用Xgal和IPTG筛选细菌菌落（α互补）
实验方法原理 显色底物 X-gal 可与细菌培养物混合，与溶化的顶层琼脂混合后铺于选择性培养板。实验材料 重组质粒转化的 E.coli试剂、试剂盒 IPTG 溶液X-gal 溶液仪器、耗材 LB 或 YT 琼脂板LB 或 YT 顶层琼脂恒温块木制牙签或接种环实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶剂IPTG 溶液（20%，m/V）X-gal 溶液（2%，m/V )2. 培养基含有适当抗菌素的 LB 或 YT 琼脂板LB 或 YT 顶层琼脂3. 专用设备可调至 45℃ 的恒温块木制牙签或接种环4. 载体和菌种重组质粒转化的 E.coli。二、方法1. 将溶化的顶层琼脂分装于 17X100 mm 试管，将试管置于 45℃ 的加热块槽内备用。90 mm 培养板用 3 ml 顶层琼脂；150 mm 培养板用 7 ml 顶层琼脂。2. 从加热块取出第一支试管，快速加入活菌含量不多于 3000 ( 90 mm 培养板）或 10000 ( 150 ......阅读全文
细菌菌落的基本介绍
细菌菌落是指细菌在固体培养基上繁殖所形成的肉眼可见的菌块 [1] 。如果接种菌的密度十分稀薄，且规定一定的培养条件，由于菌的种类不同，它所形成的菌落的形状、大小、高低、位置、表面的粗细、边缘的形状、色调、透明度，以及菌块的质地、软硬、粘稠度和特殊培养基的着色等，也各不相同。因此，菌落是菌种鉴别上
细菌菌落的形态介绍
单个或少数细菌(或其他微生物的细胞、孢子)接种到同体培养基表面，如果条件适宜，就会形成以母细胞为中心的体形较大的子细胞群体。这种由单个或少量细胞在固体培养基表面繁殖形成的、肉眼可见的子细胞群体称为菌落。 菌落形态包括菌落的大小、形状、边缘、光泽、质地、颜色和透明程度等。每一种细菌在一定条件下形
重组DNA的转化实验原理和操作步骤
实验目的制备出感受态细胞，把体外重组的DNA引入受体细胞，使受体菌具有新遗传性，并从中选择出转化子。实验原理感受态就是细菌吸收转化因子的生理状态，只有发展为感受态的细胞才能稳定摄取外来的DNA分子。pUC18的LacZ基因区域当有DNA片段插入时，LacZ基因失活，转化进入大肠杆菌并在含有IPTG和
细菌和放线菌的菌落各有什么特征
一个细菌或真菌（放线菌）繁殖后形成的肉眼可见的集合体，就叫菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致，边缘一般看不到细胞，与培养基不结合，颜色比较浅，菌落外观形态小而凸起或大而平坦，菌落透明或稍透明。细菌的细胞相互关系是单个分散或有一定的排
细菌和放线菌的菌落各有什么特征
一个细菌或真菌（放线菌）繁殖后形成的肉眼可见的集合体，就叫菌落。细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致，边缘一般看不到细胞，与培养基不结合，颜色比较浅，菌落外观形态小而凸起或大而平坦，菌落透明或稍透明。细菌的细胞相互关系是单个分散或有一定的排
制备克隆实验
试剂、试剂盒ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱水浴箱实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇（可选择）IPTG(100 mmol/L
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材 FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱 水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇（可选择）IPTG(100 mm
用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验
可以用于批量制备感受态细胞，其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受态细胞可以在 -70℃ 冻存。但随着冻存期的延长，转化效率会有所降低。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方
用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验
实验方法原理 可以用于批量制备感受态细胞，其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受态细胞可以在 -70℃ 冻存。但随着冻存期的延长，转
用氯化钙制备和转化感受态大肠杆菌实验
实验方法原理 可以用于批量制备感受态细胞，其转化效率可达到 5X106~2X107 个转化克隆/μg 超螺旋质粒 DNA。这个转化效率对于方便地进行质粒中克隆已经足够高了。用此方法制备的感受态细胞可以在 -70℃ 冻存。但随着冻存期的延长，转化效率会有所降低。实验材料 质粒 DNA试剂、试剂盒 标准
用菌落计数器检测空气中细菌总数的方法
1 对象与方法 1.1 监测对象 电子阅览室2个、学生食堂3个、教室6个、学生宿舍10个（其中女生宿舍5个、男生宿舍5个）、学生实验室4个。 1.2 采样点设置 按照《室内空气质量标准》（GB/T188832002）[3]的要求进行。每个监测目标设置5个采样点,即室内墙角对角线交点为一采样
重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
为什么用IPTG诱导蛋白没表达
质粒先测个序吧，这是基础，不然后面一切都白搭。我以前做个C端myc标签的真核表达载体，中间有移码了，但用anti-myc做Western仍能检测到微量的目大小的条带，而将移码缺失补上后，目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的 ribosomal frameshift，表达出了类似大小的
为什么用IPTG诱导蛋白没表达
