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microRNARTPCR实验方法

Stem-loop实时定量RT PCR传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体,而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术,包括设计具有茎环(stem loop)结构的反转录引物和用miRNA荧光标记的特异分子探针进行实时PCR 二个关键步骤。该技术具有以下优点:高度特异性,对序列高度同源的miRNA也可精确区分;超宽的定量线性范围和高度的检测灵敏度;样品消耗少,仅需1~10 ng的总RNA;适用范围广,总RNA、细胞裂解物以及纯化的RNA都可用于miRNA的定量检测。Stem-loop实时定量RT PCR基本原理: microRNA的RT-PCR一般使用茎环结构的引物,这种具有茎环结构的引物针对所需检测的目的microRNA设计,具有特异的序列,结构示意图如下所示。内参使用的是小RNA ......阅读全文

2012国家自然科学基金评审结果名单之复旦大学(生物类)

  来自国家自然科学基金委员会的消息,国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录

多位专家指导:如何提取和研究血液DNA,RNA与蛋白

  血液是唯一与所有器官都有接触的组织,携带着有关机体的大量宝贵信息。在理论上,检测血液携带的 DNA、RNA、囊泡和细胞残骸可以帮助人们诊断和监控各种疾病。  产前基因筛查是血液检测的一个重要应用,通过分析孕妇血液中的胎儿DNA来鉴定染色体异常(比如唐氏综合症)。此外,越来越多的研究者开始关注血液

实时荧光定量PCR

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)可对特定核苷酸片断进行指数级的扩增。在扩增反应结束之后,我们可以通过凝胶电泳的方法对扩增产物进行定性的分析,也可以通过放射性核素掺入标记后的光密度扫描来进行定量的分析。无论定性还是定量分析,分析的都是PCR终产物。但是在许多

microRNA芯片高通量筛选发现miR-95通过抑制SNX1基因促进结...

microRNA芯片高通量筛选发现miR-95通过抑制SNX1基因促进结肠癌细胞增殖microRNA是⼀类约22个核苷酸长度的非编码RNA小分子,⼀般通过与mRNA的3‘UTR区域相互作用从而抑制相关基因的表达。据研究表明,microRNAs在转录后水平上至少调控了三分之⼀的人类基因。目前最新的mi

microRNA芯片高通量筛选发现miR-95通过抑制SNX1基因促进结肠

  miR-95通过抑制SNX1基因促进结肠癌细胞增殖   microRNA是⼀类约22个核苷酸长度的非编码RNA小分子,⼀般通过与mRNA的3‘UTR区域相互作用从而抑制相关基因的表达。据研究表明,microRNAs在转录后水平上至少调控了三分之⼀的人类基因。目前最新的microRNA数据库

2011中国、世界十大科技进展揭晓

 由中国科学院、中国工程院主办,中国科学院院士工作局、中国工程院学部工作局、中国科学报社承办,中国科学院院士和中国工程院院士评选的瀚霖杯2011年中国十大科技进展新闻、世界十大科技进展新闻,2012年1月17日揭晓。 2011年中国十大科技进展新闻   1 天宫一号与神舟八号成功实现交会对接

系统化生物芯片技术在功能基因组研究中的应用简介

 三、生物芯片技术研究应用点滴     人类基因组计划推动了各种生物基因组测序工作的进展,越来越多的生物全基因组序列被测定并公布,可是这才是解读“天书”的开始。掌握了基因组序列,却不知道基因序列背后所隐藏的秘密——即基因组的功能,就不能真正理解“天书”更

2012国家自然科学基金哪些干细胞项目资助金额最大

  国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录科学基金网络信息系统(https:

梳理牙齿间充质干细胞最新研究进展

  人牙齿干细胞(dental stem cells, DSC)可分为牙齿上皮干细胞(Dental epithelial stem cells)和牙齿间充质干细胞(Dental mesenchymal stem cells)两类。胚胎口腔上皮诱导牙形成(odontogenesis)。牙釉质是由牙齿成

