RPA重组酶是什么?
2006 年,Piepenburg 等首次提出了重组酶聚合酶扩增反应(recombinase polymerase amplification,RPA)。它是由重组酶(T4 uvsX)、聚合酶(Bsu)和单链结合蛋白(gp32)以及两条特异性的上下游引物参与的等温扩增。 首先, T4 uvsX 在辅助因子 uvsY 的作用下与引物结合形成核酸蛋白复合物,然后该复合物寻找与靶标 DNA 的互补区域进行杂交并置换下另一条单链,置换下的单链马上被 gp32 结合防止其再与互补链杂交,最后 T4 uvsX 在 ATP 的作用下与引物解离,聚合酶 Bsu 与引物结合并沿模板进行延伸(图 1)。 该反应在 37~42℃下 30 min 内可以获得 1012 拷贝的扩增产物,其灵敏度可达到单拷贝,其扩增产物长度在 500 bp 以内最佳。对 RPA 产物的 检测可采用包括琼脂糖凝胶电泳、荧光探针实时检测、及侧流层析检测等多种方法。由于......阅读全文
RPA重组酶是什么?
2006 年,Piepenburg 等首次提出了重组酶聚合酶扩增反应(recombinase polymerase amplification,RPA)。它是由重组酶(T4 uvsX)、聚合酶(Bsu)和单链结合蛋白(gp32)以及两条特异性的上下游引物参与的等温扩增。 首先, T4 uvsX
RPA(重组酶聚合酶扩增)技术原理及RPA与LAMP对比
英国TwistDx公司(前身为ASM科技有限公司)成立于1999年,基于英国剑桥Babraham研究院建立的生物技术公司。该公司通过突破等温DNA扩增,开发的重组酶聚合酶扩增ZL技术(RPA),被誉为DNA诊断领域的革命性创新。(http://www.twistdx.co.uk)
重组酶聚合酶扩增(RPA)技术简介
核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA
twistDx-的重组酶聚合酶扩增(RPA)技术原理
twistDx 的重组酶聚合酶扩增(RPA)将彻底改变在资源有限的现场环境中扩增和检测核酸的能力。RPA 技术原理RPA 体系的重点是重组酶,这些酶与寡核苷酸引物形成复合体,并使引物与双链 DNA 中的同源序列配对。单链 DNA 结合(SSB)蛋白与被取代的 DNA 链结合,并使形成的 D 环保
rpa是什么技术
RPA的意思机器人流程自动化,通过配置RPA(也称为“机器人自动化”)来模拟软件系统中的人类交互,从而允许执行业务流程。RPA软件机器人识别应用程序接口上的数据,并像人一样操纵应用程序。RPA软件根据规则与其他系统交互,并根据需要执行各种重复任务。它比人类做得更好。RPA软件机器人不会睡觉,不会出错
核酸检测革命:rpa技术原理
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。本专题为大家详细介绍RPA的原理、引物设计、疑难解答以及在致病菌检测、病毒检测以及癌症研究中的灵活应用。 自PCR技术诞生以来已经有三十年了,从经典PCR
RNA酶保护实验(RNase-Protection-Assay,RPA)简介
简介:RNA酶保护试验(RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。1. 原理:双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。2. 应用:检测RNA表达3. 与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优
RNA酶保护试验((RNase-Protection-Assay,RPA)简介
RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。1。原理:双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。2。应用:检测RNA表达3。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:1.
RNA酶保护实验(RNase-Protection-Assay,RPA)简介
简介: RNA酶保护试验(RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。 1. 原理:双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。 2. 应用:检测RNA表达 3. 与Northern杂交和RT-PCR比较
RNA酶保护试验((RNase-Protection-Assay,RPA)方法
一、试剂准备1. GACU POOL:取100mM ATP、CTP、GTP各2.78μl、100mM UTP 0.06μl,加DEPC H2O至100μl。2. 杂交缓冲液IPES 0.134g、0.5M EDTA(pH8.0)20μl、5M NaCl 0.8ml、甲酰胺8ml,加DEPC H2O至
RPA技术原理与RPA产品形态简述
回顾2019年,RPA机器人流程自动化行业迎来了一个快速发展的机遇。RPA创业者得到了国内投资人的认可,一些RPA公司也接连拿到千万美金级别的融资,这在当下遇冷的资本市场环境下显得格外耀眼。 眼下,RPA已在金融、财会、电信、能源、制造、物流等行业领域生根发芽。当下的RPA技术可以替代各行业企
什么是重组酶?
