PCR常见问题及解决方案（二）
问题可能原因解决方法无产物或产量低模板浓度偏低或偏高电泳检测模板浓度，调整模板用量模板降解重新制备；基因组DNA、cDNA应小量分装后低温保存模板中含有抑制反应的杂质纯化模板引物浓度不足调整引物浓度，特别是针对长片段PCR引物存在二级结构重新设计引物，避免二级结构；优化退火温度引物降解引物应高浓度小量分装，-20℃保存，避免反复冻融Mg2+浓度偏低适当提高Mg2+浓度，从1 mM到3 mM以0.5 mM间隔递增，针对不同模板和引物摸索最佳Mg2+浓度dNTP降解-20℃保存，小量分装，避免反复冻融酶纯度低，扩增效率差选用高质量DNA聚合酶酶量不足适当增加酶量用酶不当针对模板、目标片段的特选择适当的酶(详见PCR产品选择指南)缓冲液失效更换缓冲液或使用预混PCR反应体系模板变性不充分适当延长变性时间；对高GC或复杂结构模板，提高起始变性温度至98℃退火温度偏高降低退火温度，应比引物Tm低至少5℃延伸时间不足增加延伸时间，特别是针对......阅读全文
PCR常见问题及解决方案（二）
问题可能原因解决方法无产物或产量低模板浓度偏低或偏高电泳检测模板浓度，调整模板用量模板降解重新制备；基因组DNA、cDNA应小量分装后低温保存模板中含有抑制反应的杂质纯化模板引物浓度不足调整引物浓度，特别是针对长片段PCR引物存在二级结构重新设计引物，避免二级结构；优化退火温度引物降解引物应高浓度小
PCR常见问题及解决方案
PCR常见问题及解决方案 1没有扩展条带 可能的原因及对应的解决方案如下： 酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR
RTPCR常见问题及解决方案
RT-PCR常见问题及解决方案
ICP常见问题及解决方案（二）
13、Q ICP-OES和ICP-AES有何区别？A ICP-OES和ICP-AES是电感耦合等离子体发射光谱法不同时期的叫法，ICP-OES即Inductively Coupled Plasma Optical Emission Spectrometry--电感耦合等离子体发射光谱法，旧称
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的条
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案
梯度PCR仪常见问题及现场解决方案如下： 1、梯度PCR仪在产物序列中引入了错误，这大多是由于聚合酶忠实性低或者循环数太多，这时需要使用带有校正活性的热稳定聚合酶，同时降低循环数。此外，四种dNTP的浓度不同也会出现该问题，此时应制备新的浓度相同的dNTP混合物。 2、PCR跑胶，目的
RealTime－PCR－(qPCR)常见问题及解决方案
Real Time PCR(qPCR)，即实时荧光定量核酸扩增检测系统，是一种利用荧光染剂检测每次PCR循环后产物总量的方法技术，是常规PCR的衍生反应。主要是通过荧光信号的变化实时监测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析。因其具有灵敏、特异、
PCR常见问题汇总（二）
PCR反应体系与反应条件-------------------------------------------------------------------------------- 标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul4种dNTP混合物 各200umol/L引物 各10～100p
PCR常见问题总汇(二）
克隆PCR产物1)克隆PCR产物的最优条件是什么？最佳插入片段：载体比需实验确定。1：1（插入片段：载体）常为最佳比，摩尔数比1：8或8：1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4oC过夜。在这2种温
定量PCR常见问题(二)
8. 什么是背景校正？多长时间执行一次背景校正？ 背景校正程序测量定量PCR仪所使用的反应管和水的空白荧光强度。在运行校正程序期间，定量PCR仪在10分钟内连续读取背景校正板的荧光强度，信号收集的温度为60 °C。随后，SDS软件计算所收集到的荧光强度的平均值，提取结果并保存到校正文
PCR实验操作常见问题及解决方法（二）
二、Generacer如何针对Generacer试剂盒设计基因特异性引物（GSP）？使用5’或3’RACE试剂都需要至少一条基因特异性引物，您在设计引物时需要注意以下几点要求：*50-70％的GC含量，以提高引物熔点（Tm）*23-28个碱基长度，以提高引物特异性*降低3’端GC含量，将引物非特异性
RTPCR常见问题分析及其解决方案
常见问题可能原因建议解决方案少量或没有RT-PCR产物RNA被降解分离无污染，高质量的RNA；提取RNA的材料要尽量新鲜，防止RNA降解；RT反应前，在变性胶上分析RNA的完整性；RNA提取后，应储存在100％甲酰胺中， 如果使用RNase抑制剂，加热时小于45℃；pH小于8.0，否则抑制剂会释放所
PCR实验常见问题、原因分析及其解决方案
PCR产物的电泳检测时间，一般为48h以内，有些最好于当日进行检查，大于48h后带型不规则甚至消失。但有时仍会与到这样那样的问题，影响检测结果的判断，具体归类为以下常见的4点，描述如下：问题一：无扩增产物现象：正对照有条带，而样品则无。原因：1、模板:含有抑制物，含量低。2、Buffer对样品不合适