JCI:应用FISH技术检测肿瘤microRNA

  霍华德•休斯医学研究所(HHMI)的研究人员通过微调荧光探针的设计以及RNA固定技术,开发出一种检测和定量肿瘤活检样本中microRNA分子的方法。这种新的荧光原位杂交(FISH)技术实现了肿瘤类型的鉴定。《The Journal of Clinical Investigation》杂志近日

全转录组测序的“一箭三雕”:circRNA,lncRNA,mRNA

1. 文章主题:环状RNA通过靶向miRNA调控的信号传导促进结直肠癌的转移发表期刊:Journal of pathology影响因子:5.942发表时间:201906实验方法:全转录组测序实验样本:结直肠癌组织肝转移是结直肠癌(CRC)患者的主要死亡原因。作者使用全转录组测序在CRC肝转移的小鼠模

准确检测血清血浆样本中microRNA的利器与应用

大量研究表明,血液循环中的microRNA表达变化指征着疾病的发生和发展阶段。同时,血液样品在临床易于获取,且稳定不易降解,因此对于microRNA标记物筛选具有广阔研究前景。 血清/血浆样本用于microRNA研究的挑战• 血清血浆中不包含细胞,且microRNA含量低• microRN

Nat Rev Genetics | 环状RNA的合成与功能

  环状RNA(circular RNA,circRNA)是一种新兴的内源性非编码RNA(noncoding RNA,ncRNA),是继microRNA (miRNA)以及long noncoding RNA (IncRNA)后非编码RNA家族中极具研究潜力的新成员。越来越多的研究表明,环状RNA具

血清中 miRNA 抽提和实验设计经验谈

人体内的血液循环系统犹如印度的圣河 – 恒河,河水中携带的养分滋养着古老的大地;洗涤带走地上的ㄧ切污秽,人们的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象,河水中充斥着各种物质,有废物有养分,只要你想都可以从河水中捞取。同样的我们的循环系统如同恒河;流动的血液如同恒河水,身体所需的ㄧ切由血液运送,身体

数字PCR技术的发展与应用简介

数字PCR技术的原理数字PCR(Digital PCR-dPCR)技术是一种新的核酸检测和定量方法,与传统定量PCR(qPCR)技术不同,数字PCR采用绝对定量的方式,不依赖于标准曲线和参照样本,直接检测目标序列的拷贝数。由于这种检测方式具有比传统qPCR更加出色的灵敏度和特异性、精确性,dPCR迅

建立标准化的RNA-seq,为液体活检扫清障碍

  检测一管血液或尿液,通过其中的标志物来帮助诊断或治疗疾病,这个新思路让人们激动不已。不过,尽管RNA测序(RNA-seq)越来越多地用于小片段RNA的分析,但文库制备方法的准确性和重复性还是存在问题。  密歇根大学的Muneesh Tewari教授认为:“不同的人采用不同的方法来测序小RNA,有

2016年外泌体研究进展

  外泌体是一种存在于细胞外的多囊泡体,可通过细胞内吞泡膜向内凹陷形成多泡内涵体,内涵体与细胞膜融合后释放其中的小囊泡。外泌体的直径在40-110 nm之间,其中包含RNA、蛋白质、microRNA、DNA片段等多种物质,存在于血液、唾液、尿液、脑脊液和母乳等多种体液中。外泌体从发现至今已有30多年

microRNA RT-PCR实验方法介绍

  Stem-loop实时定量RT PCR   传统实时定量RT PCR只能检测到miRNA前体,而Stem-loop实时定量RT PCR技术可以解决这一问题。Stem loop实时定量RT PCR是一项高特异度、敏感度的检测miRNA表达的实验技术,包括设计具有茎环(stem loop)结构的

探究分泌和摄取用于细胞间通讯的外泌体和其他胞外囊泡

  尽管在20世纪60年代后期首次描述了在哺乳动物组织或液体中,有囊泡在细胞周围存在,但是直到2011年才提出通用术语“胞外囊泡(extracellular vesicle, EV)”来定义所有的由脂质双层包围的胞外结构,如图1所示。在1980年代,人们描述了EV可以通过质膜向外出芽或通过细胞内内吞

