实验技术:组织切片的制备
【目的】组织标本必须首先被制成组织切片,再经过染色处理,然后才能在显微镜下进行临床诊断和科学研究。【原理】苏木素染色结合伊红染色是常规组织学染色技术,也称为H & E染色。苏木素是碱性染色,细胞核被染成深紫或兰色,常用作核染色;伊红是酸性染色,细胞浆染呈红色,常用作胞浆染色。【材料】1.试剂和溶液(1)2-甲基丁醇(异戊醇)(2)干冰(3)O.C.T.(Tissue-Tek, SAKURA)(4)冰冻或石蜡组织块(5)酸性Harris 苏木素染料(6)1%酸性酒精70%酒精 99 ml浓盐酸 1 ml(7)醇溶性伊红染料(8)酒精(9)二甲苯(10)树脂封片液2.设备(1)......阅读全文
脑组织冰冻切片的步骤和注意事项
1.固定。大鼠或小鼠灌注取脑,取脑后用多聚甲醛浸泡固定,即能达到冲洗的目的,又不损害组织。2.脱水。先后用15%,20%,30%的PB蔗糖溶液 进行脑组织梯度脱水,脑组织沉下去就是脱水好了。3.冰冻切片,推荐瑞沃德冷冻切片机。取出脑组织,用OCT胶包埋,一层层的包埋,注意:不能有气泡,否则营销切片;
冰冻切片实验技巧(四):脂肪组织的处理
脂肪组织无疑是冰冻切片者的绊脚石,道理很简单脂肪不会结冰,把温度降低让脂肪变硬可以切出较薄的片子,但是这个温度对同一组织中的其他成分来说显得太低而不合适切片,当脂肪破碎影响切片时这个问题就变得明显,下面是一些我的经验总结。1.尽可能的削掉不需要的脂肪组织当我准备切淋巴结时,我会先检查一遍,小心翼翼地
海水鱼卵石蜡切片组织破碎的原因
本人觉得是脱水这个环节有问题,事先应当做一个预备试验,看怎样的酒精梯度比较合适。有时候脱水过度会造成组织脆弱,切片的时候就容易破碎。这里有个参考值,但是建议搂主最好作些修改:小老鼠内脏脱水程序:固定液30分钟85%酒精30分钟95%酒精30分钟100%酒精30分钟100%酒精30分钟二甲苯15分钟二
做组织切片的时候,塑料的包埋盒怎么用
下面是塑料包埋组织切片的过程,仅供参考,步骤类似,只需把介质换成石蜡即可。(五)包埋 1.将组织块放入包埋盒内,摆平。将标签贴于包埋盒的侧壁,包埋盒贴标签的一面向外,然后把包埋盒放在冰盒上。 2.根据待包埋组织块的数量和包埋盒的容量配制包埋工作液(根据实际用量配制,一次性用完)。配制方法:将包埋甲液
美博物馆首次展出爱因斯坦大脑组织切片
著名物理学家艾伯特·爱因斯坦的部分大脑组织切片。 想知道天才的大脑什么样吗?去美国费城看一看吧。费城医学院下属的穆特博物馆正在展出著名物理学家艾伯特·爱因斯坦的部分大脑组织切片。展出 博物馆馆长安娜·杜赫迪告诉美国趣味科学网站记者,筹备展览只用了9个工作日,参观者可以看到46片大
免疫组织化学法实验——组织切片的免疫荧光标记
实验材料组织样本冰冻切片置于载玻片上试剂、试剂盒PBS第一抗体5〜10μg mL第二抗体特异性针对第一抗体的抗体突光染料结合物封片介质(如Gelvatol)仪器、耗材塑料玻片盒或加湿盒实验步骤1) 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒。从冰冻切片机或冰箱取出载有切片的载玻片,交叉放入玻片盒(每边约6片
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上,即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利,切片厚度通常为5~7um,也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带,放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述
石蜡切片与冰冻切片
一、组织和细胞标本类型:(一) 组织标本类:1、 石蜡切片:组织形态保存好2、 冰冻切片:抗原性保存好(二)细胞标本类:1、组织印片 2、细胞培养片(细胞爬片) 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。2、组织取材注意事项:(1)标本新鲜:组织要求离体后30min
组织需要在1224h内做切片保存吗?
