PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究
基因芯片技术具有快速多样、微型化和自动化等特点在生物医学领域广泛的应用。但由于其基本原理是基于核酸杂交技术，有着内在的缺陷，实验的敏感性和重复性都存在一定问题。核酸杂交较适合于检测基因的表达，不易检测基因组DNA的基因的重排，突变和缺失。而大多数肿瘤性疾病和一些遗传变异和表型的改变与后者有关。为了解决上述问题，我们将芯片技术与荧光PCR技术相结合，设立设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，以期能快速、准确的对基因的重排，突变和缺失等基因变异进行检测。常规PCR反应产物的检测是电泳后观察获得基因片段的大小，PCR基因芯片的关键问题是如何检测出来在微反应池内获得的极其微量PCR产物。本文应用一些临床病例的实例标本，观察能否在基因芯片上进行不同的荧光PCR反应，如何根据基因芯片上荧光的变化判断基因的变异。1、病例、材料与方法1.1 基因组DNA标本健康成年人外周血DNA，正常脐血DNA，X连锁遗传性铁粒幼细胞贫血（XLSA）家系成......阅读全文
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究
基因芯片技术具有快速多样、微型化和自动化等特点在生物医学领域广泛的应用。但由于其基本原理是基于核酸杂交技术，有着内在的缺陷，实验的敏感性和重复性都存在一定问题。核酸杂交较适合于检测基因的表达，不易检测基因组DNA的基因的重排，突变和缺失。而大多数肿瘤性疾病和一些遗传变异和表型的改变与后者有关。为了解
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（五）
3．讨论 随着近年基因芯片技术的发展，研究者逐渐认识到基于核酸杂交原理的传统基因芯片缺陷与应用的局限性。随着PCR技术的进展，特别是荧光定量PCR技术的出现PCR技术已成为生物医学领域中应用最广泛的技术。如果一种基因芯片能直接进行PCR反应,而且能够同时扩增大批可能发生变异的基因显然会有广泛
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（三）
2.2 PCR-SSCP并测序分析发现X连锁遗传性铁幼粒细胞贫血家系ALAS2基因第5外显子基因异常 分析两兄弟及其父母、外祖父母的ALAS2基因，两兄弟ALAS2基因第5外显子的PCR扩增产物有与正常脐血不同的单链电泳条带，他们的父亲和外祖父有与正常脐血相同的单链电泳条带，而他们的母亲和外祖母同时
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（一）
郝麟1） 朱平1）＊ 于晓梅2） 张大成2） 赵新生3） 欧阳贱华3 （1）北京大学第一医院 北京 100034； 2）北京大学微电子学研究所 北京100871； 3）北京大学化学与分子工程学院 北京100871） 目的: 我们设计一种含有大量微反应池的PCR基因芯片，能对基因的重
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（四）
2.5 用SYBR Green荧光染料做常规实时定量PCR分析HLA 应用位点特异性PCR(SCP)方法从20例正常人中确定2位HLAA2（编号1、2）与2位HLA非A2（编号3、4）。 在GeneAmp ®SDS 5700检测SYBR荧光染料4步位点特异PCR反应（图4）SYBR荧光染料PCR反
PCR基因芯片上荧光PCR反应的研究（二）
1.3.2 PCR-SSCP方法分析按照我室常规进行。 1.3.3 Taqman荧光探针 以发现的ALAS2基因第五外显子点突变为中心设计，序列如下： 5’ （荧光集团）FAM-CAAGATCATAGAGAAGAAAC- TAMRA（淬灭集团） 3’，设计Taqman荧光PCR反应的上下
多重PCR基因芯片检测新研究
来自中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片检测方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民
多重PCR基因芯片检测新研究
来自疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病诊断室的研究人员建立并初步评价了一种针对重要肠道病原菌的多重PCR基因芯片方法，这一方法具有较高的特异性，并且混合PCR可以分别按照种属内和种属间的引物组合方案用于多病原的筛检。 感染性腹泻在我国发病率居各类传染病之首，长期以来严重危害人民健康。其中绝大
普通PCR梯度PCR－原位PCR－荧光定量PCR仪的区别
普通PCR仪： 一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪，也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如；（ABI 2720） 梯度PCR仪： 一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称
评估荧光定量PCR反应性能的标准
罗氏FastStart qPCR预混液通过化学修饰法进行Taq DNA聚合酶的活性封闭及高温启动，为实时荧光定量PCR带来高质量的荧光信号和扩增效率。让您获得可信赖的基因表达研究结果。FastStart Essential DNA Green Master和FastStart Essential
荧光定量PCR技术的荧光定量PCR的方法
接下来我们就来了解一下荧光定量的主要方法，我们如何选择合适的方法？荧光定量PCR所使用的荧光化学可分为两种：荧光探针和荧光染料。而荧光定量 PCR 的方法相应的可分为特异类和非特异类两类，特异性检测方法是在PCR反应中利用标记荧光染料的基因特异寡核苷酸探针来检测产物；而非特异性检测方法是在在PCR反
影响PCR及荧光PCR－的因素
引物的设计和选择符合荧光PCR的探针并进行设计对于实时荧光PCR尤其重要。可以说，不合理的设计意味着绝对的失败。但是，好的设计并不等于好的实验结果，影响PCR和荧光PCR的因素非常多，下面择其重要进行介绍。 3.1 引物退火温度 引物的一个重要参数是熔解温度（Tm）。这是当50％的
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验方法原理 实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实验材料
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验材料 细胞样品试剂、试剂盒 RNA提取试剂盒荧光定量PCR MixTRIZOLdNTP氯仿逆转录酶MMLV异丙醇Taq酶DEPC水ddH2OTEMgCl2琼脂糖溴化乙锭MOPS甲醛乙酸钠EDTAEB溴酚兰仪器、耗材 离心管离心机风光光度计电泳槽凝胶板Realtime PCR仪实验步骤 一、 样品
