样品总RNA的提取
实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化，是进行RNA方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的有效抑制；有效地将RNA从DNA和蛋白混合物中分离；对于多糖含量高的样品还牵涉到多糖杂质的有效除去。但其中最关键的是抑制RNA酶活性。RNA的提取目前阶段主要可采用两种途径：提取总核酸，再用氯化锂将RNA沉淀出来；直接在酸性条件下抽提，酸性下DNA与蛋白质进入有机相而RNA留在水相。第一种提取方法将导致小分子量RNA的丢失，目前该方法的使用频率已很低。主要试剂RNA提取试剂盒，0.05%焦碳酸二乙酯(DEPC)，75%乙醇，氯化锂/尿素溶液[氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌]，悬浮液[10mM ......阅读全文
样品总RNA的提取
实验概要本实验介绍了样品总RNA的提取方法。完整RNA的提取和纯化，是进行RNA方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有RNA的提取过程中都有五个关键点，即：样品细胞或组织的有效破碎；有效地使核蛋白复合体变性；对内源RNA酶的
总RNA的提取
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮ
总RNA的提取
完整RNA 的提取和纯化，是进行RNA 方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）
总RNA提取（Trizol提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA 制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA 时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase 的作用。1. 提取组织RNA 时，每50～100mg 组织用1ml
总RNA提取实验
实验方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离，使RNA 与蛋白质分离，并将RNA 释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA ，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA 进入水相
总RNA提取实验
实验方法原理 一些公司推出的总RNA 提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RNA 酶抑制剂，异硫氰酸弧(GTC)和β-巯基乙醇，加上整个操作都在冰浴下进行，这样就能显著降低RNA 的
细胞总RNA的提取
提取细胞RNA的步骤：1) 六孔板每孔细胞中加入1ml Trizol，冰上放置5min，枪头吹打。2) 将各孔裂解液吸到1.5 ml EP管中，加入氯仿0.2ml/管，用力振摇15s。15－30℃下孵育2-3min，离心（4℃，12，000g，15min）。3) 离心后液体分为三层（上层－无色
小麦总RNA的提取
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末，转入已准备好的离心管中，剧烈震荡。
小麦总RNA的提取
实验概要从黄化小麦苗中提取总RNA，可以为cDNA文库的构建做好准备。实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄
总RNA的提取（Trizol法提取）
在收集到生物材料之后，最好能即刻进行RNA制备工作。若需暂时储存，则应以液氮将生物材料急速冷冻后，储存于-80℃冷冻柜。在制备RNA时，将储存于冷冻柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破细胞，不可以先行解冻，以避免RNase的作用。1. 提取组织RNA时，每50～100mg组织用1ml
总RNA提取实验步骤
一、细胞或组织破碎 1. 微生物材料 （1）发酵3~4天（或对数生长期）的菌体，离心收集菌丝体（动植物材料无需此步处理）。 （2）用经DEPC处理的水洗菌丝体2~3次，并尽量除去残存的水。 （3）加液氮充分研磨，使其成为粉末，以释放RNA。 （4）研磨后的样品转移至12 ml 变性液的容器中匀浆。
植物总RNA的提取实验
研磨法 实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂
总细胞RNA的提取方法
实验概要总细胞RNA的提取在建库过程中，由于cDNA合成这一步将使用通用引物oligo dT，因此在总RNA提取这一步中，提取纯化mRNA不是非常必要的。提取高纯度的总细胞RNA足可以被用作cDNA合成的模板，目前提取RNA的方法很多，也有不少商业化的试剂盒。实验步骤1. TRIZOL法 1)
植物总RNA的提取规程
一、实验目的掌握植物总RNA提取的原理和方法二、实验原理RNA的提取：破坏细胞膜—除去蛋白—除去DNA—除去盐离子。RNase是一类生物活性极其稳定的酶类，能耐高温、耐酸、耐碱，高压灭菌处理也不能使其完全失活。在提取RNA实验中，要尽量抑制RNase的活性。•DEPC（焦磷酸二乙酯）是很强的RNas
小麦总RNA的提取方法
实验步骤1. 所有容器高温灭菌两次，DEPC高温灭菌，所有的试剂用DEPC配制，高温灭菌。2. 在一灭菌2mL管中加入：5mol/L异硫氰酸胍0.7mL、苯酚0.4mL、NaAc(pH4.0) 0.1mL。3. 称取0.2g小麦黄化苗的叶片，迅速在液氮中研磨成粉末，转入已准备好的离心管中，剧烈震荡。
植物总RNA的提取实验
实验方法原理 在液氮中研磨植物材料, 使部分细胞破碎, 进一步使植物细胞在裂解液中裂解, 用醋酸钠和氯仿沉淀蛋白质, 异丙醇沉淀核酸, 溶解后经氯化锂沉淀总RNA, 洗涤后得到高质量的RNA。本实验旨在了解和掌握植物总RNA 的分离和纯化方法。实验材料 植物RNA试剂、试剂盒 尿素Tris-HClN
植物组织总RNA的提取
