰他们的原创发现推动了免疫学研究的进程,促使了癌症治疗领域革命性新药物的面世。如今炙手可热的PD-1, CAR-T,TCR-T技术等都要归功于这一伟大发现及其临床应用。如果你的工作也

超分辨率显微镜的各种不同技术对比

对于传统的光学显微镜,光的衍射让成像分辨率限制在大约250 nm。如今,超分辨率技术可以将此提高10倍以上。这种技术主要通过三种方法实现:单分子定位显微镜,包括光敏定位显微镜(PALM)和随机光学重建显微镜(STORM);结构照明显微镜(SIM);以及受激发射损耗显微镜(STED)。