用Xgal和IPTG筛选细菌菌落（α互补）
实验方法原理 显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合，与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。实验材料 重组质粒转化的 E.coli试剂、试剂盒 IPTG 溶液X-gal 溶液仪器、耗材 LB 或 YT 琼脂板LB 或 YT 顶层琼脂恒温块木制牙签或接种环实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶剂IPTG 溶液（20%，m/V）X-gal 溶液（2%，m/V )2. 培养基含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板LB 或 YT 顶层琼脂3. 专用设备可调至 45℃ 的恒温块木制牙签或接种环4. 载体和菌种重组质粒转化的 E.coli。二、方法1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管，将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂；150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。2. 从加热块取出第一支试管，快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板）或 10000 ( 150 ......阅读全文
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料 N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒 储存液缓冲液仪器、耗材 蛋白胨培养基蛋白胨平板N-表达质粒组合文库培养板实验步骤 ―、材料与设备1. 通过比较 β-半乳糖苷酶表达
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。 实验材料 N-表达质粒 E.coi
大肠杆菌感受态细胞的几种制备方法
常态的细胞不能摄入外部溶液中的 DNA，，所以要转化质粒 DNA 进入大肠杆菌必须首先 制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl 等化学试剂法） 的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源 DNA 的载体分子通过的感受态细 胞(competent ce
体外DNA重组技术6
六、重组质粒的转化【实验目的】学习和掌握感受态细胞的制备方法和转化实验的基本操作。【实验原理】将重组质粒转入大肠杆菌的过程称为转化。转化所用的大肠杆菌需要用物理或化学方法特殊处理，使重组DNA分子容易进入细胞内，被处理后易于接纳DNA分子的细胞称作感受态细胞。下面介绍感受态细胞的制备。【实验试剂与器
研域细菌转化的操作步骤
细菌转化操作步骤 （1）事先将恒温水浴的温度调到42℃。 （2）从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10min。 （3） 加入5μl连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100ng），轻轻震荡后放置冰上20min。
DNA的转化实验
体外通过基因工程手段所构建的含目的基因的重组质粒，选用转化和筛选技术， 可获得含重组的阳性克隆。在此阳性克隆中，DNA可在生物体系中大量扩增，繁殖， 保存以及表达目的基因的产物，这是ＰＣＲ体外扩增DNA所不能替代的。配合DNA重组技术，所获得的，不同目的需要的阳性菌株已广泛应用于科研，医药生产和生物
利用α互补现象筛选带有插入片段的重组克隆的原理
现在使用的许多载体都带有一个E.coli DNA的短区段，其中含有β-半乳糖苷酶的-α肽基因（lacZ’）的调控序列和头146个氨基酸的编码信息。这个编码区中插入了一个MCS，它并不破坏读框，但是可使少数几个氨基酸插入到β-半乳糖苷酶的氨基端而不影响功能，这种载体适用于编码β-半乳糖苷酶C端部分序列
细菌的菌落特征
当细菌划线接种到固体平板培养基上后，在适宜的培养条件下。细菌便迅速生长繁殖。由于细菌细胞受固体培养基表面或深层的限制，故不能像在液体培养基中那样自由扩散，因此繁殖的菌体常聚集在一起，形成了肉眼可见的细菌集落，通常称之为菌落(colony)。由于平板划线的分散作用，单个菌落来源于细菌的一个细胞，生
细菌的菌落特征
当细菌划线接种到固体平板培养基上后，在适宜的培养条件下。细菌便迅速生长繁殖。由于细菌细胞受固体培养基表面或深层的限制，故不能像在液体培养基中那样自由扩散，因此繁殖的菌体常聚集在一起，形成了肉眼可见的细菌集落，通常称之为菌落（colony）。由于平板划线的分散作用，单个菌落来源于细菌的一个细胞，生长一
cDNA的筛选2
（三）免疫筛选制备Sepharose偶联细菌裂解液1.各用一个E.coli温度敏感溶源菌株（BTA 282（λgt11amp3）或BNN 97）单菌落接种于2×7.5ml培养基并于32℃生长过夜。2.过夜培养物用LB培养基稀释100倍，于32℃生长至OD600值为0.5。3.于45℃温育15min诱
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP -巯基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 连接缓冲液 T4DNA 连接酶 平末
果蝇白眼突变基因的克隆
【实验目的】掌握T克隆的原理和方法。了解质粒提取的原理和方法。【实验原理】外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA
