可见光双光子激发及多焦点激光扫描的结合（二）
在此基础上,实验对海拉细胞中的高尔基体(mTFP1)和纤颤蛋白(EGFP)进行了在体成像,见图3(j)-(n),青色为mTFP1,绿色为EGFP,实验中两种荧光蛋白同时成像,最终采用光谱分离法将不同蛋白的荧光信号分离出来。图4 海拉细胞在体延时三维观察高尔基体的成像结果后续还进行了海拉细胞的活体高尔基体的三维时间分辨成像,实验使用60×/NA 1．3的硅油浸物镜及直径为1．0AU的小孔。二维图像采集的帧速率为20fps,利用样品中40个不同层的荧光图像形成3D荧光体成像,1次体成像需要2 s采集,然后重复采集18次,成像体积大小20×20×2μm(xyz)。激发波长为530 nm,激发强度为1．25×105 W/cm2,成像结果见图4。图5 PI处理后的海拉细胞荧光图像后续实验使用碘化丙啶(PI)来指示细胞在7、8、9和10分钟的延时观察后的损伤情况,来验证该光学系统对活细胞长期观察的适用性。在观察期间,88个焦......阅读全文
可见光双光子激发及多焦点激光扫描的结合（二）
在此基础上,实验对海拉细胞中的高尔基体(mTFP1)和纤颤蛋白(EGFP)进行了在体成像,见图3(j)-(n),青色为mTFP1,绿色为EGFP,实验中两种荧光蛋白同时成像,最终采用光谱分离法将不同蛋白的荧光信号分离出来。图4 海拉细胞在体延时三维观察高尔基体的成像结果后续还进行了海拉细胞的活体高尔
可见光双光子激发及多焦点激光扫描的结合（一）
对活体生物样品的三维观测是了解细胞功能的重要方法之一。目前已有的三维荧光成像技术包括光片显微成像技术、晶格光照明技术以及激光扫描显微成像技术(如共聚焦显微镜及双光子显微镜)等。其中激光扫描显微镜利用旋转盘可以进行多焦点的激光扫描,提高时间分辨率,而且有利于减少活细胞成像中的光损伤。本篇文献主要实现了
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（二）
3. 结果Fig. 2.含有核输入输出信号的拟南芥转录因子LCL1 (分别为NLS, NES). 由质粒编码GFP融合蛋白转染的烟草BY-2原生质体。通过单光子共聚焦激光扫描显微镜分析的GFP融合蛋白稳定态定位。(a) GFP-LCL1 揭示的核与细胞质间的分区 (b) 使用核输出抑制剂leptom
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（二）
2. 方法与结果 为了从激光扫描显微镜的功能性成像中得出重要结论，一个高的时间分辨率是很重要的。在低光情况下，这通常通过进行单线扫描来获取。这被以一个垂直系统（VS）神经元的突触前分支的激光共聚焦(Leica SP2)钙离子成像示例 (see Fig. 1, Table 1). 这类神
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（一）
LaVision双光子显微镜-多焦点扫描与光激活蛋白在核转运研究中的应用Multifocal two-photon laser scanning microscopy combined with photo-activatable GFP for in vivo monitoring of intr
LaVision双光子显微镜多焦点扫描与光激活蛋白在...（三）
Fig. 5. 烟草BY-2原生质体中At2g38360-DsRed的定位和平行双光子荧光显微镜对pa-GFP的3D监测（64 foci, 920 nm, 240 mW)。 (a) 双光子荧光下降的量化分析，给出了一个123s的扩散时间常数。Figs. 3 and 4中的数据源于两个不同
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（一）
Journal of Neuroscience Methods 151 (2006) 276–286Application of multiline two-photon microscopy to functional in vivo imagingRafael Kurtz a,∗, Matthi
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（四）
