一种快速有效的基因分型斑马鱼的方法(一)

为了促进斑马鱼的高通量的基因分型,我们开发了一种新的技术——用高通量熔解分析(HRMA)区分野生、杂合、纯合突变。这种耗时一个小时的技术不需要进行限制性内切酶酶切和琼脂糖凝胶电泳的操作。此技术生成的熔解图的敏感性高,可以检测不明确的PCR产物。我们可以对斑马鱼的三种类型的突变进行可靠的基因分型,包括apchu745(apcmcr)和p53zy7 (p531166T ),小的缺失突变(bap28y75)及逆转录病毒的插入突变(wdr43hi821a)。这种技术可对单个斑马鱼胚胎及个体进行基因分型并适用于其它类型的生物体。Developmental Dynamics 238:3168-3174,2009©2009 Wiley-Liss,Inc。关键词:熔解曲线 斑马鱼 基因分型 SNP 点突变 插入突变简介 &nbs......阅读全文

斑马鱼胚胎细胞的培养——原代培养

实验方法原理收集胚胎,除去绒毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎细胞,然后在胚胎成纤维细胞饲养层上培养从斑马鱼囊胚和原肠期胚获得的原代细胞。实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTA胚胎成纤维细胞饲养层人重组白血病抑制因子试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培

斑马鱼胚胎细胞的培养——细胞系

实验材料链酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmol L EDTAZEM-2细胞(或等同物)试剂、试剂盒LDF基础培养液LDF原代培养液LDF维持培养液D培养液Holtfreter缓冲液实验步骤鳟鱼胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后 28 天的 Shasta Rainbow 或其他鳟鱼种系

敲降斑马鱼基因的方法学比较

  一、基因敲降的前期准备工作相同   1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。   1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。   1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,

斑马鱼的胚胎原位杂交试验实录

收集斑马鱼的胚胎,在Holfretor水中培养,到达所需要的发育时期时,用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小时后用50%甲醇2%多聚甲醛溶液洗,然后换成甲醇,在-20C 保存,待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧水处理,去除色素。或者使用苯锍脲稀溶液培养,可阻断色素的形成)原位

除了小鼠,斑马鱼也被盯上了-|-PNAS

  植有人类肿瘤细胞(红色)的斑马鱼胚胎,这一模型有望帮助医生快速筛选癌症患者最佳的治疗方案(图片来源:Rita Fior团队)  最新一期《PNAS》在线发表了一篇题为“Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinato

寄生虫感染或破坏斑马鱼实验

  研究人员表示,一种感染实验室斑马鱼的常见寄生虫可能令多年的行为实验结果产生混淆。不过,批评者认为,这个案例仍有待证实。  和小鼠一样,斑马鱼被用在全球的实验室中,以研究从药物疗效到诸如精神分裂症和自闭症等遗传性疾病和障碍的所有事情。由于斑马鱼和人类都具有高度社会性,因此研究人员认为,和啮齿类动物

Nature:系统解析斑马鱼参考基因组

  斑马鱼(Zebrafish)是研究发育生物学的新兴模式动物。斑马鱼由于具有饲育容易、胚胎透明、体外受精、突变种多、遗传学工具成熟等诸多优点,近年来已成为研究脊椎动物发育与人类遗传疾病的新兴模式动物。   近日,英国桑格研究所(Wellcome Trust Sanger Institute)

敲降斑马鱼基因的方法学比较

一、基因敲降的前期准备工作相同1.1 生物信息学分析目标基因在斑马鱼早期胚胎发送过程中是否有表达。1.2 收集斑马鱼早期发育胚胎(通常为48 hpf前的胚胎),提取总RNA,然后进行体外转录(RT)。1.3 设计检测目标基因表达的PCR引物,以1.2获得的cDNA为模板,进行PCR扩增,确认目标基因

《自然》:发现斑马鱼造血干细胞生成机理

为医学界研究白血病疗法提供了新思路   法国科学家日前通过对斑马鱼胚胎进行即时监控,发现了其造血干细胞的生成机理。这一成果为医学界研究白血病疗法提供了新思路。   该研究由法国国家科研中心和巴斯德研究所共同完成。研究人员在最新一期英国《自然》杂志上报告说,他们采用即时成像技术对斑马鱼的胚胎进行了观察

斑马鱼:一条游上“试药路”的小鱼

  蓝色的世界、嗡嗡作响的机器、不时出现的人影……湖蓝色的塑料鱼缸里,七八条小鱼在水中自由游弋,不时停下来盯着外面的世界。看见人影走近,有的小鱼开始在鱼缸里打转,有的则依旧悠然地游来游去。  这些体长不过5厘米、带有墨蓝色斑纹的斑马鱼并不知道,它们从一出生就已同那些野外的同类们分道扬镳,成为人类医药

