搞定恒温扩增分子诊断(RPA/RAA)
分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定!为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RPA, recombinase polymerase amplification重组酶介导的扩增技术,RAA, recombinase-aidamplification重组酶,recombinase,同引物形成蛋白-核酸复合物,指导引物与模板结合,起到定位作用;帮助DNA 模板的解链和促使模板与引物之间发生链替换。单链DNA结合蛋白,SSB, single stranded DNA binding。同置换出来的单链DNA结合,防止DAN配对两条链再次结合。DNA聚合酶,DNA polymerase,以DNA为模板,利用dNTP合成子代DNA。核酸内切酶,endonuclease,可水......阅读全文
搞定恒温扩增分子诊断(RPA/RAA)
分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定!为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RPA, recombinase polymeras
荧光定量PCR-vs.-恒温扩增,谁才是分子诊断的未来?
荧光定量PCR 和恒温扩增在分子诊断方面的应用日渐受关注,两种技术孰优孰劣,且听作者娓娓道来。基于核酸扩增的分子诊断,是通过引物介导特异性扩增目的基因,以检测内源性(遗传或变异)或外源性(病原体)目的基因的存在与否,从而对疾病的诊断和治疗提供信息和决策依据。其主要应用场景有传染病的诊断,血筛,肿瘤早
恒温核酸扩增技术的扩增速度
由于恒温核酸扩增只需要在一个温度下进行,相比较于PCR不同温度之间的循环,恒温扩增不需要反复的升温降温过程,有些恒温扩增的速度是快于PCR的扩增速度的。例如:环介导恒温核酸扩增(LAMP),重组聚合酶扩增法(RPA)以及切刻内切酶恒温扩增(NEAR)。目前英国公司optigene已经成功的改造了
恒温核酸扩增技术概述
恒温核酸扩增技术是利用各种酶,引物,脱氧核苷三磷酸(dNTP),模板DNA以及缓冲液的混合物在同一温度下温浴一定时间,让不同的酶与DNA进行反应,从而达到特定DNA片段的扩增。与传统的PCR核酸扩增相比,恒温核酸扩增不需要在不同温度之间的转换,只要保持酶反应的最佳温度,37℃、42℃、56℃或6
恒温核酸扩增技术通量
在实际的产业化中,分子诊断仪器的通量往往至关重要。对于qPCR而言,由于引物设计的成熟和荧光通道的多样性,往往可以比较好的实现高通量检测。由于恒温核酸扩增技术引物设计较为困难,单一的反应温度会造成引物和模板,引物与引物之间的非特异性链接和扩增,使得恒温扩增的检测通量受到限制。但同时也得益于反应温
恒温扩增技术与PCR-区别
如果是恒温的话怎么来完成变性、退火以及延伸过程呢下面是摘录的:操作技术和普通PCR没区别,反应温度上不要高温低温中文三步,只要60度就可以。原理,在常规PCR基础上增加了3对引物(普通1对)使得引物几乎涵盖了目的基因序列的三分之一以上。如果定量加荧光探针,定性就不必了。
恒温核酸扩增技术的特异性
由于恒温核酸扩增的整个反应是没有温度的变化,模板DNA双链的打开,引物与互补片段的链接以及新片段的合成都是在同一温度下进行的。这就造成某些情况下的反应体系里引物之间形成非特异性互补,扩增,最后造成假阳性的结果。与PCR相比,恒温核酸扩增更易出现假阳性的结果。
切刻内切酶(NEAR)恒温扩增
切刻内切酶(NEAR)恒温扩增是目前相关研究最少的一种恒温核酸扩增技术。它是在2008年由Ionian科技公司的研究人员开发并申请ZL的(Brain等2009)。除了链置换酶(Bst)外,NEAR反应中还需添加一个切刻内切酶。NEAR反应的引物设计需要将所使用的切刻内切酶的DNA作为序列加在引物
恒温核酸扩增技术与传统PCR对比
