肽中磷酸化氨基酸位置测定实验
实验方法原理磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐，而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。实验材料洗脱的磷酸肽（见辅助方案 1）试剂、试剂盒5%(V／V)异硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷与 1 份乙酸乙酯混合2:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-2 份庚烷与 1 份乙酸乙酯混合100%(m V)三氟乙酸(TFA) 电泳缓冲液(pH 1.9 200~500 cpm 32P（用去离子水稀释 32P 正磷酸盐配制)或 2 mg／ml PTH-磷酸酪氨酸仪器、耗材微量离心管45℃ 水浴适用于契仑科夫计数法的闪烁计数器TLC 平板(20 cm × 20 cm 100 μm 纤维素)65℃ 烘箱或风扇实验步骤1. 根据候选肽段的列表确定循环数。将循环数指定为^每一循环的起始体积为 20 μl。2. 在称为反应管（微量离心管）的管子中将洗脱的肽溶解于 20......阅读全文
肽中磷酸化氨基酸位置测定实验
实验方法原理 磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐，而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。实验材料 洗脱的磷酸肽（见辅助方案 1）试剂、试剂盒 5%(V／V)异硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷与 1 份
肽中磷酸化氨基酸位置测定实验
实验方法原理磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐，而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺基噻唑啉酮。实验材料洗脱的磷酸肽（见辅助方案 1）试剂、试剂盒5%(V／V)异硫氰酸苯酯(PLTC)溶于吡啶中10:1(V／V)庚烷／乙酸乙酯-10 份庚烷与 1 份乙酸乙酯混
肽中磷酸化氨基酸位置测定实验
基本方案 手工EDMAN降解法 实验方法原理 磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸降解后释放出丝氨酸或苏氨酸和自由磷酸盐，而磷酸酪氨酸降解后释放出磷酸酪氨酸的衍生物——苯胺
磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型
实验材料蛋白样品实验步骤了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型，可以限定可能的磷酸化位点，并因此简化(对多肽链中磷酸化残基的确认。磷酸化残基类型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特异性免疫检测确定。磷酸氨基酸分析是对肽键进行气相或液相水解，此水解条件下要至少保留一段磷酸酯键完整。 32p标记的磷酸蛋白质或
磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型
实验方法原理 实验材料 蛋白样品 实验步骤 了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型
磷酸化位点分析实验确定磷酸化氨基酸类型
了解肽或蛋白质中磷酸化氨基酸的类型，可以限定可能的磷酸化位点，并因此简化(对多肽链中磷酸化残基的确认。磷酸化残基类型通常由磷酸氨基酸分析或磷酸氨基酸特异性免疫检测确定。磷酸氨基酸分析是对肽键进行气相或液相水解，此水解条件下要至少保留一段磷酸酯键完整。 32p标记的磷酸蛋白质或磷酸肽的水解产物与磷酸氨
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
2D-PP 分离磷酸肽 RP-HPLC 分离磷酸肽 高分辨凝胶电泳分离磷酸肽 IMAC 分离／富集磷酸肽 实验方法原理
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离：(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理 磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的，通常观察不到，除非采取特殊的保护措
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离
实验方法原理磷酸化分析的原理研究的最常见的磷酸化类型是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的磷酸酯化。已知发生的磷酸化还有精氨酸、组氨酸和赖氨酸的亚酰胺化，以及天冬氨酸和谷氨酸的酰化。这些修饰中的其中一些是化学不稳定的，通常观察不到，除非采取特殊的保护措施防止他们在蛋内质分离过程中消失。举例来说，组氨酸磷酸化是一
环脂肽氨基酸顺序的质谱测定
杨世忠 牟伯中 吕应年 陈涛 (华东理工大学化学与制药学院，上海 200237) 摘要：从一株枯草芽孢杆菌的培养液中分离到一种生物表面活性剂，红外光谱、茚三酮显色及质谱分析表明它是一种具有环状结构的脂肽。质谱显示脂肽的脂肪酸部分为β－羟基脂肪酸；氨基酸分析表明肽部分由4 个亮氨酸、1 个天门东
氨基酸序列测定实验
基本方案 测定通过 SDS-PAGE 转移到 PVDF 膜上样品的氨基酸序列 辅助方案 准备SDS-PAGE蛋白质样品 实验方法原理
氨基酸序列测定实验
实验方法原理 实验材料 分离胶和积层胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒 4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%（V／V）考马斯亮蓝的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液仪器、耗材 微量注射器或凝胶加样吸头PVDF 膜小型电转装置自动蛋白质
