石蜡切片和半薄切片的制作
实验概要本方法介绍了石蜡切片和半薄切片的制作流程。主要试剂4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸缓冲液),乙醇,二甲苯,纯石蜡,蜂蜡,树脂胶主要设备真空泵,AO手摇式切片机,Olypmus BH-2型显微镜,LKB超薄切片机实验步骤1. 石蜡切片的制作 1) 取材固定新鲜配置4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸缓冲液),选取材料,立即投入固定液中用真空泵抽气,以加快固定液渗透,更换一次固定液,放置过夜。 2) 脱水、透明、浸蜡、包理 a. 固定好的材料经70%、80%、90%、95%、100%、100%无水乙醇分别脱水1h; b. 用二甲苯置换材料中的乙醇,具体方法是:100%无水乙醇、50%乙醇-50%二甲苯、100%二甲苯、100%二甲苯,每级各1h; &nb......阅读全文
石蜡切片、冰冻切片及振动切片的区别
一、石蜡切片 把修好的蜡块装在旋转切片机上,即可进行切片(section)。切片必须保持切片刀锐利,切片厚度通常为5~7um,也可根据染色需要切成不同厚度,一般不旋转式切片机超过10um。切好的蜡带,放人40℃左右的温水中将蜡片展平。良好的切片应无刀痕、裂痕,切片厚度均一平整。切片如有上述
石蜡切片与冰冻切片
一、组织和细胞标本类型:(一) 组织标本类:1、 石蜡切片:组织形态保存好2、 冰冻切片:抗原性保存好(二)细胞标本类:1、组织印片 2、细胞培养片(细胞爬片) 3、细胞涂片二、组织取材1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。2、组织取材注意事项:(1)标本新鲜:组织要求离体后30min
石蜡切片和冰冻切片的比较
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性,做免疫组化时不需抗原修复这一步。缺点是细
石蜡切片与冷冻切片的区别
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
冰冻切片
实验概要冰冻切片(frozen section)是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。实验步骤1. 冷冻切片的制作方法 1) 将恒冷箱冷冻切片机的速冻头和箱内温度调整到适宜的切温度,一般情况下为-18~-25℃。 2) 在标本冷冻托上涂布一层冷冻包埋剂——OCT
徒手切片
玻片标本的一种。生物实验中用来观察形态结构的一种用徒手制作的切片,不需要什么特殊工具和机械设备,而将欲观察的材料,用锋利的切片或剃刀切成极薄的薄片,薄片应完全透明,切好后,移置一滴水中,放载玻片上,即可进行显微观察。此法适宜观察新鲜的生物材料,方法简便,容易掌握。
连续切片
中文名称连续切片英文名称serial section定 义从同一组织包埋块上连续切成的切片系列。通过对连续切片的分析可构建细胞或组织的三维图像。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)
电镜所需的切片之超薄切片介绍
超薄切片(Ultrathin sectioning) 系供电子显微镜观察用的切片。由于电子穿透组织的能力低, 所以供电子显微镜观察用的切片要求极薄(一般厚度为40~50 nm) ,即为超薄切片 。
石蜡切片和半薄切片的制作
实验概要本方法介绍了石蜡切片和半薄切片的制作流程。主要试剂4%戊二醛固定液(pH7.0磷酸缓冲液),乙醇,二甲苯,纯石蜡,蜂蜡,树脂胶主要设备真空泵,AO手摇式切片机,Olypmus BH-2型显微镜,LKB超薄切片机实验步骤1. 石蜡切片的制作 1) 取材固定新鲜配置4%戊二醛固定液(pH7.
超薄切片技术
在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染色等步骤。
冷冻切片操作
1.冷冻切片机要始终处于运行状态,即使在不做冷冻切片时也要开着致冷,不能时开时关,以免影响机器寿命。2.手术取下的新鲜组织不要固定,因固定过的组织不利于切片,而且还会影响染色。3. 用OCT做包埋剂,起到支撑的作用。先将OCT标在固定头上再将组织放在OCT上,OCT不要太多,以免流到固定头外,组织表
组织切片机切片边缘着色的原因分析
原因分析:a组织边缘与玻片粘贴不牢,边缘组织松脱漂浮在液体中,导致洗涤不彻底;b切片上滴加的试剂未充分覆盖组织,边缘的试剂容易首先变干,浓度较中心组织高而致染色深。解决措施:组织的前期处理应规范,试剂要充分覆盖组织,尽量避免选用坏死较多的组织。
组织切片机切片背景过深的原因分析
原因分析:a.漂洗不够;b.切片或涂片过厚;c.蛋白质封闭不够或所用血清溶血d.使用全血清抗体稀释不够;e.底物成色反应过久;解决措施:对一些新的或少用的抗体显色时进行监控,避免显色时间过长。
徕卡冰冻式切片机切片制样方法
电镜样品制备技术直接影响样品的结构和反差。制备高质量的超薄切片,是发挥透 射电子显微镜优良性能的前提。透射电子显微镜的分辨率理论上可达到o.3nm左右, 但是六于样品制备技术的限制,分辨率很难达到理论值。对于生物样品来说,一般只能 达到2nm的水平。 高质量的超薄切片基本特征:①样品应该能耐受电子束
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片,而那些稳定的
石蜡切片与冷冻切片的区别是什么