2.3. 多线TPLSM中的获取模式 我们以两种获取模式操作多线TPLSM：第一种，整个研究使用所谓“帧扫描”模式，以64束激光在X、Y方向扫描样品。因此焦平面上激发了均一性照明，假定光束阵列的横向步长尺寸没有过于粗糙（通常使用≤400 nm的步长尺寸）。在Fig. 3A，展示了以“帧
LaVision双光子显微镜多线扫描双光子成像（三）
2.2.多线TPLSM中通过成像检测释放光 在单光束TPLSM中，光电倍增管PMT或者雪崩二极管APD可以很方便地用于释放光检测，由于双光子激发的原理，激发只发生在激光焦点处。因此，用于屏蔽离焦光线的共焦小孔变得不必要，并且可以使用NDD检测。这意味着激发光不会被送回扫描镜，而是直接进入位于靠
多光子显微镜中的焦点深度扩展方法（二）
为了解决使用单个环扩展焦深光通量不够的问题， BINGYING CHEN等人利用超短脉冲相干长度短的特性，采用多环结构的分束掩模，超快激光脉冲经过时会被分束掩模分成不同的环形子束，每个子束都有时间延迟，也就是每个子束在不同的时间点在物镜的焦平面上形成贝塞尔焦点。如果每个环引入的时间延迟大大超过了激光
关于双光子激光扫描显微镜的主要功能介绍
双光子激光扫描显微镜是一种用于生物学、基础医学、药学领域的分析仪器，于2011年12月9日启用。 双光子激光扫描显微镜的技术指标：它包括：多光子荧光检测系统、共聚焦检测系统、光谱扫描检测系统、计算机软硬件系统等部分。 双光子激光扫描显微镜的主要功能： 双光子扫描显微镜是结合激光扫描共聚焦显
关于多焦点多光子显微技术的简介
多焦点多光子显微技术是 20 世纪末发展起来的, 它与单光束激光扫描显微镜 相比最大的变化是： （1） 需要一 个光束分离装置（如右图）产生多个焦点； （2） 需要一个探测器能够探测从所有焦点处发出的荧光信号 。 多焦点多光子显微技术采用旋转微透镜盘 、微透镜阵列 [6]、级联分束镜 [7
多焦点多光子显微技术进展的概述
生物医学发展对检测和成像系统的一个要求是在一次测量中能以很高的灵敏度和特异性得到多种功能信息, 另一个要求是能够无损、实时监测活体细胞的动态过程 , 这也成 为了荧光显 微技术不断发展和进步的源动力 。多焦点多光子显微技术在提高激发光能 利用率的同时 , 也提高了成像速度, 从而使实时双光子激发
关于多焦点多光子显微技术的简介
多交点多光子显微技术（multifocal multiphoton microscopy，MMM）提高了激发光能的利用率和成像速度，可以实现样品的三维快速多光子激发荧光显微成像，并且具有对活体样品损伤小，成像深度大，图像信噪比高等优点。 荧光显微技术已经成为生物医学领域的重要研究工具，激光扫描
（双光子、共聚焦）荧光显微镜和普通显微镜的区别
最近试着做了一些小鼠的冰冻切片，接下来要使用荧光显微镜看自己打的病毒是否在自己想要的脑区。荧光显微镜的一些基本原理需要简单学习一下，也在此分享一下。 荧光显微镜是利用紫外线为光源，用以照射被检验的物体，使该物体发出光源，然后在显微镜下进行对物体的观察。主要是用于免疫荧光细胞，主要是由光源、滤板
双光子激发的基本原理
双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度，为了不损伤细胞，双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。
关于多光子激发成像技术特点的概述
Periasamy 和 Skoglund 等比较了相同光学配置下，双光子激光扫描显微镜和共聚焦扫描显微镜 [4]对非洲蟾蜍囊胚以及神经轴胚体细胞的成像能力。 研究结果表明，双光子激发成像穿透深度大、受细胞的固有荧光影响小。 因而 ，双光子提供了研究细胞内动力学、物质空间分布及结构的最佳方法。与荧
关于双光子显微镜的原理概述
双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子
双光子显微镜简介
双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子；其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子
