基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细...（一）
基因枪介导pVax-Dsred-IRES-EGFP质粒转染体外培养细胞系的实验研究张 亮1 阎瑾琦1马继尧2 王 浩1 刘 宁1 贾锐1 韩 刚2 董金凯2 田仁礼2 于继云[1]1.军事医学科学院 基础医学研究所，北京 100850； 2.解放军总医院 泌尿外科，北京 100853 [摘要] 目的：建立基因枪子弹制备以及转染体外培养cos-7细胞系的方法，观察基因枪介导真核表达质粒pVax-Dsred-IRES-EGFP在细胞内的表达情况。方法：亚精氨、氯化钙沉淀法制备子弹，利用原子力显微镜观察子弹制备（DNA+金颗粒）情况；以基因枪的方法分别转染对照组和实验组cos-7细胞，在转染后24小时，利用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞中红、绿荧光蛋白的表达。结果：成功制备基因枪子弹，DNA紧密包裹在金颗粒周围。基因枪介导的pVax-Dsred-IRES-EGFP成功转染入体外培养的cos-7细胞，在转染后24小时可检测到红、......阅读全文
基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细...（一）
基因枪介导pVax-Dsred-IRES-EGFP质粒转染体外培养细胞系的实验研究张 亮1 阎瑾琦1马继尧2 王 浩1 刘 宁1 贾锐1 韩 刚2 董金凯2 田仁礼2 于继云[1]1.军事医学科学院 基础医学研究所，北京 100850； 2.解放军总医院 泌尿外科，北京 100853 [摘要] 目的
基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细...（三）
2讨论 基因枪技术, 又称为微粒轰击技术( Particle Bombardment Technology),其基本原理就是将外源基因包裹到比重较大而化学性质很稳定的微米级的金或钨上,然后用微粒加速装置打入靶细胞或组织。早期多用于在植物中转移基因。它通过提供给包裹有DNA的金颗粒很高的初速度,使
基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细...（二）
2 结果 2.1 重组质粒pVax-DsRed-IRES-EGFP的酶切鉴定 pVax载体是被美国药品及食物鉴定委员会承认的用于疫苗临床使用的真核表达载体，它具有卡那霉素抗性，非常适合于人体的应用。制备基因枪子弹之前，先对本室构建保存的真核表达载体pVax-Dsred-IRES-EGFP
基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细胞
[摘要] 目的：建立基因枪子弹制备以及转染体外培养cos-7细胞系的方法，观察基因枪介导真核表达质粒pVax-Dsred-IRES-EGFP在细胞内的表达情况。 方法：亚精氨、氯化钙沉淀法制备子弹，利用原子力显微镜观察子弹制备（DNA+金颗粒）情况；以基因枪的方法分别转染对照组和实
基因枪介导pVaxDsredIRESEGFP质粒转染体外培养细胞系的
基因枪介导pVax-Dsred-IRES-EGFP质粒转染体外培养细胞系的实验研究 张 亮1 阎瑾琦1马继尧2 王 浩1 刘 宁1 贾锐1 韩 刚2 董金凯2 田仁礼2 于继云[1] 1.军事医学科学院 基础医学研究所，北京 100850； 2.解放军总医院 泌尿外科，北京 1008
DNA体外转染试剂_如何准备转染所需的质粒DNA
转染效率受到诸多因素的影响，除了细胞、培养基和载体等影响因素外，另外一项非常重要的因素便是DNA的质量。为了比较不同厂家的转染效率，我们分别从三家不同的供应商购买了质粒制备试剂盒来制备pEGFP-N3质粒DNA，并通过不同的方法将制备的pEGFP-N3质粒转运至NIH-3T3细胞。pEGFP-N3质
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞 试剂、试剂盒 CaCl2 氯喹 Giemsa 染液
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
实验材料 指数生长的哺乳动物细胞试剂、试剂盒 CaCl2氯喹Giemsa 染液甘油HEPES 盐缓冲液甲醇磷酸盐缓冲液丁酸钠TE质粒 DNA细胞生长培养基仪器、耗材 组织培养皿（60 mm) 或 12 孔板实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录 1。稀释贮存液至所需浓度。CaCl
磷酸钙介导的质粒－DNA－转染真核细胞实验
本方法中介绍的磷酸钙介导的质粒 DNA 转染贴壁细胞是对 Jordan 等建立的方法 (1996) 的改进。Jordan 等大大优化了磷酸钙介导的中国仓鼠卵巢细胞与人胚肾 293 细胞的转染方法。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料指数
siRNA体外转染——GenMuteTM－siRNA体外转染的优化
GenMuteTM siRNA转染试剂（Cat#SL100568）是市场上最有力的siRNA传递工具之一。最佳的siRNA浓度范围是1.0nM到10nM，过多的siRNA可能导致沉默效果差的“洪水效应”。我们实验室已经使用GenMuteTM转染试剂成功敲除了内源表达的生长因子。以24孔板为例，如下步
常用的分子生物学基本技术（三）
初步应用有关原位PCR技术应用成功的第一篇报道是对感染绵羊中枢神经系统visna病毒在绵羊脉络从一细胞中检查，通过PCR扩增，仅用150碱基对的短探针就可通过ISH检查到了细胞内的visna病毒。从开始在试管内细胞行PCR扩增后再涂片做ISH(原位杂交)检查，已发展到用福尔马林固定、石蜡切片的常规病
基因枪活体植物基因转染