1、从一抗的选择方面来看。有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片,而有的一抗只能做冰冻切片,关键取决于所要检测的抗原稳定性,有的抗原不稳定,经过组 织固定,脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤,所检测的抗原易被破坏,这时只能用冰冻切片来做,检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片, 而那些稳
振动切片方法及与石蜡、冰冻切片的比较
振动切片用振动切片机,可以把新鲜组织(不固定不冰冻)切成厚片20~10μm,以漂浮法在反应板进行免疫组织化学染色,然后在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织进行后固定,最后按电镜样品制备、脱水、包埋、超薄切片、染色观察等。组织不冰冻,无冰晶形成和组织抗原破坏,在免疫组化染色前避免了组织脱水、透
石蜡切片如何检测线粒体功能需要多少石蜡切片
线粒体有关的脑组织染色问题(线粒体,脑组织,石蜡切片,认知功能,心理)] 本人心理专业,研究认知功能方面,无奈需要生理的指标,因此对动物认知相关的脑区进行取材,主要想测线粒体功能和形态方面的指标。可是本人对这方面一窍不通,急需大家伙帮忙。我现在把组织分为两组进行处理,一部分-80冷藏了,好像是做分子
组织切片机所有切片呈阴性的原因分析
原因分析:a.缓冲液内含叠氮化钠,抑制酶的活性;b.染色未完全按照操作步骤进行;c.漏加一种抗体或抗体失活;d.复染或脱水剂使用不当;e.底物中加入的过氧化氢少或失活。解决措施:设立“阳性对照”。如果阳性对照有了表达,说明染色的全过程和所有试剂都没有问题。如果此时测试片仍为阴性,便是真实的阴性,说明
组织切片机所有切片呈阳性的原因分析
原因分析:a缓冲液配置中未加氯化钠和PH值不准确,洗涤不彻底;B使用已变色的呈色第五溶液,或呈色反应时间过长;C过氧化氢浓度过高,呈色反应过快且粘附剂太厚;D切片在染色过程中抗体过浓,或干片了;E抗体孵育时间过长。解决措施:缩短抗体孵育时间和呈色反应时长,染色过程中防止出现干片情况。
组织免疫荧光是用石蜡切片还是冰冻切片
二者应该都是可以的,具体要看自身的实验条件哪个操作更方便以及抗体的性质。看你的实验要求,冰冻片要求较高(低温环境,液氮,冰冻切片机,OCT包埋剂等等),石蜡片的制作就比较简单,试剂也较便宜。另外看你购买的抗体适用于哪种片子免疫组化的话,一般大都使用石蜡切片。免疫荧光染色的话,都可以的,冰冻切片比较容
冰冻切片固定实验
实验材料 冰冻组织试剂、试剂盒 PFAPBS乙醇仪器、耗材 加湿盒实验步骤 1. 将承有切片的载玻片放入加湿盒中,加4%PFA覆盖整个切片,盖上加湿盒,如为预先未固定过的组织,则于室温放置20 min,如是固定过的组织则放置5 min。2. 吸去固定液,用毛细吸管或用喷水瓶以3×PBS冲冼切片,
冰冻切片的定义
冰冻切片(frozen section)是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法。因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。冰冻切片的种类较多,有低温恒冷箱冰冻切片法,二氧化碳冰冻切片法,甲醇循环制冷冰冻切片法等。这些方法,随着时代的变迁,科技的发展
电镜超薄切片流程
超薄切片流程包括以下几个步骤: 1、切片前的准备:铜网清洗(用丙酮和乙醇浸洗) 2、支持膜制备:常用Formvar膜(用聚乙烯醇缩甲醛和氯仿配置,浓度为0.5%) 3、玻璃刀制备:专用制刀机制作。 4、半薄切片光镜定位(主要确定超薄切片的位置)。 5、修块(表面修成梯形或长方形)。 6、超薄切片:专
超薄切片技术简介
由于电镜产生的电子束穿透能力很弱,必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用,这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中,超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制作过程基本上和石蜡切片相似,需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、切片及染
冰冻切片的应用
(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。 (2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。 (3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的
石蜡切片的制作
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中
冷冻切片应用特点
(1)在手术进行中,突然发现病人的病变与原诊断,原定手术方案不相符合,或者怀疑时,需要病理确定。(2)了解淋巴结内是否有转移的肿瘤细胞,或者转移的程度,以利于确定是否需要彻底扫除淋巴结或者其它的治疗措施。(3)对于已确定为恶性肿瘤的患者,则需要了解其手术范围是否足够,上下切缘是否有残存的肿瘤组织。(
石蜡切片的制作
以石蜡制作的切片,可以制成极薄的切片。一般的切片厚度要求在4—6微米。而石蜡切片不但可以达到这个要求,甚至可以切得更薄到2微米以至1微米。这一点是冰冻切片和火棉胶切片难以获得的结果。另外,石蜡切片还便于制作大批的或是连续的切片。而且以石蜡包埋的组织块便于长期保存。所以石蜡切片是目前各种切片制作方法中
石蜡切片技术简介
石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。