LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 烟草BY-2原生质体中At2g38360-DsRed的定位和平行双光子荧光显微镜对pa-GFP的3D监测（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 双光子荧光下降的量化分析，给出了一个123s的扩散时间常数。Figs. 3 and 4中的数据源于两个不同的实验，解释了荧光值的绝对差异（不同的表达水平）和统计分析。 (b) At2g38360-DsRed作为转染标记在核中pa-GFP激活前的荧光 (c) At2g38360-DsRed和pa-GFP数据采集后400 s的3D荧光图像，清楚显示了荧光团从细胞核向细胞质的扩散。Fig. 6.在核内光激活前后,烟草BY-2原生质体内活跃转运的pa-GFP-LCL1的3D动态监测和量化分析。(a) 在pa-GFP-LCL1双光子激发后核内的单光子荧光表明双光子激活荧光增强 (b) pa-GFP被双光子激活后双指数曲线拟合（红......阅读全文
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 烟草BY-2原生质体中At2g38360-DsRed的定位和平行双光子荧光显微镜对pa-GFP的3D监测（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 双光子荧光下降的量化分析，给出了一个123s的扩散时间常数。Figs. 3 and 4中的数据源于两个不同
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（一）
LaVision双光子显微镜-多焦点扫描与光激活蛋白在核转运研究中的应用Multifocal two-photon laser scanning microscopy combined with photo-activatable GFP for in vivo monitoring of intr
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（二）
3. 结果Fig. 2.含有核输入输出信号的拟南芥转录因子LCL1 (分别为NLS, NES). 由质粒编码GFP融合蛋白转染的烟草BY-2原生质体。通过单光子共聚焦激光扫描显微镜分析的GFP融合蛋白稳定态定位。(a) GFP-LCL1 揭示的核与细胞质间的分区 (b) 使用核输出抑制剂leptom
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（三）
2.2.多线TPLSM中通过成像检测释放光 在单光束TPLSM中，光电倍增管PMT或者雪崩二极管APD可以很方便地用于释放光检测，由于双光子激发的原理，激发只发生在激光焦点处。因此，用于屏蔽离焦光线的共焦小孔变得不必要，并且可以使用NDD检测。这意味着激发光不会被送回扫描镜，而是直接进入位于靠
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（一）
Journal of Neuroscience Methods 151 (2006) 276–286Application of multiline two-photon microscopy to functional in vivo imagingRafael Kurtz a,∗, Matthi
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（二）
2. 方法与结果 为了从激光扫描显微镜的功能性成像中得出重要结论，一个高的时间分辨率是很重要的。在低光情况下，这通常通过进行单线扫描来获取。这被以一个垂直系统（VS）神经元的突触前分支的激光共聚焦(Leica SP2)钙离子成像示例 (see Fig. 1, Table 1). 这类神
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（四）
2.3. 多线TPLSM中的获取模式 我们以两种获取模式操作多线TPLSM：第一种，整个研究使用所谓“帧扫描”模式，以64束激光在X、Y方向扫描样品。因此焦平面上激发了均一性照明，假定光束阵列的横向步长尺寸没有过于粗糙（通常使用≤400 nm的步长尺寸）。在Fig. 3A，展示了以“帧
LaVision双光子显微镜肿瘤生长与入侵动态成像（三）