对氦氖谱线位置的测定在实验中起什么作用
氦氖激光器由放电管、共振腔、激光电源三部分组成。放电管包括放电毛细管、储气管和电极三部分。放电毛细管是发生气体和产生激光的区域管内径为1.2-1.3mm。氖气管与放电毛细管同轴并相通。氖气管相当于扩大了放电毛细管储气的体积，可缓冲因氖气逃逸快而造成氦、氖气压比失调，并且对漏入的杂质气体起稀释作用。此
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——IMAC－分离/富集磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤磷酸肽分析的常见困难是由磷酸化的低化学计量值导致的，样品中相同序列肽段的磷酸肽的含量要比非磷酸化肽段含量少得多，这种情况下即使 32p标记的 2D-PP 上的点，经全蛋白质水解及 HPLC 组分收集，已经确定磷酸肽存在，用质谱技术也难以鉴定磷酸肽。数据依赖的
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
磷酸化位点分析实验_磷酸肽的化学测序
实验方法原理磷酸化位点的确定也使用一些通用方法；磷酸化蛋白质被纯化，如果可能蛋白质要均一；磷蛋白被特异性的化学或酶反应切断、产生肽混合物，其中含有一到两个磷酸肽不同之处在干其分离磷酸肽的策略是为了确定氨基酸序列，定位肽段内磷酸化的残基。上面所述的分离方法， 2D-PP 作图、 HPLC 或 lMAC
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
实验材料洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 维素）实验步骤1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽，短暂离心在管底收集所有的溶液。取 1 μl 肽溶液滴
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽
二次鉴别性消化法检测磷酸肽中特定氨基酸实验
实验方法原理 实验材料 洗脱的磷酸肽试剂、试剂盒 消化酶消化缓冲液2-巯基乙醇合适 pH 的电泳缓冲仪器、耗材 适合于酶消化的温度的水浴TLC 平板（20 cm × 20 cm 100 维素）实验步骤 1. 在微量离心管中用 50 μl 合适的缓冲液溶解洗脱下的磷酸肽，短暂离心在管底收集所有的溶液。
多磷酸化肽标记技术
蛋白质磷酸化是生物界最普遍，也是最重要的一种蛋白质翻译后修饰，20世纪50年代以来一直被生物学家看作是一种动态的生物调节过程。在细胞中，大概有1/3的的蛋白质被认为是通过磷酸化修饰的。蛋白质的磷酸化修饰与多种生物学过程密切相关，如DNA损伤修复、转录调节、信号传导、细胞凋亡的调节等。磷酸化蛋白质及多
离子肽的合成过程中涉及哪些氨基酸？
丙氨酸（Alanine）：一种非极性氨基酸，常用于合成疏水性肽段。 甘氨酸（Glycine）：一种极性氨基酸，常用于合成肽链的连接部分。 丝氨酸（Serine）：一种极性氨基酸，可以形成磷酸酯键。 天冬氨酸（Aspartic acid）：一种极性氨基酸，可以形成磷酸酯键。 谷氨酸（Glu
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——RPHPLC－分离磷酸肽
实验材料蛋白样品仪器、耗材质谱仪实验步骤反相 HPLC 分段收集磷酸肽重现性好，简单，且不需要特殊装备。在 RP-HPLC 中，磷酸肽根据其疏水性被分离。分离后收集的组分经 Cerenkov计数检测。对 Cerenkov计数和时间作图，显示具放射性活性的组分的计数。纯化的磷酸肽用 MS 分析；可用不
复杂基体中目标肽的测定
本文介绍了使用Thermo Scientific公司的TSQ Quantum Ultra质谱仪进行复杂生物机体中目标肽的方法，结果表明，基于串连质谱的选择反应监测（SRM）流程，该方法可以在具有高化合物背景的复杂基体中检测低浓度水平肽，同时保证良好的定量准确度和精密度。 目前一般生物标
植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验
实验方法原理氨基酸与水合茚三酮作用后，能产生二酮茚－二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ，即可计算出样品中氨基酸的含量。实验材料根系伤流液试剂、试剂盒95﹪乙醇谷基酸氮标准母液水合茚三酮仪器、耗材分光光度计加热设备试管试管架移液
植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验
实验方法原理 氨基酸与水合茚三酮作用后，能产生二酮茚－二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ，即可计算出样品中氨基酸的含量。实验材料 根系伤流液试剂、试剂盒 95﹪乙醇谷基酸氮标准母液水合茚三酮仪器、耗材 分光光度计加热设备试管试
植物根系伤流液中氨基酸总量的测定实验
实验方法原理：氨基酸与水合茚三酮作用后，能产生二酮茚－二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物，其颜色的深浅与氨基酸的含量成比例。测定反应产物在520nm波长处的吸光度值 ，即可计算出样品中氨基酸的含量。实验材料：根系伤流液试剂、试剂盒：95﹪乙醇
蛋白质磷酸化的测定实验
代谢标记 X射线片放射自显影检测32P标记的蛋白质 实验材料 细胞
磷酸化位点分析实验磷酸肽的质谱分析
实验方法原理用于确定磷酸肽中磷酸化位点的压谱方法有两种不同的基本原理。第一种方法依赖于在质谱仪条件下，如在 ESI 质谱仪的碰撞室或离子源中，或MALDI-MS 的 PSD 过程中，磷酸酯键的化学稳定性。因此，磷酸肽可通过磷酸酯键断裂产生的诊断离子鉴定。第二种方式依靠检测磷酸酯基团使肽段增加的质量数
磷酸化位点分析实验磷酸肽的分离——2DPP－分离磷酸肽
实验方法原理即使纳喷 MS/MS 技术已经成功用于直接分析蛋白酶解产生的磷酸肽但是出于以下一些原因，通常建议在质谱分析前作一些分离：(1) 磷酸肽在蛋白酶切产物中通常只占少数因此容易淹没在低率度离子产生的总背景中，肽分离技术可浓缩分析物，因此会提高信噪比。(2) 如果磷酸肽被放射性标记并具有相同比活