实验概要由于RNA分子的结构特点，容易受RNA酶的攻击反应而降解，加上RNA酶极为稳定且广泛存在，因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染，并设法抑制其活性，这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶，人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染，因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换（使用一
多糖多酚植物总RNA快速提取试剂提取水稻胚乳总RNA
实验概要采用TAKARA的试剂提取水稻胚乳，主要是后期的胚乳RNA量偏少，不易提取！实验步骤1. 称量100mg的新鲜或者超低温冻结的植物RNA提取样品，迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。2. 向研钵中加入1000μL RNAiso-mate for
真菌菌丝的总RNA的提取
试剂：RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭
总RNA提取实验——CsCl法
实验材料RNA试剂、试剂盒PBS异硫氰酸胍CsClDEPC无水乙醇仪器、耗材注射器电泳仪离心机培养箱实验步骤一、 用于单层培养细胞 1. 室温下用PBS冼涤细胞，每平皿用5 ml，洗2次。2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液，并使之遍布整个平皿。3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿，回收粘稠的
Trizol法提取总RNA的原理
Trizol试剂的主要成分是苯/酚。苯/酚的主要作用是对细胞进行裂解，从而使细胞当中的蛋白质以及核酸物质解聚而得以释放。苯/酚虽然可以有效的使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性，因此Trizol中还加入了8－羟基喹/啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。Tr
植物总RNA的提取实验技术
一、实验目的 通过本实验学习从植物组织中提取RNA的方法 二、实验原理 RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的 RNA，必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度强变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释
真核细胞总RNA的分离提取
RNA是基因表达产物，由以下几类分子组成，rRNA（占细胞总RNA的80%～85%）、tRNA和核内小分子RNA（占10～15%）、mRNA（占1～5%）。其中mRNA是分子生物学的主要研究对象，分离制备mRNA是克隆基因，分析基因表达以及建立cDNA文库的首要步骤。真核细胞总RNA分离提取的目的是
细胞总RNA的提取操作步骤
一、准备1、 物品：Trizol、氯仿（三氯甲烷）、异丙醇、75%灭酶异醇、冷PBS、1.5ml灭酶EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管 2、 打开冷冻离心机4℃预冷 二、操作步骤： 将Trizol、氯仿、冷PBS、EP管、灭酶枪头、一次性手套、EP管架、吸管等物品带入细胞室。
动物RNA提取实验——SV总RNA试剂盒提取法
动物RNA提取可用于：（1）研究生物体基因调控机制；（2）分子克隆和基因表达以获得该性状基因；（3）可以对特定的基因表达进行定量的检测，从分子水平精确的了解细胞生命活动的规律。实验方法原理SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养
Trizol法提取总RNA提取的注意事项
1.杜绝外源酶的污染。（1）严格戴好口罩，手套。（2）实验涉及的离心管，Tip头，移液器杆，电泳槽，实验台面等要彻底处理。（3）实验所涉及的试剂/溶液，尤其是水，必须确保RNase-Free。2.阻止内源酶的活性。（1）选择合适的匀浆方法。（2）选择合适的裂解液。（3）控制好样品的起始量。
总RNA提取实验——氯化锂提取法
实验方法原理用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶，用氯化锂选择沉淀RNA ，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高，小RNA 片断丢失的缺陷。实验材料微生物动物细胞植物组织试剂、试剂盒氯化锂尿素Tris-HCLEDTASDS仪器、
真菌菌丝的总RNA的提取方法
1.实验试剂 (1)RNA提取缓冲液(CTAB):2% CTAB(W/V),2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置),25mM EDTA,0.5g/L 亚精胺Spermidine,2.0M NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入
总RNA提取与Northern杂交（1）
一、 总RNA的提取1、 取组织10-50毫克，剪切成大小在0.5厘米以内的碎片，加入×5的RNA later（约2毫升）。样品在37度可保存1天。室温下1周，4度下1个月。2、 匀浆：用Rnase Erase spray（ICN）清理匀浆器头部（7mm），用DEPC水和乙醇清洗，将上述样品用镊
怎样从总RNA中提取mRNA
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有由20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴，寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理。具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用。磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高