Fig 4. HT-1080双色细胞的原位入侵模型。a 注射后6天入侵类型的分类。缺少入侵（上，左）并且散布单个细胞（上，右；白色箭头），散射的或者紧密地丝状整体入侵（下图）。标尺250um。 b 45个连续的非依赖性肿瘤的按中所分入侵模式的频率。11天时，沿着纹状肌肉纤维集体入侵丝的定位。
可见光双光子激发及多焦点激光扫描的结合（一）
对活体生物样品的三维观测是了解细胞功能的重要方法之一。目前已有的三维荧光成像技术包括光片显微成像技术、晶格光照明技术以及激光扫描显微成像技术(如共聚焦显微镜及双光子显微镜)等。其中激光扫描显微镜利用旋转盘可以进行多焦点的激光扫描,提高时间分辨率,而且有利于减少活细胞成像中的光损伤。本篇文献主要实现了
可见光双光子激发及多焦点激光扫描的结合（二）
在此基础上,实验对海拉细胞中的高尔基体(mTFP1)和纤颤蛋白(EGFP)进行了在体成像,见图3(j)-(n),青色为mTFP1,绿色为EGFP,实验中两种荧光蛋白同时成像,最终采用光谱分离法将不同蛋白的荧光信号分离出来。图4 海拉细胞在体延时三维观察高尔基体的成像结果后续还进行了海拉细胞的活体高尔
LaVision双光子显微镜肿瘤生长与入侵动态成像（二）
Fig 2. 肿瘤生长阶段。 a 由落射荧光显微镜监测的移植瘤生长和入侵的时间进程。新生血管的插入，不存在（3天）和存在（7天）。标尺1mm。b 通过以day 1的体积进行归一化的肿瘤体积。mean+-SD（n=9）。c HT-1080移植肿瘤在6天的时候的肿瘤形态，血管化，分生和凋亡。
LaVision双光子显微镜肿瘤生长与入侵动态成像（一）
Dynamic imaging of cancer growth and invasion: a modiWedskin-fold chamber modelStephanie Alexander · Gudrun E. Koehl ·Markus Hirschberg · Edward K. Ge
LaVision双光子显微镜无损伤无标记THG成像（三）
Fig. 4.THG成像深度与自动化细胞检测 (A–C) 小鼠额前叶皮质的THG图像，成像深度分别为100, 200, and 300 μm 。每幅图像都是3个以2微米深度间隔独立图像的最大密度投影(D) 110 μm深度处神经元细胞的自动检测THG图像。细胞检测的运算法则定义为以红色显示的
LaVision双光子显微镜亚细胞水平的深层组织成像（三）
Figure 2 NIR和IR双光子激发和释放光谱。通过在同一焦平面对不同波长的Ti：Sa激光和OPO激光获取多幅图像并对扫描间的能量强度和漂白进行校正后的激发光谱。为获取红色和内在荧光团以及SHG的释放光谱，信号通过物镜，光谱仪和CCD相机检测。 (a) 自然状态下，SDS-PAGE前后的
多光子显微镜中的焦点深度扩展方法（二）
为了解决使用单个环扩展焦深光通量不够的问题， BINGYING CHEN等人利用超短脉冲相干长度短的特性，采用多环结构的分束掩模，超快激光脉冲经过时会被分束掩模分成不同的环形子束，每个子束都有时间延迟，也就是每个子束在不同的时间点在物镜的焦平面上形成贝塞尔焦点。如果每个环引入的时间延迟大大超过了激光
多光子显微镜中的焦点深度扩展方法（一）
双光子激光扫描显微镜结合钙指示剂是活体神经元信号探测的金标准。神经网络中的神经元分布在三维空间中，监测它们的活动动态需要一种能够快速提高体积成像速率的方式。但是，使用光栅扫描多光子显微镜对大量图像进行成像，如果采用高数值孔径（NA）的物镜来获得较高的横向分辨率时，会导致较小的聚焦深度，为了获得小聚焦
Lavision双光子显微镜毛囊再生过程活体成像（二）
Figure 2 |生长过程中处于形态重组的干细胞progeny隔层. a, 毛囊生长中的向下伸展。生长状态的活毛囊三个连续时间点（3小时间隔）的光学切片，展示了progeny组分向下的伸展（左三） 。核间距增加，干细胞和progen隔层(大约生长初期 II to IIIa)中的总细胞数被定
Lavision双光子显微镜毛囊再生过程活体成像（一）
Live imaging of stem cell and progeny behaviour in physiological hair-follicle regenerationPanteleimon Rompolas1, Elizabeth R. Deschene1*, Giovanni
LaVision双光子显微镜无损伤无标记THG成像（二）
主要结果Fig. 1.无标记活体大脑的三次谐波显微成像(A)脑组织THG成像的epidetection几何学图示。插图：THG原理。注意基质中没有光学激发发生。(B) 树突处的聚焦激光束。通过将激光聚焦体积设定到树突直径的几倍大小，可以获得部分相匹配，显著的THG信号将会产生。(C)细胞