《干细胞》:斑马鱼细胞可修复人视网膜

在最新一期的《干细胞》(Stem Cells)杂志上,来自英国的研究人员发现,斑马鱼眼睛中的一类叫做Muller胶质细胞的特殊细胞对对视网膜的再生至关重要,该细胞还有助于视力的恢复。研究人员预言,这种Muller胶质细胞可能用于恢复人类受损视网膜。 已经知道,视网膜损伤是造成失明的主要原因,引起视

国际首例-他们用光指挥斑马鱼的白细胞

未来,如果你生病了,除了吃药外,还有更多简单高效的治疗方式可选择,比如用光照一照身体就能远程遥控白细胞,从而主动调动身体的免疫能力。这并非科幻。我国科学家已实现了在活体上用光将白细胞变成“医学微机器人”,可自主控制白细胞的激活和运动,这在国际上是第一例。7月13日,暨南大学李宝军教授和郑先创教授研究

孕酮信号可独立维护斑马鱼精巢正常发育

原文地址:http://news.sciencenet.cn/htmlnews/2022/3/474828.shtm 近日,中国科学院水生生物研究所一项研究发现,揭示了孕酮/ NPGR信号对斑马鱼精巢发育的调控作用。研究发现,动物体内增强的孕酮/NPGR信号,可以发挥不依赖于雄激素信号通路,促进

“太空养鱼”后续来了!4条斑马鱼状态良好

今年4月26日,载有4条斑马鱼和金鱼藻的小型受控生命生态实验组件由神舟十八号载人飞船送往中国空间站问天舱的生命生态科学实验系统的小型受控生命生态实验模块中,开展在轨实验,目前已经过去了二十余天,科研人员介绍,4条斑马鱼的状态良好。航天员成功开展了两次水样样品采集和一次鱼食盒更换操作,发现斑马鱼在微重

淋巴管帮助斑马鱼“培育”早期脑细胞

在大脑发育的胚胎阶段,一些神经元和突触可以正常形成并连接,但另一些不能,导致一些部分和部分被丢弃。这会留下死亡或垂死的细胞,这就需要中枢神经系统雇佣一种清理人员。小胶质细胞接受了这个挑战,“摄取”废物,因此对大脑发育至关重要。然而,科学家们对它们是如何在大脑中繁殖的还缺乏充分的了解。美国圣母大学生物

诺奖得主Science解开斑马鱼条纹的秘密

  斑马鱼,一种小的淡水鱼,得名于一种醒目的蓝黄色相间条纹图案。在幼鱼皮肤生长过程中,有三种主要的色素细胞类型——黑色细胞、反光银色细胞和黄色细胞出现,它们多层镶嵌,构成特征性的颜色图案。  众所周知,所有这三种细胞类型必须相互作用才能形成适当的条纹,但是,形成成鱼条纹的色素细胞的胚胎起源,直到现在

国际首例-他们用光指挥斑马鱼的白细胞

  未来,如果你生病了,除了吃药外,还有更多简单高效的治疗方式可选择,比如用光照一照身体就能远程遥控白细胞,从而主动调动身体的免疫能力。这并非科幻。我国科学家已实现了在活体上用光将白细胞变成“医学微机器人”,可自主控制白细胞的激活和运动,这在国际上是第一例。7月13日,暨南大学李宝军教授和郑先创教授

从斑马鱼身上竟然获得治疗帕金森的方法

   与哺乳动物相比,成年斑马鱼会使大脑中的神经元再生,但这种能力的程度和变异性尚不清楚。来自Edinburgh大学脑神经科学研究中心的Thomas Becker及其研究团队探寻了各种多巴胺能神经元群体的丧失是否足以触发神经元的功能性再生。 他们的研究结果为未来治疗具有运动异常、震颤等症状的神经系统

斑马鱼神经元助力人类出生缺陷研究

  报道:斑马鱼(zebrafish),是一种类似于鲦鱼(minnow)的热带淡水鱼,原产于喜马拉雅地区东南部,是研究人类疾病(包括脑部疾病) 的一种公认的重要工具。利用斑马鱼,科学家们可以确定单个神经元如何发育、成熟和支持基本的功能,如呼吸、吞咽和咀嚼运动。目前,密苏里大学医学院的研究 人

斑马鱼为何作为高内涵筛选HCS的模式动物?

