磷酸氨基酸分析实验

鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验方法酸水解法磷酸化蛋白质 印度墨汁 HCl 磷酸氨基酸混合物 电泳缓冲液 茚三酮 PVDF膜 烘箱 离心机 离心管 纤维素薄层色谱 滤纸 薄层电泳仪 实验步骤1. 放射性标记的磷酸化蛋白质在SDS-聚丙烯酰胺凝胶上进行制备电泳。电转移至PVDF膜上,用水洗膜数次,不要让膜变干。 2. 用30~50 ml 印度墨汁染色液染膜5~10 min,轻摇至条带出现。也可在作好放射性或磷光位置标记后,用塑料膜包住膜,进行放射性自显影。 3. 用干净刀片切下含目的条带的膜,用甲醇将膜重新润湿1 min,再用多于0.5 ml 水的润湿。置于带螺口盖的微量离心管。4. 加入足够量的6 mol/l HCl,淹......阅读全文

磷酸氨基酸分析实验

酸水解法             实验材料 磷酸化蛋白质 试剂、试剂盒

磷酸氨基酸分析实验

鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验方法酸水解法磷酸化蛋白质 印度墨汁 HCl 磷酸氨基酸混合物 电泳缓冲液 茚三酮 PVDF膜 烘箱 离心机 离心管 纤维素薄

磷酸氨基酸分析实验

鉴定蛋白质中磷酸化的氨基酸残基是很有意义的。磷酸化作用发生在蛋白质的丝氨酸、苏氨酸和酩氨酸时,通过部分的HCl水解及接着进行双向薄层电泳,可以便利地鉴定 标记的磷酸氨基酸。实验材料磷酸化蛋白质试剂、试剂盒印度墨汁HCl磷酸氨基酸混合物电泳缓冲液茚三酮仪器、耗材PVDF膜烘箱离心机离心管纤维素薄层色谱

磷酸氨基酸分析的方法特点和功能

中文名称磷酸氨基酸分析英文名称phosphoamino acid analysis定  义一种分析蛋白质中是否含羟基氨基酸(如丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸等)-O-磷酸酯的方法。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

什么氨基酸残基能被磷酸化

苏氨酸,丝氨酸、酪氨酸等氨基酸残基能被磷酸化,因为他们有羟基基团,可以和磷酸基团脱水生成磷酸酯。磷酸化(英语:Phosphorylation)或称磷酸化作用,指在蛋白质或其他类型分子上,加入一个磷酸(PO32-)基团,也可定义成“将一个磷酸基团导入一个有机分子”。此作用在生物化学中占有重要地位。蛋白

磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型

实验材料蛋白样品实验步骤了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型,可以限定可能的磷酸化位点,并因此简化(对多肽链中磷酸化残基的确认。磷酸化残基类型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特异性免疫检测确定。磷酸氨基酸分析是对肽键进行气相或液相水解,此水解条件下要至少保留一段磷酸酯键完整。 32p标记的磷酸蛋白质或

磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型

            实验方法原理 实验材料 蛋白样品 实验步骤 了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型

磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型

了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型,可以限定可能的磷酸化位点,并因此简化(对多肽链中磷酸化残基的确认。磷酸化残基类型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特异性免疫检测确定。磷酸氨基酸分析是对肽键进行气相或液相水解,此水解条件下要至少保留一段磷酸酯键完整。 32p标记的磷酸蛋白质或磷酸肽的水解产物与磷酸氨

肽中磷酸化氨基酸位置测定实验

实验方法原理磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐,而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。实验材料洗脱的磷酸肽(见辅助方案 1)试剂、试剂盒5%(V/V)异硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V/V)庚烷/乙酸乙酯-10 份庚烷与 1 份乙酸乙酯混

肽中磷酸化氨基酸位置测定实验

基本方案 手工EDMAN降解法             实验方法原理 磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐,而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺

肽中磷酸化氨基酸位置测定实验

实验方法原理 磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐,而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。实验材料 洗脱的磷酸肽(见辅助方案 1)试剂、试剂盒 5%(V/V)异硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V/V)庚烷/乙酸乙酯-10 份庚烷与 1 份

二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验

实验材料洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板(20 cm × 20 cm 100 维素)实验步骤1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽,短暂离心在管底收集所有的溶液。取 1 μl 肽溶液滴

骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的简介

  骨软化-肾性糖尿-氨基酸尿-高磷酸尿综合征(Fanconi syndrome)也称Fanconi-de Toni综合征、范科尼综合征、多种肾小管功能障碍性疾病。是指遗传性或获得性近端肾小管的功能异常引起的一组征候群。  骨软化-肾性糖尿-氨基酸尿-高磷酸尿综合征我国罕见,婴儿与成人均可发病,起病

二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验

基本方案             实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽

二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验

实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒 消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材 适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板(20 cm × 20 cm 100 维素)实验步骤 1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽,短暂离心在管底收集所有的溶液。

亚氨基酸是不是氨基酸?

