PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（一）
郝麟1） 朱平1）＊ 于晓梅2） 张大成2） 赵新生3） 欧阳贱华3 （1）北京大学第一医院 北京 100034； 2）北京大学微电子学研究所 北京100871； 3）北京大学化学与分子工程学院 北京100871） 目的: 我们设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，能对基因的重排，突变和缺失等基因变异进行检测。PCR基因芯片的关键问题是如何检测出来在微反应池内获得的极其微量PCR产物。本文应用一些临床病例的实例标本，观察能否在基因芯片上进行不同的荧光掺入PCR反应并根据基因芯片上荧光的变化判断基因的变异。 方法：制作以硅片为材料的PCR基因芯片。利用健康外周血，正常脐血DNA，X连锁遗传性铁粒幼细胞贫（XLSA）家系成员6人外周血DNA做PCR-SSCP，并测序确定。设计检测此点突变的Taqman探针进行荧光PCR反应，在芯片上进行同样的......阅读全文
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究
基因芯片技术具有快速多样、微型化和自动化等特点在生物医学领域广泛的应用。但由于其基本原理是基于核酸杂交技术，有着内在的缺陷，实验的敏感性和重复性都存在一定问题。核酸杂交较适合于检测基因的表达，不易检测基因组DNA的基因的重排，突变和缺失。而大多数肿瘤性疾病和一些遗传变异和表型的改变与后者有关。为了解
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（五）
3．讨论 随着近年基因芯片技术的发展，研究者逐渐认识到基于核酸杂交原理的传统基因芯片缺陷与应用的局限性。随着PCR技术的进展，特别是荧光定量PCR技术的出现PCR技术已成为生物医学领域中应用最广泛的技术。如果一种基因芯片能直接进行PCR反应,而且能够同时扩增大批可能发生变异的基因显然会有广泛
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（三）
2.2 PCR-SSCP并测序分析发现X连锁遗传性铁幼粒细胞贫血家系ALAS2基因第5外显子基因异常 分析两兄弟及其父母、外祖父母的ALAS2基因，两兄弟ALAS2基因第5外显子的PCR扩增产物有与正常脐血不同的单链电泳条带，他们的父亲和外祖父有与正常脐血相同的单链电泳条带，而他们的母亲和外祖母同时
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（一）
郝麟1） 朱平1）＊ 于晓梅2） 张大成2） 赵新生3） 欧阳贱华3 （1）北京大学第一医院 北京 100034； 2）北京大学微电子学研究所 北京100871； 3）北京大学化学与分子工程学院 北京100871） 目的: 我们设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，能对基因的重
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（四）
2.5 用SYBR Green荧光染料做常规实时定量PCR分析HLA 应用位点特异性PCR(SCP)方法从20例正常人中确定2位HLAA2（编号1、2）与2位HLA非A2（编号3、4）。 在GeneAmp ®SDS 5700检测SYBR荧光染料4步位点特异PCR反应（图4）SYBR荧光染料PCR反
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（二）
1.3.2 PCR-SSCP方法分析按照我室常规进行。 1.3.3 Taqman荧光探针 以发现的ALAS2基因第五外显子点突变为中心设计，序列如下： 5’ （荧光集团）FAM-CAAGATCATAGAGAAGAAAC- TAMRA（淬灭集团） 3’，设计Taqman荧光PCR反应的上下
多重PCR基因芯片检测新研究
来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片检测方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民
多重PCR基因芯片检测新研究
来自疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民健康。其中绝大
基因测序为何代替不了基因芯片以及PCR？
新一代基因测序技术在最近五年飞速发展，这吸引了不少人的目光，做为精准医疗的基础，之前市场上的报告都集中关注于基因测序。于是原本红火的基因芯片技术沉寂了不少。早些 年，有人甚至预言，芯片技术面临消亡。诚然，在某些方面，新一代测序让芯片失色，但就 很多应用而言，芯片仍然是不可取代的。 芯片和高通
基因芯片
基因芯片(genechip)（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的
基因芯片简介
随着人类基因组（测序）计划（Human genome project）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而，怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共同的课题。为此，建立
基因芯片概念
基因芯片（又称 DNA 芯片、生物芯片）技术就是顺应这一科学发展要求的产物，它的出现为解决此类问题提供了光辉的前景。该技术系指将大量（通常每平方厘米点阵密度高于 400 ）探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。通俗地说，
基因芯片－简介
随着人类基因组（测序）计划（ Human genome project ）的逐步实施以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，基因序列数据正在以前所未有的速度迅速增长。然而 , 怎样去研究如此众多基因在生命过程中所担负的功能就成了全世界生命科学工作者共
基因芯片－原理