质粒先测个序吧，这是基础，不然后面一切都白搭。我以前做个C端myc标签的真核表达载体，中间有移码了，但用anti-myc做Western仍能检测到微量的目大小的条带，而将移码缺失补上后，目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的 ribosomal frameshift，表达出了类似大小的
大肠杆菌感受态细胞的制备与重组质粒转化
一、目的1.了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握大肠杆菌感受态细胞制备方法。2.掌握质粒DNA 转化大肠杆菌的方法，了解转化的条件和利用半乳糖苷酶基因插入失活选择重组质粒DNA 的原理。二、原理（一）大肠杆菌感受态细胞制备的原理所谓感受态，是指细菌生长过程中的某一阶段的培养物，只有某一生长阶段中的
使用QPix400系统自动筛选颜色克隆——蓝白克隆筛选
在分子克隆过程中，筛选含有插入基因片段的重组质粒转化子是一项必不可少的工作。一种称为“蓝白斑筛选”的颜色报告基因可以根据克隆颜色快速区分出重组和非重组的克隆。尽管蓝白筛选提供了一个直观的辨别重组克隆的方法，但是，在克隆挑取过程中，过多的人工操作过程存在主观、速度慢、易出错等问题。 Molecular
噬菌体抗体库的菌落筛选法
实验概要本实验介绍了噬菌体抗体库的菌落筛选操作流程。实验步骤1. 将每轮筛选洗脱的噬菌体用来感染新鲜的XLIBlu菌，以10μl、20μl等不同量菌液涂于LB氨苄青霉素平皿，37℃ 4~5h。2. 事先将硝酸纤维素膜在5mmol/L的IPTG溶液中浸泡10min，在超净台中晾干后，铺在上述涂有细菌的
线虫unc22突变基因的克隆
实验概要本实验介绍了线虫unc-22突变基因的克隆实验原理和操作步骤。实验原理外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA 连接酶的作用下，有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中，将载体分子与外源DNA分子进行连接。Taq DNA
质粒载体对宿主生存并不是必需的
这点不同于线粒体，线粒体DNA也是环状双链分子，也有独立复制的调控，但线粒体的功能是细胞生存所必需的。线粒体是细胞的一部分，质粒也往往有其表型，其表现不是宿主生存所必需的，但也不妨碍宿主的生存。某些质粒携带的基因功能有利于宿主细胞的特定条件下生存，例如，细菌中许多天然的质粒带有抗药性基因，如编码
关于T载体克隆的显色反应介绍
LacZ基因是大肠杆菌乳糖操纵子中的一个基因，可以编码β—半乳糖核苷酶。β—半乳糖核苷酶是由4个亚基组成的四聚体，可催化乳糖的水解．用X-Gal为底物进行染色时，呈蓝色。 一些特定的质粒（比如pUC/pBS等），常带有β—半乳糖核苷酶的调控序列和β—半乳糖核苷酶N端146个氨基酸（α肽段）的编
细菌总数和菌落总数是怎么样测定的
菌落总数的测定,一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液,然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合,在一定温度下,培养一定时间后（一般为48小时）,记录每个平皿中形成的菌落数量,依据稀释倍数,计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数.基本操作一般包括：样品的稀释
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料 质粒菌株试剂、试剂盒 X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料质粒菌株试剂、试剂盒X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素（nucleolin）在内的多种 RNA-BP 的研究中。
Northwestern筛选蛋白表达文库实验
Northwestern 筛选蛋白表达文库的方法是通过构建 IPTG 可诱导的融合蛋白表达文库（融合蛋白的 N 端由载体序列编码，C 端由克隆到载体的 cDNA 文库编码），进而诱导融合蛋白表达，并将蛋白质固定于硝酸纤维素滤膜上，以标记的 RNA 探针进行筛选，最终获取能与靶 RNA 分子特异性结合
相互作用蛋白鉴定实验——相互作用蛋白捕获
实验方法原理实验要经过两次连续大量的酵母菌平板筛选过程。酵母菌含有 LexA 融合探针、报道基因和插入PJG4-5（见图19.1.6）的 GAL 启动子控制下的 cDNA 表达文库。最近，已有可供用于这个系统的文库。实验材料携带适当质粒组合的酵母菌试剂、试剂盒完全（CM）缺失成分液体培养基含有如下指
如何提高DNA片段的转化率
一、克隆分析原理克隆分析用于将DNA片段从一个载体（质粒、黏粒或噬菌体）转移到另一个载体上。它们通常用于构建表达系统，或是将DNA片段转移到特殊的载体上以制备杂交探针或是制备测序用的单链模板。典型的载体含有三个必要的元件：一个抗生素抗性标记、一个复制起点（以便选择转化了的大肠杆菌宿主）以及一个或多个
如何从菌落形态上鉴别细菌放线菌和霉菌
细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。酵母菌：为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。细菌，放线菌，霉菌，酵母的图片以及区别方式
如何从菌落形态上鉴别细菌放线菌和霉菌
细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑放线菌：背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。酵母菌：为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。细菌，放线菌，霉菌，酵母的图片以及区别方式
M13噬菌体载体的构建
在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的DNA。其最大的不足在于插入大的DNA片段后表现不稳定，在