本实验所用基因传递系统（基因枪）原理：低压基因递送系统（GDS-80 基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1），根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计，是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示，当左侧出现输入气体压力时（如：氦气），两个腔室之间将形成巨
生物粒子介导的－DNA－转染实验
生物粒子介导的 DNA 转染实验 试剂、试剂盒 CaCl2 乙醇
质粒，一般转染多久可以提蛋白
真核细胞转染么？一般转染48h后目的蛋白表达量达到峰值～单根据具体细胞而定～原核细胞体外表达一般是16度过夜诱导～
质粒转染和病毒转染有什么本质上的区别
两者在本质上并没有区别。无论是质粒转染，还是病毒转染，均是真核细胞主动或被动导入外源DNA片段而获得新的表型的过程。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。随着基因
动物细胞的几种转染方法对比
脂质体法采用阳离子脂质转染体，具有较高的转染效率，不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系，而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA，以及RNA,和蛋白质.此外，脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达，与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。人工
为什么要质粒转染
转染(transfection)：指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。转染目的：研究你的目的片段到细胞内的表达。转染一般是将目的基因构建到某个载体，将构建好的重组质粒导入细胞中，这样就能表达你所要的目的蛋白用于后续实验。
质粒转染大肠杆菌
质粒转染大肠杆菌可应用于：（1）细菌株的构建；（2）细胞工程；实验方法原理感受态细胞易于接受外来基因成为重组细胞，实验将质粒加入有感受态细胞的培养皿中，热击处理进行质粒转染。实验材料细胞株质粒试剂、试剂盒链霉素青霉素FCSPBS胰酶EDTA转染试剂(Lipofectamine TM2000)胰化蛋白
转染时质粒怎么定量
质粒是先用分光光度计定浓度的,然后根据你转染的方法,转染细胞的多少确定要转多少质粒,然后就可以算加入的体积了.
质粒转染大肠杆菌
实验方法原理 感受态细胞易于接受外来基因成为重组细胞，实验将质粒加入有感受态细胞的培养皿中，热击处理进行质粒转染。 实验材料 细胞株 质
生物粒子介导的－DNA－转染实验
下面是拫据 Horch 等（1999)、Sanford 等（1993)、主要基因枪生产商的出版物（US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立
基因转染技术的非病毒方法运载介绍
1、化学转染法 （1）DEAE-葡聚糖和polybrene聚阳离子法：带正电的DEAE-葡聚糖或polybrene多聚体复合物和带负电的DNA分子使得DNA可以结合在细胞表面。通过使用DMSO或甘油获得的渗透休克将DNA复合体导入。DEAE－葡聚糖仅限于瞬时转染。 （2）磷酸钙共沉淀法 ：将
基因转染技术介绍
用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA的纯度
常用的分子生物学基本技术2
IS PCR的技术特点 （1）既具有PCR的特异性与高灵敏性，又具有原位杂交的定位准确性；（2）测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列，甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA；（3）有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析；（4）可用于正常或恶性细胞，感染或非感染细胞的鉴定
脂质体介导的瞬时转染
实验材料 靶细胞 DNA 试剂、试剂盒 阳离子脂质 D-PBSA缓冲盐溶液 Na
脂质体介导的瞬时转染
实验材料 靶细胞DNA试剂、试剂盒 阳离子脂质D-PBSA缓冲盐溶液NaCl 0.25%胰蛋白酶仪器、耗材 细胞培养基还原的血清培养基无血清培养基多孔培养板实验步骤 A . 贴壁细胞的转染1. 将 1.3X105 个细胞/孔接种到 6 孔培养板，加 3 ml 培养基。2. 于 37°C 的 CO2
脂质体介导的瞬时转染
实验材料靶细胞DNA试剂、试剂盒阳离子脂质D-PBSA缓冲盐溶液NaCl0.25%胰蛋白酶仪器、耗材细胞培养基还原的血清培养基无血清培养基多孔培养板实验步骤A . 贴壁细胞的转染1. 将 1.3X105 个细胞/孔接种到 6 孔培养板，加 3 ml 培养基。2. 于 37°C 的 CO2 孵箱培养至
脂质体介导DNA转染法
脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下最方面的转染方法之一。转染率高，优于磷酸钙法，比它高5-100倍，能把DNA和RNA转染到各种细胞。用LR进行转染时，首先需要优化转染条件，应找出该批LR对转染某一特定细胞
生物粒子介导的－DNA－转染实验
试剂、试剂盒 CaCl2乙醇甘油亚精胺质粒DNA细胞生长培养基仪器、耗材 基因枪金或钨粒子镜头纸微量离心管需转染的细胞或组织实验步骤 材料缓冲液与溶液贮存液、缓冲液与试剂的成分见附录1。稀释贮存液至所需浓度CaCl2(2.5mol/L)乙醇未曾打开过的纯乙醇一瓶。乙醇有吸湿性，在空气中会吸收水分。在
影响细胞转染转染效率的因素和注意事项
转染是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。分为物理介导方法：电穿孔法、显微注射和基因枪；化学介导方法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术；生物介导方法：有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染方法，应该具有转染效率高、细胞毒性小