PCR经验总结（一）
(首先声明，此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处，请信分子克隆)增加PCR的特异性1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件a 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同样会降低特异性,并且降低产量b GC% 40%~~~~60%c 5'端和中间序列要多GC,以增加稳定性d 避免3'端GC rich, 最后3个BASE不要有GC,或者最后5个有3个不要是GC e. 避免3'端的互补, 否则容易造成DIMER f. 避免3'端的错配 g. 避免内部形成二级结构 h. 附加序列(RT site, Promoter ......阅读全文
PCR经验总结（一）
(首先声明，此文不如分子克隆第三版权威与分子克隆相背处，请信分子克隆)增加PCR的特异性1. primers design 这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合下面的一些条件a 足够长,18-24bp,以保证特异性.当然不是说越长越好,太长的引物同
PCR经验总结（二）
5. touchdown PCR 原理很简单,但的确是一个很有用的方法。举个例子就OK, ANNEALING TEMP. 55度94 5min 94 30s 60 30s 72 1min 2cycles 94 30s 59 30s 72 1min 2cycles 94
RtPCR经验总结
Rt-PCR实验步骤一、实验器具与材料：1、移液枪：1ml、200μl、20μl、10μl、2μl2、吸头：1ml、200μl、20μl3、匀浆管：5ml4、吸头台：放置1ml吸头的一个，放置20μl吸头的一个5、EP管：1.5ml、0.2ml、100μl6、试剂瓶：2个60ml的棕色试剂瓶（广口，
western－blot实验经验总结（一）
做了很久的WB（western blot），走了很多弯路，其实发现WB想要做好并不难，总结了WB实验中可能会遇到的问题，分析了可能的原因及对应的解决方案，希望能成为你实验成功的基石。 问题1：转膜不充分(1)膜没有完全均匀湿透使用100% methanol浸透膜。(2)靶蛋白分子量小于10 000选
冻干制剂成功的经验总结（一）
简言：博医康一直致力于小试、中试、生产型真空冷冻干燥设备的研发、生产。在长期服务客户的过程中，发现冻干制剂生产问题频发。现特收集整理冻干制剂成功的经验供广大用户参考。概述：一、冻干制剂机理冻干机体积硕大，总不免让人产生难以驾驭的错觉。其实，从冻干机理来看，冻干机无非就是一种两台大冰箱加一个真空泵的结
【经验总结】77个药物分析小技巧（一）
无论什么行业，经验和技巧都是宝贵的财富，在药物分析行业也不例外。小编总结了前辈的一些实验室药物分析小技巧，希望能对你在实验过程中有所帮助。 1、 检验吲哒帕胺片的含量测定时，采用超声波超声可使片剂更易分散，主成分溶解完全，没有浪费，与研磨转移方法比较，对含量均匀度测定没有影响，且简单方便
一份老气质人的硬核经验总结
气相色谱质谱联用仪在有机物分析方面的地位毋庸置疑。全世界使用质谱联用仪的实验人员更数以百万，为了气质使用工作者更好的分析实验，笔者根据岛津气质的培训和在气质、气相日常使用过程中遇到的问题进行了经验总结，希望能够抛砖引玉，对你有所帮助。 气质的原理 气质主要由气相和质谱两个部分组成，其中气相是
PCR技术（一）：PCR技术概论
PCR技术概论PCR技术简史PCR技术的基本原理PCR反应体系与反应条件PCR反应特点PCR扩增产物的分析 聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction ,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出
细胞消化经验总结！
一、酶消化法1、胰酶。这是用得多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25%的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活性。保存
细胞消化的经验总结
一、酶消化法1、胰酶。这是用得最多的。一般浓度在0.25-0.5%。作用时间根据细胞种类、作用温度等因素而变化很大，从几分钟到几十分钟不等。0.25% 的胰酶作用于单层贴壁的细胞，在37度条件下，一般消化1-5分钟就足够了。终止是用血清。主要作用于细胞间。配制时不能用含钙、镁的平衡液，否则影响活
一文知晓PCR，定量PCR，数字PCR方法选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。diyi代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过
PCR实验技术（一）
PCR（聚合酶链式反应）【原理】PCR（polymerase chain reaction）用于在体外将微量的目标DNA大量扩增，以便进行分析。反应体系：①样品DNA；②引物（primer），是人工合成的一对寡核苷酸链（约15-20个核苷酸），用于扩增夹在双引物与模板DNA互补区之间的区域；③4种d
数字PCR应用（一）
一． PCR的发展历史 PCR技术自问世以来，在遗传病、病原体、癌基因等分子诊断领域和法医鉴定等方面发挥了巨大作用。第一代 PCR在进行扩增后通过凝胶电泳进行定性分析。 随着生物分子荧光技术的发展，1992年实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR, qPCR) 应运
PCR检测方法（一）
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致
PCR－Primer－Design（一）
Molecular Biology Today 2001. 2(2): 27-32. Vinay K. Singh and Anil Kumar Bioinformatics Sub-centr