PCR常见问题及回答
PCR常见问题及回答 1. cDNA产量的很低 可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl 2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅 *zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
ELISA常见问题及解决方案
一．背景高或者非特异性染色 原因 解决方案 抗体的非特异性结合 更换封闭液（例如，使用酪蛋白替代BSA）；封闭结束后不要清洗；倒出封闭液，吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。 未充分清洗酶标板 确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步
ICP常见问题及解决方案
1、Q射频发生器的频率有40.68和27.12MHz两种哪中更好？A单就两种频率本身来说，都可以满足作为热源的需要，但是由于所谓趋肤效应的存在，频率越高趋肤效应越大，这样有两个好处：等离子体厚度小，光强会更大；中心孔道大，样品对等离子体的影响小（等离子体也是电导体），不容易导致灭火，尤其切换到高盐、
ELISA常见问题及解决方案
一．背景高或者非特异性染色 原因解决方案抗体的非特异性结合更换封闭液（例如，使用酪蛋白替代BSA）；封闭结束后不要清洗；倒出封闭液，吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。未充分清洗酶标板确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步骤之间清洗3~5次，不要增加清洗次数。清洗完成后，将
ELISA常见问题及解决方案
一．背景高或者非特异性染色 原因 解决方案 抗体的非特异性结合 更换封闭液（例如，使用酪蛋白替代BSA）；封闭结束后不要清洗；倒出封闭液，吸水纸上吸干残留液体后直接进行下一步。 未充分清洗酶标板 确保在清洗过程中每个微孔都充满缓冲液、清洗仪器正常工作。各步
荧光定量pcr常见问题的原因与解决方案
1.扩增产物大小不合适：实时荧光定量PCR扩增片段的长度通常在80-150 bp之间，如果调整反应的时间有可能扩增500bp的片段。 2.PCR反应过程中退火及延伸的时间过短或过长：应根据扩增片段的大小予与调整。 3.MgCl,浓度不合适：按0. 5mm的间距调整MgCI2的浓度。
PCR仪PCR注意事项及解决方案
1、PCR 污染PCR 技术的敏感性极高，极微量的污染即可导致假阳性的产生，因此，了解 PCR 污染的原因，采取相应的措施预防和消除 PCR 污染就十分重要。PCR 污染主要是随机污染，包括 PCR 反应前污染及反应后污染。（1）PCR 反应前污染主要是样品 DNA 的交叉污染。提取 DNA 使用的
PCR仪常见问题及回答
PCR仪常见问题及回答1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是R
PCR仪常见问题及回答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行比对
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：＊RNA模板质量低＊对mRNA浓度估计过高＊反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足＊同位素磷32过期＊反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅＊zui常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系＊
PCR仪常见问题及解答
聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的残骸，还是几十年前凶杀案中凶手所遗留的毛发、皮肤或血液，只要能分离出一丁点的DNA，就能用PCR加以放大，进行
PCR－扩增常见问题及特点
常见问题PCR产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚至消失。假阴性，不出现扩增条带。PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中
PCR仪常见问题及回答
1. cDNA产量的很低可能的原因：*RNA模板质量低*对mRNA浓度估计过高*反应体系中存在反转录酶抑制剂或反转录酶量不足*同位素磷32过期*反应体积过大，不应超过50μl2. 扩增产物在电泳分析时没有条带或条带很浅*最常见的原因在于您的反应体系是PCR的反应体系而不是RT-PCR的反应体系*与反
PH计常见问题及解决方案
1.同一样品，两次测量的 pH值不一样? 温度变化或样品本身发生了化学反应，都会引起 pH值的变化。所以，应尽量保持温度一致，并且避免化学反应。 2.同一样品，同时在两台 pH计上测量，读数不一致? 由于两台 pH计的校正条件不一样(如，不同时间做的校正)，造成测量值有差异。所以要用同一缓冲液