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基因枪活体植物基因转染

本实验所用基因传递系统(基因枪)原理:低压基因递送系统(GDS-80 基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1),根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计,是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示,当左侧出现输入气体压力时(如:氦气),两个腔室之间将形成巨大的压力差,一旦该气体穿过装载样品的咽喉处,GDS-80 中的气体输出将为生物粒子提供足够的动能量,使它们加速到接近超音速的速度(约 300m/s)。在加速过程中,样品溶液会雾化并均匀地喷洒到靶向目标的表面上。影响转染效率的因素:在执行 GDS-80 轰击的同时,有四个主要因素影响转染效率。涉及火箭喷嘴设计原理方面,有两个:传递压力的设定和枪管的直径。通过增加输送压力的设定,可以使两个腔室中的压力差变大,从而增加生物微粒的速度,增加动能;而增大枪管直径会降低微粒的输出速度。传递距离也在实验中起到重要的作用,通过增加从枪管到目标样品的传......阅读全文

常用的分子生物学基本技术

核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选,酶切图谱的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的

生物粒子介导的 DNA 转染实验

下面是拫据 Horch 等(1999)、Sanford 等(1993)、主要基因枪生产商的出版物(US/EG Bulletins 1688 and 2087;Bio-Rad) 以及 Steve Finkbeiner(University of California,San Francisco) 建立

生物粒子介导的 DNA 转染实验

                    生物粒子介导的 DNA 转染实验  

美国Wealtec 最新推出基因枪GDS-80

  美国Wealtec公司是一家实验室科学仪器的专业研发生产商,其最新研发的基因枪GDS-80,是一款创新的基因传递工具。因其低压传送基因细胞损害小、可不用金粉直接传送裸DNA方便又费用低、还有便携及噪音低等优点,刚推向市场即受到热捧,迅速成为广大转基因科研工作者的首选。     

棉花转基因技术基因枪法花粉活体育种实例

中国农科院棉花研究所针对 20 多个棉花品种,成功建立了高效、稳定的规模化转化体系,以流水线的操作方式,建立了高效、工厂化的棉花转基因技术体系。本文援引中国农业科学院棉花研究所的发明专利内容,以制备转 GAPDH 基因棉花的具体方法为例,以应用实例演示棉花转基因技术的具体应用案例。土壤盐渍化是一个全

活体电穿孔法介绍

1、什么是活体电穿孔活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用,导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因,可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105~115

活体电穿孔法介绍

1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用,导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因,可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通

2012国家自然科学基金哪些干细胞项目资助金额最大

  国家自然科学基金委员会公布了2012年度面上项目、重点项目、重大国际(地区)合作研究项目、青年科学基金项目、地区科学基金项目、海外及港澳学者合作研究基金项目、科学仪器基础研究专款项目等方面的评审结果。有关评审结果将通知相关依托单位,其科研管理人员可登录科学基金网络信息系统(https:

RNAi的实验原理和操作实用技术

  几十年来生物学上最重要的进展,也许是关于RNA分子能调节基因表达的发现。RNA干涉(RNAi)是指双链RNA分子使基因表达沉寂的现象,是在线虫中发现的,在 1998年的一篇Nature论文中被公诸于众。    此后,科学家们明白,RNAi还有其他形式,它既

RNAi实验原理与方法

RNAi实验原理与方法近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(

RNAi的实验原理与方法

近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰(RNAi)。一、RNA

常用的分子生物学基本技术2

IS PCR的技术特点 (1)既具有PCR的特异性与高灵敏性,又具有原位杂交的定位准确性;(2)测到低于2个拷贝量的细胞内特定DNA序列,甚至可检测出单一细胞中的仅含一个拷贝的原病毒DNA;(3)有助于细胞内特定核酸序列定位与其形态学变化的结合分析;(4)可用于正常或恶性细胞,感染或非感染细胞的鉴定

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例    活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或D

活体成像中荧光色素标记细胞的方法举例

  活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Luciferase)基因标记细胞或DNA,今天,生物发光标记物可以标记到任何一种基因上,使对基因功能的

活体成像中荧光色素标记细胞的方法

实验概要本实验以研究干细胞活体移植后的存活率为例,简介了一两种内源性荧光色素标记的实验方法。实验原理活体光学成像(Optical in vivo Imaging)主要采用生物发光(bioluminescence)技术与荧光(fluorescence)技术。生物发光是用荧光素酶(Lucifer

BTX特殊电极的应用汇总

BTX特殊电极的应用此次只将贴壁转染、活体等进行总结,对于大规模的转基因的应用,由于BTX公司有新的发展,故此次未将其列入,待下次完善后补充。1、Adherent Cell Transfections (ACT)贴壁细胞转染•In-situ electroporation of cells in t