形态类似于氨基酸(amino acid)的分子中不是含有氨基(—NH2),而是含有亚氨基(-NH-)和羧基,这样的的化合物称为亚氨基酸(imino acid),也叫亚氨酸,比如脯氨酸和羟脯氨酸。

骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的症状信息

  临床表现为肾性过多丢失而产生的全氨基酸尿、磷酸盐尿、葡萄糖尿、碳酸氢盐尿以及尿酸等有机酸尿;过多丢失电解质而产生的各种代谢性并发症,如低磷血症、低钙血症、高氯性代谢性酸中毒、维生素D缺乏病、骨质疏松、脱水、生长迟缓等;因丢失分子量小于5万的蛋白质而产生肾小管性蛋白尿。通过对氨马尿酸清除试验显示肾

治疗骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的概述

  1、病因治疗  继发性Fanconi综合征应治疗基础疾病。Wilson病或重金属中毒可通过促进毒物排泄,遗传代谢病通过饮食管理减少代谢毒性物质沉积,减轻对肾小管的损害。胱氨酸储积症继发性Fanconi综合征,应给予低胱氨酸饮食及对症治疗。骨病变可用维生素D22 5万~50万U或维生素D33 20

骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的辅助检查

  1、并发症:  骨软化-肾性糖尿-氨基酸尿-高磷酸尿综合征的常见并发症为肾小管性酸中毒;低钾血症;继发性甲状旁腺功能亢进、肾性骨病、骨畸形、骨软化症;肾结石等。  2、实验室检查:  (1)尿液检查  尿呈碱性,比重低,尿蛋白、尿糖阳性,尿钙、钾、磷、尿酸增高,呈肾性全氨基酸尿。  (2)血液检

骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的病因分析

  骨软化-肾性糖尿-氨基酸尿-高磷酸尿综合征的病因很多,可分为原发性与继发性两类。原发性Fanconi综合征又分为:婴儿型、成人型以及刷状缘缺失型三种类型。继发性Fanconi综合征又包括继发于遗传性疾病与继发于后天获得性疾病。前者包括:胱氨酸储积病、酪氨酸血症Ⅰ型、糖原贮积病ⅠⅠ型、半乳糖血症、

诊断骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的简介

  一、诊断:  根据患者有引起近端肾小管损害的病因,具备以近端肾小管损害为主的实验室证据,特别是有氨基酸尿、磷酸盐尿及葡萄糖尿,结合各疾病的特点而确立诊断(表2)。  二、鉴别诊断:  1.婴儿型Fanconi综合征鉴别诊断应注意其他原因所致的肾小管性酸中毒,肌无力症状或步态不稳类似神经系统病变或

骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的发病机制

  Fanconi综合征发病机制尚未完全阐明。目前认为不同于单项物质转运异常,即不是由于某种特异性的载体或受体缺陷所致。主要有两方面机制:  肾小管细胞膜有漏隙,不能使溶质充分再吸收  反漏的证据是肾性糖尿属A型,表明葡萄糖转运再吸收部位较少,磷酸盐、碳酸氢盐在滤过负荷减少的情况下仍有丢失。这表明它

什么是氨基酸?氨基酸的结构

氨基酸,是含有碱性氨基和酸性羧基的有机化合物。羧酸碳原子上的氢原子被氨基取代后形成的化合物。

氨基酸和必须氨基酸的定义

氨基酸是构成蛋白质的基本单位。人体营养角度,可将构成人体蛋白质的20种氨基酸分为必需氨基酸、条件必需氨基酸和非必需氨基酸。必需氨基酸是指人体需要但自己不能合成或合成速度不能满足机体需要的氨基酸必需氨基酸共有9种,即赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸和组氨酸,其中组氨

概述骨软化肾性糖尿氨基酸尿高磷酸尿综合征的临床表现

  骨软化-肾性糖尿-氨基酸尿-高磷酸尿综合征较罕见,多于成年出现症状,有肾性糖尿、多种氨基酸尿、高钙尿症、肾丢失钠、低磷血症、近端肾小管性酸中毒、低尿酸血症、肾小管性蛋白尿,低钾血症(肌无力、软瘫、周期性瘫痪等),低钙血症(手足搐搦症)等。长期低钙血症,可引起继发性甲状旁腺功能亢进、肾性骨病。本病

氨基酸代谢

氨基酸是构成蛋白质分子的基本单位。蛋白质是生命活动的基础。体内的大多数蛋白质均不断地进行分解与合成代谢,细胞中不停地利用氨基酸合成蛋白质和分解蛋白质成为氨基酸。体内的这种转换过程一方面可清除异常蛋白质,这些异常蛋白质的积聚会损伤细胞。另一方面使酶或调节蛋白的活性由合成和分解得到调节,进而调节细胞代谢

非必需氨基酸对必需氨基酸的影响

  体内需要,但体内能自己合成的氨基酸.这类氨基酸不必由食物供给.在蛋白质中常见的20种氨基酸中,除了8种必需氨基酸,其余的12种都是非必需氨基酸.非必需氨基酸的供给对于必需氨基酸的需要量是有影响的.非必需氨基酸并非机体不需要的氨基酸,它们都是蛋白质的构成材料,并且,非必需氨基酸的供给对于必需氨基酸

根据氨基酸分子的化学结构分类氨基酸

1、脂肪族氨基酸:丙、缬、亮、异亮、蛋、天冬、谷、赖、精、甘、丝、苏、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺。 2、芳香族氨基酸:苯丙氨酸、酪氨酸 3、杂环族氨基酸:组氨酸、色氨酸 4、杂环亚氨基酸:脯氨酸。

非必需氨基酸对必需氨基酸的影响

体内需要,但体内能自己合成的氨基酸.这类氨基酸不必由食物供给.在蛋白质中常见的20种氨基酸中,除了8种必需氨基酸,其余的12种都是非必需氨基酸.非必需氨基酸的供给对于必需氨基酸的需要量是有影响的.非必需氨基酸并非机体不需要的氨基酸,它们都是蛋白质的构成材料,并且,非必需氨基酸的供给对于必需氨基酸的需

根据氨基酸分子的化学结构分类氨基酸

1、脂肪族氨基酸:丙、缬、亮、异亮、蛋、天冬、谷、赖、精、甘、丝、苏、半胱、天冬酰胺、谷氨酰胺。2、芳香族氨基酸:苯丙氨酸、酪氨酸 3、杂环族氨基酸:组氨酸、色氨酸 4、杂环亚氨基酸:脯氨酸。