中文名称重组酶英文名称recombinase定 义参与基因定位重组过程的酶。负责识别、切割特异的重组位点,并连接两个参与重组的分子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
Bdf1通过与RPA促进同源重组修复原理揭晓
表观遗传调控DNA同源重组机制获揭示 Bdf1偶联H4乙酰化修饰和DNA重组修复过程 武汉大学供图 近日,《尖端科学》在线发表了武汉大学生命科学学院遗传学系、细胞稳态湖北省重点实验室教授陈学峰课题组的最新研究成果。该研究揭示了酵母溴结构域家族蛋白Bdf1及其人类同源蛋白TAF1在促进DNA
搞定恒温扩增分子诊断(RPA/RAA)
分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定!为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RPA, recombinase polymeras
一文搞定恒温扩增——RPA/RAA
分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问,决定开小灶,包会!哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RP
重组酶聚合酶扩增叙述
重组酶聚合酶扩增(RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。RPA技术主要依赖于三种酶:能结合单链核酸(寡核苷酸引物)的重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶。这三种酶的混合物在常温下也有活性,最佳反应温度在37℃左右。重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物,能在双链D
RNA酶保护试验((RNase-Protection-Assay,RPA)的优缺点
RNA酶保护试验((RNase Protection Assay,RPA)是通过液相杂交的方式,用反义RNA探针与样品杂交,以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较,RPA有以下几个优点:1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造
核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA
自PCR技术诞生以来已经有三十年了,从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。很多人的实验根本离不开PCR。笔者曾经也接触PCR很长一段时间,加样、设置程序、等待、检测。这些过程看起来容易,但实验结果却总是会出人意料,很多时候根本不知道是哪里出了错。那
核酸检测革命:可替代PCR的犀利技术——RPA
导读重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术。本专题为大家详细介绍RPA的原理、引物设计、疑难解答以及在致病菌检测、病毒检测以及癌症研究中的灵活应用。自PCR技术诞生以来已经有三十年了,从经典PCR、实
DNA重组技术-酶切
实验概要 通过酶切获得可进行体外重组的载体和外源DNA实验原理 DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开,经分离纯化后,用链接酶将其连接,构成新的DNA分子。 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DN
什么是Cre重组酶?
Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子,Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡 [1] 。 Cre(Cyclization Recombination Enzyme,即环化重组酶)是来源于噬菌体P1的一种
快速核酸检测黑科技——RPA
面对突如其来的新冠疫情核酸检测引来发展新高潮尤其在分子诊断领域传统核酸分子检测技术不断蜕变和创新从未淡出我们的视野经历了经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR三个阶段这些都离不开PCR的高温变性低温退火和延伸离不开精准控温的PCR仪今天小编给你介绍一个黑科技可以替代PCR的核酸检测技术--重
核酸检测的一场革命,可替代PCR的犀利技术
自PCR技术诞生以来已经有三十年了。从经典PCR、实时定量PCR再到现在的数字PCR,这一技术在不断蜕变却从未淡出我们的视野。 英国TwistDx Inc公司开发的重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸
同源重组的原理是什么?
同源重组(Homologous Recombination) 是指发生在非姐妹染色单体(sister chromatid) 之间或同一染色体上含有同源序列的DNA分子之间或分子之内的重新组合。同源重组需要一系列的蛋白质催化,如原核生物细胞内的RecA、RecBCD、RecF、RecO、RecR等
The-ribonuclease-protection-assay-(RPA)
The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by th
什么酶重组等温扩增技术?
通过模拟生物体遗传物质自身扩增复制的原理,将来源于细菌,病毒和噬菌体的特定重组酶、外切酶、聚合酶等多酶体系进行改造突变并筛选其功能,通过不同的核酸扩增反应体系进行优化组合,从而获得核心的重组等温扩增体系,建立特殊扩增反应体系,在37-42℃恒温条件下,可将微量DNA/RNA的特异性区段在数分钟内扩增
重组质粒双酶切鉴定
既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了。 你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题。 pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6
DNA重组技术:酶切、连接
实验原理: DNA重组技术是用内切酶分别将载体和外源DNA切开,经分离纯化后,用链接酶将其连接,构成新的DNA分子。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。如EcoRⅠ切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。 5’…G↓A
重组克隆筛选(酶切鉴定)
【实验目的】1.掌握质粒提取的基本方法的原理;2.学习和掌握限制性内切酶的使用方法。【实验原理】重组克隆的筛选和鉴定是基因工程中的重要环节之一。不同的克隆载体和相应的宿主系统,其重组克隆的筛选和鉴定方法不尽相同。从理论上说,重组克隆的筛选是排除自身环化的载体、未酶解完全的载体以及非目的DNA片断插入
重组蛋白的定义是什么?
重组蛋白的产生是应用了重组DNA或重组RNA的技术从而获得的蛋白质。体外重组蛋白的生产主要包括四大系统:原核蛋白表达,哺乳动物细胞蛋白表达,酵母蛋白表达及昆虫细胞蛋白表达。生产的蛋白在活性和应用方法方面均有所不同。根据自身的下游运用选择合适的蛋白表达系统,提高表达成功率。