LaVision双光子显微镜无损伤无标记THG成像（一）
Label-free live brain imaging and targeted patching with third-harmonic generation microscopyStefan Wittea,b,1, Adrian Negreana,b,c, Johannes C. Lodde
多光子显微镜成像技术：双光子显微镜角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5层组成(图1),从外到内依次是上皮层,鲍曼层、基质、角膜后弹力层(间质膜)、内皮层。 wx_article_20200815180121_819doe.jpg 图1 角膜的组织学结构 上皮层负责阻挡异物落入角膜,厚约50μm,由三
多光子显微镜成像技术：双光子显微镜角膜成像
角膜提供了眼睛的大部分折射能力,由5层组成(图1),从外到内依次是上皮层,鲍曼层、基质、角膜后弹力层(间质膜)、内皮层。图1 角膜的组织学结构上皮层负责阻挡异物落入角膜,厚约50μm,由三种细胞构成,从外到内依次是表层细胞、翼细胞和基底细胞。只有基底细胞可进行有丝分裂和分化,基底细胞的补充是由从角膜
LaVision双光子显微镜呼吸道网络中的神经元活动
Glycinergic interneurons are functionally integrated into the inspiratory network of mouse medullary slicesStefan M. Winter & Jens Fresemann & Christi
LaVision双光子显微镜亚细胞水平的深层组织成像（四）
Figure 4．IR-MPM的光漂白，光毒性和组织穿透性. (a)以75mW能量的760, 880, and 1100 nm 激发波长连续扫描的释放光的下降时测量的DsRed2光漂白。样品被进行250次连续扫描，释放光强度以整个扫描区域的平均像素强度量化，并对首幅图像强度归一化。虚线表明了
LaVision双光子显微镜亚细胞水平的深层组织成像（二）
系统性能和Ti:Sa与OPO激光的同时使用 为了同时获取样品Ti：Sa和OPO的激发，一个分光器将Ti：Sa激光分解为泵浦OPO光束和直接成像光束(Figure 1a). 分光比例取决于足够激发所需的光亮，先后依赖于样品特征（光密度，连续性和荧光团吸收截面）和想要的成像深度。在实际应用
LaVision双光子显微镜亚细胞水平的深层组织成像（五）
结论 这些结果表明红外双光子和二次谐波产生显微成像对于无毒害的时间分辨的细胞行为调查的深层组织成像尤其有利。作为与其它脉冲飞秒激光系统相比的优势，如Ch:forsterite (1230 nm) 和 Fianium fiber (1064 nm) 激光器，OPO产生的波长是可调谐的
LaVision双光子显微镜亚细胞水平的深层组织成像（一）
红外双（多）光子显微镜：亚细胞水平的深层组织成像Volker Andresen1,2, Stephanie Alexander1, Wolfgang-Moritz Heupel1, Markus Hirschberg1, Robert M Hoffman3 and Peter Friedl1,4Cu
Lavision双光子共聚焦显微镜应用：毛囊再生过程活体成像
组织的发生与再生依赖于细胞-细胞间相互作用和指向干细胞的信号以及它们的直接增殖。但是，引导组织适当再生的细胞行为还没有被很好的理解。运用一种新的，非侵入的双光子成像技术，我们研究了活鼠随时间推移的生理性毛囊再生。通过这种方法，我们监测了真皮层干细胞和它们的后代在生理性毛囊再生过程中的行为，并指出了间
双光子显微镜的双光子显微镜的优势
双光子荧光显微镜有很多优点：1）长波长的光比短波长的光受散射影响较小容易穿透标本；2）焦平面外的荧光分子不被激发使较多的激发光可以到达焦平面，使激发光可以穿透更深的标本；3）长波长的近红外光比短波长的光对细胞毒性小；4）使用双光子显微镜观察标本的时候，只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。所以，双光子显
多光子共聚焦扫描显微镜的原理以及应用
多光子共聚焦显微镜是光学显微镜的重大改进，主要表现为可以观察活细胞、固定细胞和组织的深层结构，并且可以得到清晰锐利的多层Z平面结构，即光学切片，并以此可以构建标本的三维实体结构。共聚焦显微镜采用激光光源，经过扩充后充满整个物镜后焦平面，然后经过物镜的透镜系统，在标本的焦平面上会聚成非常小的点。根据物