实时荧光定量PCR（realtime－PCR）
实验步骤一、 样品RNA的抽提 1. 取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。2. 两相分离 每1 ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2 ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12 000 rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的
实时荧光定量pcr仪的PCR优势
样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值（限制点的循环数）。域值应设定在使指数期的扩增效率为最大，这样可以获得最准确，可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品，线性回归分析将产生一条标准曲线，可以用来计算未知样品的浓度。
荧光定量PCR
荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结
荧光PCR原理
1．荧光染料荧光基团通常各自拥有单一的光吸收峰。在光的刺激下，荧光基团吸收光的能量后通常以三种方式释放出能量：1) 光能 许多荧光基团吸收光能后仍旧以光能形式释放能量，并且发射光的峰值大于吸收峰。比如荧光染料Fam的光吸收峰为490nm，而发射峰为530nm。 2) 热能 某些荧光基团吸收光能后，能
PCR技术的发展（上）
各位科研君每天穿梭于实验室，一定枯燥乏味吧！今天，和小编一起任性一回！听听小编给你讲故事。注意啦，小伙伴们搬起板凳坐好啦！小编要开始讲啦！ 故事还得从我们熟悉的PCR开始～～～ PCR (Polymerase Chain Reaction)，聚合酶链式反应，取名效法“原子核裂变链式反
PCR技术的发展（上）
各位科研君每天穿梭于实验室，一定枯燥乏味吧！今天，和小编一起任性一回！听听小编给你讲故事。注意啦，小伙伴们搬起板凳坐好啦！小编要开始讲啦！故事还得从我们熟悉的PCR开始～～～PCR (Polymerase Chain Reaction)，聚合酶链式反应，取名效法“原子核裂变链式反应”。首先将待扩
实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】
【FT-PCR】实时荧光定量PCR仪【实时荧光定量PCR仪】_风途厂家_Kgaoletšo ya dikarolo tše bopago seswantšho tša kgole ya PCR 具体来讲扑杀无害化处理染疫动物，禁止泔水饲喂生猪，加强生猪养殖运输屠宰等各个环节的清洗和消毒，包括养
普通PCR－梯度PCR－荧光定量PCR仪的区别及运用
PCR：即合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，利用DNA在体外95℃时解旋（变性），55℃时引物与单链按碱基互补配对的原则结合（退火），再调温度至72℃左右，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链（延伸）。PCR仪实际就是一个温控设
PCR,RTPCR,实时荧光定量PCR的区别与联系
1、所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也
PCR,RTPCR,实时荧光定量PCR的区别与联系
1、所说的PCR应该就是最常规的PCR，以DNA为模板，通过上下游引物，实现DNA的扩增。2、RT-PCR一般情况下是指反转录PCR（reverse transcription），尽管有些资料上说实时荧光定量PCR也（realtime fluores-cence quantitative PCR）也
普通PCR－梯度PCR－荧光定量PCR仪的区别及运用
PCR：即合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，利用DNA在体外95℃时解旋（变性），55℃时引物与单链按碱基互补配对的原则结合（退火），再调温度至72℃左右，DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链（延伸）。PCR仪实际就是一个温控
普通PCR、实时荧光定量PCR、数字PCR技术的功能区别
一、普通PCR技术 KARY MULLIS （1944.12.28-2019.8.7） Kary Mullis于1983年发明了聚合酶链式反应法（polymerase chain reaction ，PCR），据说是载着女友开车的时候，忽然灵光一闪，想到了PCR原理（论开车的好处）
PCR技术（二）：PCR反应模板的制备
PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量.模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要.模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败.而提高模板核酸质量的 关键是除去杂质(蛋白质、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
pcr技术应用论文：荧光定量PCR技术在肿瘤研究中的应用
陈文学 邹学森 陈岳青 黄秀珍 钟礼瀑 （江西省肿瘤医院 肿瘤研究所， 江西 南昌 330029） [摘要] 荧光定量PCR技术具有简便、灵敏、准确等优点，目前已经在乙肝和性病的诊断和治疗中得到了广泛的应用，但在肿瘤方面的应用还处在研究和开发阶段。本文综述近年国内外相关荧光定量PCR技术在肿瘤研究中
实时荧光定量PCR与普通PCR的区别
二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。区别：1、二者系统组成不同荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。2、二者原理不同荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测
实时荧光定量PCR与普通PCR的区别
二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。区别：1、二者系统组成不同荧光定量PCR仪比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。2、二者原理不同荧光定量PCR实时监测与DNA结合的荧光染料激发的荧光，普通OCR通过检测插入DNA中核算染料的量来测