质粒的转化及转化子的鉴定实验
实验方法原理 热激法：大肠杆菌在0 ℃ CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形，转化混合物中的DNA形成抗DNase的羟基－钙磷酸复合物粘附于细胞表面，经42 ℃短时间热冲击处理，促进细胞吸收DNA复合物，在丰富培养基上生长数小时后，球状细胞复原并分裂增殖。在被转化的细胞中，重组子基因得到表
分子克隆的常用载体
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
分子克隆常用载体
分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用
分子克隆的常用载体介绍
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
分子克隆常用载体（质粒、单链丝状噬菌体和噬粒）
DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获
为什么噬斑可以检出纯化噬菌体
M13KO7噬菌体感染TG1，不见噬菌斑噬菌体有烈性的和非烈性噬菌体.烈性的噬菌体侵染细菌后会快速造成细菌菌体裂解,培养液呈现清凉透明有破碎残渣.非裂解性的可以铺顶层琼脂板（可以查阅噬菌体滴度的测试实验方案）,培养后看顶层琼脂层中有没有噬菌斑,也可以在底层培养基中加些IPTG/X-gal若噬菌体带有
LB培养基的配制实验步骤
实验步骤1. LB 培养基Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g加水至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。2. LB 抗性筛选培养基待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至终浓度 50 µg/mL，即每毫升培
LB培养基的配制
实验概要 了解培养基的配制方法。实验步骤1. LB 培养基Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g加水至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。2. LB 抗性筛选培养基待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液
LB培养基的配制
实验步骤1. LB 培养基Tryptone10 gYeast Extract5 gNaCl10 g加水至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。2. LB 抗性筛选培养基待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至终浓度 50 μg/mL，即每毫升培
用菌落计数器检测空气中细菌的方法
用菌落计数器检测空气中细菌总数的方法 1 对象与方法 1.1 监测对象 电子阅览室2个、学生食堂3个、教室6个、学生宿舍10个(其中女生宿舍5个、男生宿舍5个)、学生实验室4个。 1.2 采样点设置 按照《室内空气质量标准》(GB/T18883
用菌落计数器检测空气中细菌的方法
用菌落计数器检测空气中细菌总数的方法 1 对象与方法 1.1 监测对象 电子阅览室2个、学生食堂3个、教室6个、学生宿舍10个(其中女生宿舍5个、男生宿舍5个)、学生实验室4个。 1.2 采样点设置 按照《室内空气质量标准》(GB/T188832002)[3]的要求进行。每个监测目标设置5
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
克隆化的PCR产物连入T载体
由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基（Holton and Graham 1991; Marchuk et al. 1991)。本实验来源「分子克
家蚕油蚕突变基因的克隆
【实验原理】外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2+ 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA聚合酶扩增的PCR产物，其DNA双链前后末端都有一个游离的A碱
克隆化的PCR产物连入T载体
实验方法原理 由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基（Holton and Graha
克隆化的PCR产物连入T载体
实验方法原理 由 Taq DNA 聚合酶 PCR 扩增产生的带 3' 突出端为 A 碱基的 DNA 片段能高效地克隆至 T 载体上，这种 T 载体有与 A 碱基互补的未配对 3' T 碱基（Holton and Graham 1991; Marchuk et al. 1991
细菌菌落的形态介绍
单个或少数细菌(或其他微生物的细胞、孢子)接种到同体培养基表面，如果条件适宜，就会形成以母细胞为中心的体形较大的子细胞群体。这种由单个或少量细胞在固体培养基表面繁殖形成的、肉眼可见的子细胞群体称为菌落。 菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形
细菌菌落的基本介绍
细菌菌落是指细菌在固体培养基上繁殖所形成的肉眼可见的菌块 [1] 。如果接种菌的密度十分稀薄，且规定一定的培养条件，由于菌的种类不同，它所形成的菌落的形状、大小、高低、位置、表面的粗细、边缘的形状、色调、透明度，以及菌块的质地、软硬、粘稠度和特殊培养基的着色等，也各不相同。因此，菌落是菌种鉴别上