在甲醛里是可以长期保存的,RNA肯定降解完了,DNA和蛋白质是能够长期保存的,几十年都没问题。而问题在于固定时间过长会导致固定过度,也就是DNA、蛋白质之间交联太密,对以后修复带来困难,导致敏感度下降,甚至假阴性。目前组织库的理念是固定时间小于48小时,可以包埋在石蜡里长期保存。
罗氏FFPE组织切片核酸纯化试剂盒操作说明
High Pure FFPET DNA Isolation Kit基于离心柱法的抽提原理,免去DNA沉淀和有机试剂抽提的步骤,是快速核酸抽提的理想工具。整个抽提过程仅需3小时(含脱蜡过程);获得高DNA得率和质量;在qPCR,芯片分析和测序等下游应用中获得强大信号。图1:从FFPET样本中获得高得率
激光显微切割系统应用于肿瘤组织的切片研究
胰腺导管腺癌(PDAC)是第四大癌症相关死因的癌症,诊断后具有5年存活率的病人仅有3%。造成如此之差预后的原因,主要是因为局部的高复发率和对治疗的多因素的抵抗。在胰腺癌中,85%的病人诊断后处在恶性程度很高的阶段,主要的特征是浸润近端的淋巴结和血管结构,也伴随转移到肝和腹膜。吉西他滨作为首选药能够产
贴壁/悬浮细胞及组织切片进行Hoechst染色的方法步骤
Hoechst染色方法1.贴壁细胞1) 取普通洁净盖玻片于70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间,无菌超净台内吹干或用细胞培养PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍,再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内,种入细胞培养过夜,使约为50%-80%满。2) 刺激细胞发生凋亡后,吸尽培养液,加入0
CompresstomeTM应用II-基因功能研究:组织学连续切片
关键词:组织学(Histology), 基因功能(Gene Function), 免疫组织化学(Immunohistochemistry), 连续切片(Serial Sections),振动切片机(Vibratome) 在基因功能的研究中,为了研究某种基因的功能或基因调控网络时需要同时在一个动物上对
产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?
1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景
准备大组织的厚切片进行β半乳糖苷酶染色
实验材料小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂、试剂盒4%(m V)琼脂糖氰基丙烯酸盐黏合剂(如Superglue)l00 mmol L磷酸钠盐缓冲液 pH 8.0仪器、耗材振动切片机(如VT 1000S; Leica)实验步骤1) 固定和洗涤组织。2) 将组织放置在100 mL烧杯中,用吸管轻柔吸取
产生组织切片非特异性染色的原因有哪些?
1、抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。这是最重要的一条。 2、一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色,建议试用单克隆抗体看看。 3、内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高(含血细胞多的组织),需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓
石蜡切片和冰冻切片的比较
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细
石蜡切片与冷冻切片的区别
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
组织切片的免疫过氧化物酶标记实验
实验材料组织样品试剂、试剂盒PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材离心机加湿盒培养箱实验步骤1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片
组织切片的免疫过氧化物酶标记实验
实验材料 组织样品试剂、试剂盒 PBS过氧化氢PAP二氨基联苯胺仪器、耗材 离心机加湿盒培养箱实验步骤 1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。 2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿
冰冻切片
实验概要冰冻切片(frozen section)是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。实验步骤1. 冷冻切片的制作方法 1) 将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度,一般情况下为-18~-25℃。 2) 在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂——OCT
徒手切片
玻片标本的一种。生物实验中用来观察形态结构的一种用徒手制作的切片,不需要什么特殊工具和机械设备,而将欲观察的材料,用锋利的切片或剃刀切成极薄的薄片,薄片应完全透明,切好后,移置一滴水中,放载玻片上,即可进行显微观察。此法适宜观察新鲜的生物材料,方法简便,容易掌握。
连续切片
中文名称连续切片英文名称serial section定 义从同一组织包埋块上连续切成的切片系列。通过对连续切片的分析可构建细胞或组织的三维图像。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
电镜所需的切片之超薄切片介绍
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。
石蜡切片和半薄切片的制作
实验概要本方法介绍了石蜡切片和半薄切片的制作流程。主要试剂4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸缓冲液),乙醇,二甲苯,纯石蜡,蜂蜡,树脂胶主要设备真空泵,AO手摇式切片机,Olypmus BH-2型显微镜,LKB超薄切片机实验步骤1. 石蜡切片的制作 1) 取材固定新鲜配置4%戊二醛固定液(pH7.
超薄切片机在单个动物特定组织基因和蛋白多个基因调...
超薄切片机在单个动物特定组织基因和蛋白多个基因调节网络同时研究中的应用Compresstome VF-700超薄切片机实现单个动物特定组织基因和蛋白多个基因调节网络的同时研究研究者使用最新型的切片仪器Compresstome VF-700(Precisionary Instruments Inc.,
冰冻切片组织蛋白酶B(CATHEPSIN-B)活性原位荧光染色检...
主要用途冰冻切片组织蛋白酶B(CATHEPSIN B)活性原位荧光染色检测试剂是一种旨在通过荧光染料甲酚紫标记的多肽底物作为探针,自由进入细胞内,受到组织蛋白酶B水解后,呈现荧光现象,以分析样品酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种冰冻组织内组织蛋白酶B的
冰冻切片组织冯库萨(VON-KOSSA)染色试剂盒使用说明
主要用途冰冻切片组织冯库萨(VON KOSSA)染色试剂是一种旨在使用银还原技术,分析固定处理的组织细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻切片的组织钙沉积和钙化结节检测;同时也适合动物原生代或培养细胞的检测。广泛用
冰冻切片组织冯库萨(VON-KOSSA)染色试剂盒使用说明
冰冻切片组织冯库萨(VON KOSSA)染色试剂盒产品说明书(中文版) 主要用途 冰冻切片组织冯库萨(VON KOSSA)染色试剂是一种旨在使用银还原技术,分析固定处理的组织细胞样本中钙沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良VON KOSSA方法、成功实验证明的。主要适用
超薄切片技术
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。