和传统的PCR技术相比,恒温核酸扩增不仅仅是缩短了核酸扩增的时间,更重要的是核酸扩增摆脱了对硬件的束缚。PCR技术原理是利用94℃高温使DNA双链解开,并在耐高温的DNA聚合酶的作用下扩增DNA片段。PCR反应至少需要2个不同的温度使DNA片段得到特异性的扩增。恒温核酸扩增是利用各种酶与DNA之
最简单的恒温扩增PCR——RCA/RCT
小背景滚环扩增技术,rolling circle amplification,RCA——基于DNA的扩增方法;滚环转录技术,rolling circle transcription,RCT——基于RNA的扩增方法。 滚环扩增/转录技术是基于借鉴了自然界中环状DNA/RNA复制和转录方式开发的一种恒温
一文搞定恒温扩增——RPA/RAA
分子诊断技术今日不同以往,着实借力突飞猛进,恒温扩增技术由于其扩增期间不需要特殊的仪器设备而更受瞩目。恒温扩增方法有多种,今天就回顾RPA/RAA,让大家一文通俗搞定~~嗯啊, 如果有疑问,决定开小灶,包会!哈哈~~为了确保大家所认知的基本概念是一致的,请先了解以下名词解释重组酶聚合酶扩增技术,RP
分子诊断经验篇:如何应对等温扩增时出现的假阳性问题
等温扩增技术作为一种核酸分子诊断技术,从诞生之日起就不断受到研究者的青睐,但也少不了唏嘘、质疑,甚至摒弃。引起这种截然相反的态度的原因在于等温扩增技术自身所存在的缺陷。而最为突出的一点是,在建立方法或者实际样本检测的过程中,等温扩增技术引起假阳性结果的概率相对较高,使得其实际应用范围变窄,未能真正显
肿瘤中基因扩增的分子分析实验
实验材料肿瘤组织试剂、试剂盒NaCl 溶液乙醇TE 缓冲液小牛胸腺 DNA 标准品毛细试验溶液1 X TNE 缓冲液亚精胺限制酶和相关的10 X 缓冲液牛血清白蛋白6 X 上样缓冲液HCl20 X 和 60 X SSC绯精子DNA双链 DNA 探针20% SDS仪器、耗材DNA 提取试剂盒7. 5
恒温扩增荧光检测仪有哪些特点?
1.体积小,重量轻,易于携带。轻松满足外出实验的需求。 2.内置7寸高清电容屏PDA,触屏操作,简便快捷。 3.Marlow高品质Peltier制冷片,结合德国高端PT1000温度传感器以及电性电阻加热补偿边缘的温度控制模式,最大升温速度6℃,最大降温速度5℃,大大缩短实验时间。 4.整板
恒温扩增荧光检测仪的用途举例
非洲猪瘟PCR检测仪(实时荧光定量PCR仪)用于运行病毒检测实验,并对实验数据进行分析;仪器既可在实验室内操作,又可用于野外科学实验,配合相应试剂,对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。 仪器配套非洲猪瘟病毒核酸快速检测试剂盒(荧光 RPA 法)、非洲猪瘟病
分子生态学词汇随机扩增多态
随机扩增多态 DNA (randomly amplified polymorphic DNA, RAPD),是美国学者Williams和Welsh于1990年首先提出的该技术是通过分析DNA的PCR产物的多态性来推测生物体内基因排布与外在性状表现的规律的技术。RAPD技术是以8-lObp的随机寡核苷
恒温核酸扩增技术对引物的高要求
自80年代PCR技术发明以来,PCR引物的设计已经相当成熟,市场上有很多关于PCR引物设计的软件可供使用。所以设计一对好的PCR的引物并不困难。恒温核酸扩增刚好相反。一对或者几对好的引物对任何一种恒温核酸扩增技术都是相当关键的,可是由于恒温核酸扩增技术各不相同,引物设计方法很难相互借鉴。目前虽然
恒温核酸扩增反应引物探针设计问题合集
重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA),被称为是可以替代PCR的核酸检测技术(由英国公司开发)。以此为基础的核酸扩增产品,能够在15分钟内进行常温下的单分子核酸检测。该技术对硬件设备的要求很低,特别适合用于体外诊断、兽医、食品安全
丹纳赫重视分子诊断市场-展出Veris分子诊断平台
2015年1月12日-15日,第33届JP摩根健康投融资大会在美国旧金山举行。大会上,各家公司都派出重量级阵营,公布上年度经营业绩,发布最新产品。 丹纳赫公司新任总裁兼CEO Thomas Joyce在大会上展示贝克曼库尔特公司最新的Veris分子诊断平台,该产品定于今年下半年在欧洲推向市场