双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧
双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。 双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是
双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧
双光子荧光显微镜是结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术的一种新技术。 双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双
简述多光子激发基本物理原理
通常情况下，一个分子或者原子每次只能吸收一个光子 ,从基态跃迁到激发态。 当光强足够高时，就会产生多光子跃迁，即一次可以吸收多个光子。以荧光物质的双光子吸收为例： 荧光分子同时吸收两个相同频率的光子 ，被激发至高能级，经过一个弛豫过程后发生自发跃迁，辐射出一频率略小于两倍入射光频率的荧光光子。
多光子显微镜中的焦点深度扩展方法（一）
双光子激光扫描显微镜结合钙指示剂是活体神经元信号探测的金标准。神经网络中的神经元分布在三维空间中，监测它们的活动动态需要一种能够快速提高体积成像速率的方式。但是，使用光栅扫描多光子显微镜对大量图像进行成像，如果采用高数值孔径（NA）的物镜来获得较高的横向分辨率时，会导致较小的聚焦深度，为了获得小聚焦
双光子荧光显微镜的技术特点和使用技巧
双光子激发的基本原理是：在高光子密度的情况下，荧光分子可以同时吸收 2 个长波长的光子，在经过一个很短的所谓激发态寿命的时间后，发射出一个波长较短的光子;其效果和使用一个波长为长波长一半的光子去激发荧光分子是相同的。双光子激发需要很高的光子密度，为了不损伤细胞，双光子显微镜使用高能量锁模脉冲激光器。
关于双光子激发显微镜的基本介绍
双光子激发显微镜是一种荧光成像技术，对活体组织能达到很高的深度，最深可达1毫米。 作为多光子荧光显微技术的一种特殊形式，它使用能激发荧光染料的红移激发光线。每一次激发，两个红外光光子都会被吸收。一方面，使用红外激发光线能减少光线在组织内的散射；另一方面，多光子吸收背景信号会受到强烈抑制，因此这
关于正置多焦点多光子显微镜的简介
正置多焦点多光子显微镜是一种用于生物学领域的分析仪器，于2016年05月27日启用。 正置多焦点多光子显微镜的技术指标： 多种激光器灵活选择：405 nm、445 nm、488 nm、515 nm、561 nm、638 nm，输出功率可调；检测模块“标准”：ICX 285 感光元件（CCD）
共聚焦的共焦显微
共焦显微技术是由美国科学家M.Minsky在1957年提出的，当时的主要目的是消除普通光学显微镜在探测样品时产生的多种散射光。20世纪60年代通过提高扫描精度突破了普通宽场成像的分辨率限制，在20世纪80年代研制成商用共焦显微镜。共焦显微镜分为普通光照明激发和激光照明激发两种类型，而以后者应用最为广
双光子共聚焦显微镜
双光子共聚焦显微镜是为了解决生物检测中样品染料标记的光漂白现象而提出的，因为共焦孔径光阑必须足够小以获得高分辨率的图像，而孔径小又会挡掉很大部分从样品发出的荧光，包括从焦平面发出的荧光，这样就要求激发光必须足够强以获得足够的信噪比；而高强度的激光会使荧光染料在连续扫描过程中迅速褪色（即光漂白现象），
郑炜团队提出梯度光场编码的双光子快速三维成像技术
近日，中国科学院深圳先进技术研究院研究员郑炜团队提出一种基于激发光梯度编码的快速三维成像技术，可使双光子体成像速度比传统技术提升5至10倍。 双光子显微镜具有亚微米级的成像分辨率和毫米级的成像深度，被广泛应用在神经结构和功能成像以及其他活体成像研究中。传统的双光子三维成像是将双光子激发的焦点在
香港中文大学开发了一种新颖的成像方法
神经元的活动通常在10毫秒的时间范围内完成，这使得常规显微镜很难直接观察到这些现象。 这种新的压缩感测双光子显微镜技术可用于生物神经分布的3D成像或同时监视数百个神经元的活动。研究人员通过使用（a）传统的点扫描和（b）新的压缩成像方法，制备了花粉粒的双光子显微镜图像。点扫描成像时间为2.2秒，而