基因芯片(gene chip)的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，可以基因芯片的测序原理用图11-5-1来说明。在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与
什么是基因芯片？
基因芯片（genechip）（又称DNA芯片、生物芯片）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的
基因芯片检测原理
杂交信号的检测是DNA芯片技术中的重要组成部分。以往的研究中已形成许多种探测分子杂交的方法，如荧光显微镜、隐逝波传感器、光散射表面共振、电化传感器、化学发光、荧光各向异性等等，但并非每种方法都适用于DNA芯片。由于DNA芯片本身的结构及性质，需要确定杂交信号在芯片上的位置，尤其是大规模DNA芯片由于
基因芯片的应用
1998 年底 美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。现在，基因芯片这一时代的宠儿已被应用到 生物科学众多的领域之中。它以其可同时、快速、准确地分析数以千计 基因组信息的本领而显示出了巨大的威力。这些应用主要包括 基因表达检测、突变检测
基因芯片主要类型
目前已有多种方法可以将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。这些方法总体上有两种，即原位合成（ in situ synthesis ）与合成点样两种。支持物有多种如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基（视所要固定基因芯
基因芯片发展历史
俄罗斯科学院恩格尔哈得分子生物学研究所和美国阿贡国家实验室（ANL）的科学家们最早在文献中提出了用杂交法测定核酸序列（SBH）新技术的想法。当时用的是多聚寡核酸探针。几乎与此同时英国牛津大学生化系的Sourthern等也取得了在载体固定寡核苷酸及杂交法测序的国际ZL。在这些技术储备的基础上，1994
基因芯片的应用
DNA芯片技术就是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。是伴随“人类基因组计划”的研究进展而快速发展起来的一门高新技术。通俗地说，基因芯片是通过微加工技术，将数以万计、
基因芯片的原理
基因芯片（gene chip）的原型是80年代中期提出的。基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，可以用图11-5-1来说明。在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置
基因芯片的应用
1998 年底美国科学促进会将基因芯片技术列为 1998 年度自然科学领域十大进展之一，足见其在科学史上的意义。现在，基因芯片这一时代的宠儿已被应用到生物科学众多的领域之中。它以其可同时、快速、准确地分析数以千计基因组信息的本领而显示出了巨大的威力。这些应用主要包括基因表达检测、突变检测、基因组多态
基因芯片相关技术
样品的准备及杂交检测目前，由于灵敏度所限，多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增，不过也有不少人试图绕过这一问题，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物特异性强，无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐； Lynx Therapeutics 公司引入
基因芯片相关技术介绍
样品的准备及杂交检测目前，由于灵敏度所限，多数方法需要在标记和分析前对样品进行适当程序的扩增，不过也有不少人试图绕过这一问题，如 Mosaic Technologies 公司引入的固相 PCR 方法，引物特异性强，无交叉污染并且省去了液相处理的烦琐； Lynx Therapeutics 公司引入的大
基因芯片的主要类型
目前已有多种方法可以将寡核苷酸或短肽固定到固相支持物上。这些方法总体上有两种，即原位合成（in situ synthesis）与合成点样两种。支持物有多种如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基（视所要固定的分子为核
基因芯片：春天在哪里
俞菁(化名)是一名手语翻译，她的妈妈因为小时候一次注射庆大霉素致聋，但她自己的听力得以保持健全。俞菁有一位好姐妹，情况却正好相反，她妈妈听力正常，而她自己在小时候在一次药物注射后变成了听障患者。 去年，她们都参加了北京市的一个高危人群致聋基因筛查，结果两个人都是致聋基因的携带者，只是因为俞
基因芯片检测原理（一）
基因芯片的基本原理同芯片技术中杂交测序（sequencing by hybridization, SBH）。即任何线状的单链DNA或RNA序列均可被分解为一个序列固定、错落而重叠的寡核苷酸，又称亚序列（subsequence）。例如可把寡核苷酸序列TTAGCTCATATG分解成5个8 nt亚
LDR临床检测基因芯片
基因芯片生物芯片是指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子、组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物（如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体）的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描对杂交信号的强
基因芯片技术的简介
随着人类基因组( human genome p roject, HGP) 、多种模式生物(model organism)和部分病原体基因组测序的完成,基因序列数据以前所未有的速度不断增长。传统实验方法已无法系统地获得和诠释日益庞大的基因序列信息,研究者们迫切需要一种新的手段,以便大规模、高通量地
基因芯片的测序原理
基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序