2017年5月CRISPR/Cas亮点盘点

  基因组编辑技术CRISPR/Cas9被《科学》杂志列为2013年年度十大科技进展之一,受到人们的高度重视。CRISPR是规律间隔性成簇短回文重复序列的简称,Cas是CRISPR相关蛋白的简称。CRISPR/Cas最初是在细菌体内发现的,是细菌用来识别和摧毁抗噬菌体和其他病原体入侵的防御系统。  

植物基因转化常用方法-4

1.2 其它的基因附加工程在水稻、棉花、马铃薯、番茄和其它作物上也进行了δ-内毒素工程,获得昆虫抗性也不仅仅是指有着一种方法。蛋白酶抑制剂也是较好的选择,它可以一只昆虫肠道内的蛋白酶活性,阻止或减缓害虫生长,许多植物能产生蛋白酶抑制剂,如豇豆和common bean, 他们的基因

2016科学仪器重大专项指南发布

  分析测试百科网讯 今天,科技部发布了《“重大科学仪器设备开发”重点专项2016年度申报指南》,详情如下。  附1:申报相关要求和规定  附2:“重大科学仪器设备开发”重点专项2016年度申报指南  科学仪器设备是科学研究和技术创新的基石,是经济社会发展和国防安全的重要保障。为

农业部批复15家实验室/科研基地仪器购置经费近1.6亿

  分析测试百科网讯 近日,农业部公布已批复的农业部都市农业(北方)重点实验室等15家重点实验室/科研基地设情况,共涉及仪器购置资金1.598亿元。  表:农业部批复的 家重点实验室/科研基地仪器购置情况实验室/科研基地仪器购置经费(万元)仪器购置需求农业部都市农业(北方)重点实验室1371气相色谱

动物细胞的几种转染方法对比

脂质体法采用阳离子脂质转染体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染的细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质.此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA转入动物和人的体内用于基因治疗。人工

RNA修复模板在植物中实现CRISPR/Cpf1同源重组修复

  借助 CRISPR/Cas 系统介导的 HDR,实现优异等位基因替换和基因定点插入,进而创制农作物新种质,是农作物基因组编辑研究的热点和重要课题之一。但目前这一技术的广泛应用仍十分具有挑战性,主要原因在于:1)CRISPR/Cas系统引起的基因组靶位点DNA序列双链断裂(Double-stran

棉花干旱抗逆胁迫新基因表达及特征分析

干旱等非生物胁迫因素导致作物在形态、生理、生物化学及细胞水平上产生一些不利于其生长的反应,严重地阻碍着现代农业的发展。随着全球气候变暖和人类活动加剧,干旱有明显加重的趋势。棉花生产是纺织工业及国防建设的重要物质基础,也是中国农业重要组成部分,对中国国民经济的发展有着重要的影响,而且在世界棉花贸易市场

细胞转染的途径与方法

细胞转染是指将外源分子如DNA,RNA等导入真核细胞的技术,它是研究基因表达调控,突变分析等的常规工具。细胞转染分为瞬时转染和稳定转染。瞬时转染是指外源基因进入受体细胞后,存在于游离的载体上,不整合到细胞的染色体上。稳定转染是指DNA整合到宿主细胞的染色体中。细胞转染途径(一) 物理介导:

基因技术专题-1

专题一:RNA干扰技术(RNAi)1995年,康奈尔大学的Su Guo博士用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都阻断了基因的表达,他们对这个结果百思不得其解。直到1998年, Andrew Fire的研究证明,在正义RNA也阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA。这些

基因枪法转化大麦实验

实验材料麦穗试剂、试剂盒植物凝胶乙醇次氯酸钠蒸馏水亚精胺仪器、耗材EP 管移液枪实验步骤1. 组织培养基的准备( 1 ) 首先准备所需浓度 2 倍的植物凝胶,高压灭菌(见注 2 ) 。( 2 )  所有的组织培养基都要过滤灭菌,因此除了无菌的储备液,其他培养基成分按所需浓度 2 倍的量混匀

基因枪法转化大麦实验

实验材料麦穗                                         &nb

动物体内抑瘤实验——生物发光标记法

实验方法原理活体生物发光成像技术的原理:在小型哺乳动物体内利用报告基因(荧光素酶基因)表达所产生的荧光素酶蛋白与其小分子底物荧光素在氧、Mg2+存在的条件下消耗ATP发生氧化还原反应,将部分化学能转化为可见光能释放。因此只有在活细胞内才会发生发光现象。并且光的强度与标记细胞的数目线性相关。实验材料裸

RNA干扰实验技术

实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法,包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法,及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明,将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞,可以使mRNA发生特异性的降解,导致其相应的基因

基因技术专题-2

RNAi技术RNA干扰(RNA interference, RNAi)是近年来发现的研究生物体基因表达、调控与功能的一项崭新技术,它利用了由小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)引起的生物细胞内同源基因的特异性沉默(silencing)现象,其本质是siRNA与对应