一文知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择（一）
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。第一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将P
反向pcr和反式pcr一样么
反式PCR,或者称反转录PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、逆转录PCR,是聚合酶链式反应(PCR)的一种广泛应用的变形.在RT-PCR中,一条RNA链被逆转录成为互补DNA,再以此为模板通过PCR进行DNA扩增.P
western－blot实验经验总结（二）
问题4：有阳性条带，但条带比较弱（1）抗体染色不充分增加抗体浓度，延长孵育时间。（2）酶活性降低直接将酶和底物进行混合，如果不显色则说明酶失活了。选择在有效期内、有活性的酶联物。（3）标本中靶蛋白含量太低增加标本上样量。（4）洗膜过度缩短洗涤时间。（5）HRP抑制剂所用溶液和容器中避免含有叠氮化钠。
急诊科医生经验总结
1.对发热伴颈部淋巴结肿大的青少年患者，如抗生素治疗无效，要想到坏死增生性淋巴结病的可能。 2.对中老年昏厥患者，要优先考虑心源性的（冠脉或恶性心律失常），不管既往有无类似发作史。 3.以消化道症状为主诉的中青年患者，要想到急性重症心肌炎的可能。 4.老年纳差的，会不会是吞咽困
有机合成后处理经验总结
在有机合成中，后处理的问题往往被大多数人所忽略，认为只要找对了合成方法，合成任务就可以事半功倍了，这话不错，正确地合成方法固然重要，但是机合成的任务是拿到相当纯的产品， 任何反应没有 100％产率的， 总要伴随或多或少的副反应，产生或多或少的杂质，反应完成后，面临的巨大问题就是从反应混合体系中分离出
川芎嗪应用经验总结
川芎嗪是从中药川芎中提炼出来的，是川芎的主要有效成分。目前，川芎嗪作为现代用药，用作静脉注射剂，被较多地应用于缺血性脑血管病，如：脑供血不足、脑血栓形成、脑栓塞等。 经过临床表明：川芎嗪的作用还远不止这些。只要我们深入认识它的性能，全面把握它的功用，在辨证论治的基础上，灵活地应用它，就
尿沉渣检验的经验总结
尿常规检验是明确患者是否患有泌尿系统疾病的常用方法。如果尿液沉渣检验的操作条件和程序不一致,即使是同一患者的同一尿液标本,亦可出现不同的检验结果,影响临床诊断。为了探讨尿液沉渣检验的常见影响因素,提高临床诊断水平,我们对同一患者的尿液沉渣做了不同条件下的实验测定。现报告如下。1．材料与方法1.1 标
western－blot失败经验总结1
我做了很久的WB，最大的一个难点感觉在于样品制备上！蛋白的降解有些时候是你想象不到的，可能出奇的糟糕，也可能完全没事~~如果单独做WB的话，感觉以“快速彻底裂解，先变性后保存”的原则比较有效，尽量选择足够强的裂解液，甚至直接给loading buffer裂解，然后取出部分蛋白定量，其余加入loadi
western－blot失败经验总结2
我就跑胶和转膜谈一点儿自己的体会1、跑胶 电泳Buffer重复利用的时候要注意，不能混浊，有时候能用个3－4次，有时候第二次都不行了，事先前预电泳一下，看看气泡的均匀度；Buffer一定要淹过梳子孔，否则就会发现今天的蛋白不会跑；跑的时候先用低电压跑过浓缩胶，再换高电压跑分离胶，不要追求速度，慢慢跑
有机合成操作的经验总结
选择玻璃仪器和搅拌子：（1）均相反应：物料不超过容器体积的2/3；（2）非均相、回流或者产生气体的反应：物料不超过容器体积的小于1/2，无水无氧的反应时更应注意。搅拌装置的选择：（1）机械搅拌：物料体积>2 L的非均相体系；（2）强力搅拌：物料体积>3 L的均相反应和250 mL~2 L的非均相体系
手性柱的使用经验总结
手性分离重要的是选择一根好的手性柱，做手性分析的都知道，大赛璐的手性柱目前市场占有率高，根据用途分为多种不同的型号，大家熟悉的可能是OD-H。大赛璐公司初有四种填料，结构类似，对应的色谱柱分别是 OD、AD、OJ 和 AS，粒径10um，后来填料粒径变为5um，就是卖的多、使用范围广的柱子，号称四大
NBS溴化反应经验总结
NBS溴化试剂与溴化反应 今天下午蒸NBS 溴化后的产物，结果以下午都是眼泪鼻涕一起流，终于证实：所得产物并非溴代的2-ph-toluene，而是一个很奇怪的对眼睛和鼻子具有强烈刺激性的红褐色液体，很失败!弄得今天已下午心情都不好。起初还以为是乙醚或者CCl4，后来一想不太可能阿，乙醚或
普通－PCR、实时荧光定量－PCR－和数字－PCR－对比分析（一）
提起 PCR，在生物及其相关行业内可谓如雷贯耳，无人不知无人不晓，其影响之深，应用之广可见一斑。1985 年，美国 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人发明了聚合酶链反应（PCR），实现了在试管中模拟细胞内的 DNA 复制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶进行 PCR，由于该酶不
PCR一般步骤
(一)总RNA提取取液氮冻存脑组织置于玻璃匀浆器中，按100g:3ml的比例加入Trizol试剂，严格按照TrizolRNA提取试剂盒说明书的流程进行。(1)加Trizol（按3ml/100mg组织，宁多勿少）置于玻璃匀浆器中匀浆后，冰浴10-15min。(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 130
PCR污染的处理（一）
前言 一滴残留在裙子上的精液使得美国总统Bill Clinton不得不坦承他与白宫实习生有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据。这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerase chain reaction)--聚合酶链式反应具有的特色之一