案例分享: Agilent miRNA芯片在各类样本中的应用

  1.新鲜组织样本   新鲜组织一般包括以人类疾病诊断及治疗为目的,经患者或健康人同意后,从患者的机体中切取的未经特殊化学试剂处理的病变组织或相邻健康组织,或者健康人的相同部位的对照组织。这些人类疾病相关的新鲜组织样本的整理、保存、研究对于提高疾病的诊断质量、促进临床工作、探讨及研究疾病的发病机

案例分享: Agilent miRNA芯片在各类样本中的应用

  1.新鲜组织样本   新鲜组织一般包括以人类疾病诊断及治疗为目的,经患者或健康人同意后,从患者的机体中切取的未经特殊化学试剂处理的病变组织或相邻健康组织,或者健康人的相同部位的对照组织。这些人类疾病相关的新鲜组织样本的整理、保存、研究对于提高疾病的诊断质量、促进临床工作、探讨及研究疾病的发病机

miRNA的特征、功能及识别方法等详解(三)

2) miRNA的靶基因预测方法 miRNA的研究意义之重大是毋庸置疑的。然而,与新的miRNA的频频发现相比,miRNA的功能研究相对缓慢。到目前为止,在发现的4449多个miRNA中,确定功能的miRNA仅有几十个。导致miRNA功能研究进展缓慢的非常重要的原因是miRNA的作用靶标难

1滴血 2小时 验13种癌症 日本东芝新技术明年将启动试验

  滴血验癌又传来突破:“可检测13种早期癌症,准确率99%,明年启动实证试验。”  乍一听绝对大进展。  于是该消息一出,立马引发关注、登上微博热搜——但热议并非全是期待,伴随展开的更多是质疑。  因为这样的黑科技进展,之前已有过臭名昭著的女版乔布斯“硅谷骗局”。  不同的是这次进展来自日本知名技

人源化小鼠模型在人类疾病研究中的应用

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

人源化小鼠模型在人类疾病研究中的应用

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

CRISPR/Cas9技术,热度背后的冷思考

  俞晓峰博士现任赛业模式生物副总裁、高级科学家,负责基因修饰模式动物的研发与技术服务等工作。   俞博士在遗传基因模式动物领域有超过20年研发与管理等方面的丰富经验,在干细胞相关领域及哺乳动物细胞系基因改造研究也取得了巨大成就,其研究成果多次发表在Nature Immunology、Hum Mo

科研中的“新星”技术——MicroRNA荧光定量PCR

Micro RNA简介微小RNA(microRNA,简称miRNA)是生物体内源长度约为20-23个核苷酸的非编码单链小分子RNA,通过与靶mRNA的互补配对而在转录后水平上对基因的表达进行负调控,导致mRNA的降解或翻译抑制。是由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶

专访清华大学谢震:人工合成基因线路技术在Nature子刊发表

  2015年2月2日,《自然•化学生物学》(Nature Chemical Biology)发表清华信息科学与技术国家实验室(筹)谢震课题组与麻省理工学院Ron Weiss课题组共同完成的题为“Modular construction of mammalian gene cir

基于尿液的疾病检测研究进展一览

  每次小便时,很多人只是将尿液冲走了事,并没有意识到尿液能够反映一个人的健康状态。尿液是一个令人难以置信的复杂的生物流体。  医生、营养学家和环境科学家不仅对尿液的物理性状,如尿量、颜色、透明度、气味、pH和比重等感兴趣,也对尿液的化学成分特别感兴趣,因为它们揭示了有关一个人的健康与否、他们所吃的

盘点2015热门研究重点综述

  即将进入2015年的倒计时,回顾2015年,生命科学又有哪些热门关键词呢?  衰老  衰老是个复杂的过程,这是从我们出生到死亡都贯穿着的一个整体有机过程。首先这会在基因组水平——端粒上发生,还有DNA修复过程,表观遗传学修饰,以及蛋白质水平都与衰老密切相关。  Stem Cell Aging a