有两种有效的筛选方法,广泛用于早期药物发现中的化合物分选。这些方法包括高通量筛选 (HTS) 和高内涵筛选 (HCS)。虽然前者从大量新药候选药物中快速有效地分选有用的化合物,但HCS使用基于成像的多参数分析来鉴定可能影响这些药物疗效的化合物。 在本文中,您将了解什么是HCS,使用的不同方法以及常见

斑马鱼模型有助研发关节炎新疗法

  你相信么,鱼也会患上关节炎!美国南加州大学研究人员领导的一项研究发现,地球上早期出现的硬骨鱼很容易患上关节炎。研究人员表示,对鱼类关节炎患病机制的研究,或许会加速人类关节炎预防和治疗手段的研究进程。   长有四肢的骨脊椎动物,如人类,都是从肉鳍类鱼进化而来。在生物进化过程中,为更适应生存环境,陆

一个抑癌基因可抑制斑马鱼再生

  总有一天,再生医学会让医生能够矫正先天性畸形,再生受损的手指,甚至修补一颗受损的心脏。但是要做到这一点,他们将必须对付身体的抗癌安全系统。现在,来自加州大学旧金山分校(UCSF)的研究人员,发现了一个人类基因,可能是这种权衡的一个关键介质,阻断肿瘤和健康的再生。延伸阅读:斑马鱼神经元助力人类出生

Nature子刊:斑马鱼帮助挽救重症淋巴病男孩

  在丹尼尔10岁时,他有望成为一名足球运动员,那时他能够在25分钟里跑出5公里的距离。两年后,他的腿突然开始肿胀,出现呼吸困难的症状。医院诊断丹尼尔心脏周围有淋巴积液,并且淋巴液还在继续渗漏。丹尼尔的双腿和腹部像是海绵一样肿胀。他的肺部充满了积液以至于只能靠着氧气罐勉强维持生命。在接受了一种西罗莫

组织靶向性胚胎嵌合体—斑马鱼囊胚细胞移植

真核生物的基因调控比原核生物复杂得多。这是因为这两类生物在三个不同水平上存在着重大的差别:①在遗传物质的分子水平上,真核细胞基因组的DNA含量和基因的总数都远高于原核生物,而且 DNA不是染色体中的唯一成分,DNA和蛋白质以及少量的RNA构成以核小体为基本单位的染色质;②在细胞水平上,真核细胞的染色

斑马鱼雌二醇elisa试剂盒几点操作步骤

斑马鱼雌二醇(E2)elisa试剂盒操作步骤1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。80 pmol/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液40 pmol/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液20 pmol/L3

新发现:斑马鱼脑内有游离的淋巴细胞

  清除有害物质、扫荡毒害细胞的废物,大脑有自己的内在程序,这些程序也能为中风和痴呆等疾病提供保护措施。  澳大利亚昆士兰大学(UQ)的科学家们通过研究热带淡水斑马鱼(拥有着许多与人相同的细胞和器官),发现了一种新型的大脑“清道夫”淋巴细胞——脑膜壁淋巴管内皮细胞(meningeal mural l

深受科学家的热爱斑马鱼基因编辑技术介绍

  斑马鱼又叫蓝条鱼,因为其体表有暗蓝色和银色的类似于斑马一样的条纹而命名。斑马鱼属于鲤科鱼类,同属鲤科的还有我们十分熟悉的鲤鱼、鲫鱼等。斑马鱼的体型较小,成鱼体长约4-6厘米,而且成鱼常年产卵且产卵量大,可达300-1000粒,还是体外受精并发育,因此十分适合进行实验室的大规模养殖与筛选。

深受科学家的热爱斑马鱼基因编辑技术介绍

  斑马鱼又叫蓝条鱼,因为其体表有暗蓝色和银色的类似于斑马一样的条纹而命名。斑马鱼属于鲤科鱼类,同属鲤科的还有我们十分熟悉的鲤鱼、鲫鱼等。斑马鱼的体型较小,成鱼体长约4-6厘米,而且成鱼常年产卵且产卵量大,可达300-1000粒,还是体外受精并发育,因此十分适合进行实验室的大规模养殖与筛选。

科学家揭示斑马鱼大脑空间信息表达机制

中国科学院上海微系统与信息技术研究所研究员李孟与德国马克斯普朗克学会生物控制论研究所合作,证实了在斑马鱼幼鱼端脑中存在编码空间的神经元,表明斑马鱼可作为研究空间信息在全脑尺度表达及处理的全新模式动物,为开发类脑空间计算及类脑导航提供了理论基础和生物机理支持。相关研究发表于《自然》。当来到一座陌生的城

通过研究斑马鱼来揭示视网膜生物钟活性

昼夜节律和视网膜生物钟人类以及许多其他动物体,睡眠-清醒循环以及其他的生物节律过程是由内源性振荡器-生物钟所调节的。生物钟受一系列基因控制,这些基因的表达因是否有光照所微调,从而使得每日的生物节律适应于日夜循环交替。在哺乳动物的大脑中,生物钟母钟(主要的控制因子)位于下丘脑视交叉上核。然而它并非每日