分子诊断设计思考
背景相比于药的研发周期长,体外诊断试剂盒更像是手游市场,是一个快速变革的红海市场。比如说从ibrutinib到Acalabrutinib,同一个靶点的二代产品要做完整个临床试验,证明安全性有效性才可以申请上市。而未来随着科学发展,某一天新的靶点与某种癌症的关系得到学界的共识,也许从试剂盒设计而言就是
分子诊断工具介绍
因分子技术具有内在准确性、敏感性、特异性和周转迅速的特点,带来了分子诊断行业的快速发展。此外,因为分子诊断技术具有准确性、敏感性和特异性,实验室人员能够从很小量的样本中就可获得有效的结果。这对法医检测领域来说是非常有用的,但同时该技术也可以检测到目标物质的极低浓度,从而使临床医生在极早期阶段就能检测
带分子诊断“下乡”
传统分子诊断因仪器精密、价格昂贵、对中央实验室要求高而只限于高等医院,优思达正努力将其带入偏远村庄。 在今年“创新中国DEMO CHINA”医疗健康专场中,最耀眼的莫过于在专场总决赛拔得头筹的杭州优思达生物技术有限公司(下简称“优思达”)了。这是一家研发、生产快速分子诊断试剂和设备的高
HIV的分子诊断
确定病毒载量的分子技术的发展和基因型耐药性的发展,使HIV病治疗发生了根本的改变。商业上可获得的病毒载量检测技术有许多,从逆转录PCR到分支链DNA扩增等不同方法。这些检测的局限性在于没有一个国际标准来比较不同方法测定的病毒载量,以及由于HIV的不同分化枝的差异性引起某些患者样本检出低下或未被检出。
肿瘤分子诊断概述
二十一世纪的今天,恶性肿瘤仍然是严重危害人类生命健康的重大疾病。从世界范围内看,肿瘤的发生、发展不容乐观。随着人口逐渐老龄化、吸烟、感染、环境污染、膳食结构等问题的存在,肿瘤诊断所面临的形势极为严峻。一、肿瘤生物标志物的发现肿瘤发生、发展的有迹可循,促使人们投放了更多的精力于发现新标志物。自从184
分子诊断发展简史
沃森和克里克提出DNA双螺旋结构,“生命之谜”被打开,经过PCR技术、生物芯片技术、DNA测序技术之后分子诊断正在快速成为人类疾病诊断的最有效方式之一。分子诊断发展四阶段第一阶段:利用分子杂交技术进行遗传病基因诊断:通过婴儿胚胎期进行产前诊断,超早期预知某些疾病发生、发展和预后。1978年著名没计划
什么是分子诊断
分子诊断:应用分子生物学方法检测患者体内遗传物质的结构或表达水平的变化而做出诊断的技术,称为分子诊断。分子诊断是预测诊断的主要方法,既可以进行个体遗传病的诊断,也可以进行产前诊断。分子诊断的材料包括DNA、RNA和蛋白质。分子诊断主要是指编码与疾病相关的各种结构蛋白、酶、抗原抗体、免疫活性分子基因的
从新冠疫情看分子诊断POCT的发展
疾病检测技术一直处于高速发展的过程中,越来越多的手段使人类对疾病的诊断日渐精准。但是,准确率更高的检测手段通常意味着更高的成本、更长的时间、更繁复且条件苛刻的诊断流程,这使得临床往往在面对高度传染性疾病时陷入两难的境地,即大规模确诊病人的紧迫性与捉襟见肘的高端检测资源相冲突。在此次新冠疫情
布鲁克收购传染病分子诊断公司Hain-扩展分子诊断产品
分析测试百科网讯 近日,布鲁克表示已签署最终协议,获得传染病分子诊断公司Hain Lifescience的多数股权。据布鲁克表示,总部位于德国的Hain将增加结核病和分枝杆菌,以及病毒学和人类遗传学的能力检测。 布鲁克计划收购Hain的80%股权,其余20%的股权可以在2021年之后行使。布鲁
恒温扩增荧光检测仪能应用到哪些领域?
应用领域 □ 基础科学研究 □ 病原体检测 □ 肉制品掺假 □ 转基因检测 □ 食品安全检测 □ 药物开发及合理用药 □ 基因表达 □ 水体监测
兽医体外诊断的趋势——分子诊断
宠物已成为现代人的重要家庭成员,围绕其吃穿用度、生老病死,形成了一条千亿级的“经济”产业链。其中,需求刚性大、消费支出高的宠物医疗更占据了产业链中的核心地位,成了宠物消费中的“大头”。宠物医疗服务包括为宠物提供疾病诊疗和日常保健服务,是宠物行业中仅次于宠物食品的第二大细分行业。按疾病种类划分,宠物医