利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理 大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料 质粒菌株试剂、试剂盒 X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β-巯基乙醇SDS氯仿仪器、耗材 检测指示板实验步骤 ―、材料与设备1. 质粒:pREV1,pLacZ-Rep,pACYC184。2. 菌株:WMI 和 WMI/F'。3. X-Gal 储液:30 mg/ml X-Gal 以二甲基甲酰胺溶解,-20℃ 保存。4. IPTG 储存液:1 mol/L IPTG 以水溶解,20℃ 保存。5. lacZ 缓冲液:60 mmol/L Na2HPO4,40 mmol/L NaH2PO4,10 mmol/L KCl,1 mmol/L MgSO4(pH 7.0)。6. ONPG 溶液:4 ......阅读全文
利用大肠杆菌系统检测RNA与RNA结合蛋白的相互作用实验
实验方法原理大肠杆菌中异源性的 RNA-BP 与靶 RNA 的结合会抑制靶基因的翻译。此方法已成功地应用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在内的多种 RNA-BP 的研究中。实验材料质粒菌株试剂、试剂盒X-Gal 储液IPTG 储存液lacZ 缓冲液ONPG 溶液碳酸钠溶液β
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天然RNA文库筛选与蛋白特异性结合的RNA序列实验
实验方法原理 细胞中,蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外运,翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段,RNA 结合蛋白可以通过与 m
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实验方法原理 细胞中,蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外运,翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段,RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。实验材料 mRNA寡核苷酸试剂、
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细胞中,蛋白质与 RNA 结合参与多种生理调控和发育过程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外运,翻译起始及降解等过程中都存在着蛋白质与 RNA 的直接相互作用。在发育的各个阶段,RNA 结合蛋白可以通过与 mRNA 的相互作用调控基因的表达。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
试剂、试剂盒 乙醇 β-巯基乙醇 仪器、耗材 转子-定子均化器或类似设备 Marligen Ra
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
试剂、试剂盒 乙醇β-巯基乙醇仪器、耗材 转子-定子均化器或类似设备 Marligen Rapid Total RNA System实验步骤 一、材料1.缓冲液、溶液和试剂乙醇,70%和100%β-巯基乙醇2.特殊设备转子-定子均化器或类似设备3.其他Marligen Rapid Total RNA
利用-Marligen-总-RNA-快速纯化系统纯化总-RNA-实验
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可从各种样品中提取 RNA,且产量和质量非常稳定。本实验来源于 PCR 实验指南(第二版),作者:种康,瞿礼嘉。试剂、试剂盒乙醇β-巯基乙醇仪器、耗材转子-定子均化器或类似设备Marligen Rap
抑制细菌转录终止检测技术筛选RNA结合蛋白实验
实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。 实验材料 N-表达质粒 E.coi
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一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒储
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实验方法原理 一种通过筛选重组 cDNA 文库研究多肽与 RNA 相互作用的细菌抗转录终止检测系统。实验材料 N-表达质粒E.coil N567 感受态细菌试剂、试剂盒 储存液缓冲液仪器、耗材 蛋白胨培养基蛋白胨平板N-表达质粒组合文库培养板实验步骤 ―、材料与设备1. 通过比较 β-半乳糖苷酶表达
环状RNA结合功能蛋白
环状RNA作为研究持续火热的明星分子,不同于对其丰富的表达谱研究,环状RNA功能机制研究还仅仅处在起步阶段。环状RNA研究多为miRNA海绵机制,部分circRNA可竞争性结合miRNA,解除miRNA对靶基因的抑制作用,上调靶基因的表达。其实,环状RNA可以通过结合不同种类的功能蛋白,分别在转录前
诱骗RNA结合蛋白不与癌细胞中的天然RNA分子结合
科学家也开始变得“狡猾”,开始用欺骗来对抗癌症。希伯莱大学的研究人员发明了一种诱饵,可以阻止癌症用于转移的RNA结合蛋白。 近年来,RNA结合蛋白在肿瘤生长中起着重要作用已经成为不争的事实。这些蛋白在所有细胞中都很活跃,尤其是在癌细胞中,它们与RNA分子结合,加速癌细胞的生长。不幸的是,目前还
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用实验
实验方法原理 酵母三杂交系统(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白质与 RNA 间的相互作用。在酵母三杂交系统中,RNA 蛋白质相互作用导致报道基因的转录,可以通过细胞生长、克隆颜色或特异的酶活性检测蛋白质与 RNA 的相互作用。试剂、试剂盒 YPD 和 SD 培养基鲑
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推动癌症发展的RNA结合蛋白
最近,一项关于白血病细胞基因表达的研究,发现了一种RNA结合蛋白,在推动癌症的发展过程中起着重要的作用。该蛋白通常活跃在胎儿组织,在成年人体内是关闭的,但它在一些癌细胞中被再度活化。这种表达模式使它成为抗癌药物的一个有吸引力的靶标,因为阻断它的活动,不太可能造成严重的副作用。 这项新的研究,发
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验 实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源
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实验方法原理噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂TEN
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液,用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀,每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚,充分混匀,于 60
酵母三杂交系统检测和分析RNA蛋白相互作用
一、引入 RNA 质粒和 cDNA 文库通常首先将 RNA 质粒转化到宿主菌株-L40coat 内,得到包含 RNA 质粒的细胞,再转化一个融合了转录激活区的 cDNA 文库(杂交 RNA 对宿主细胞几乎没有毒性,与用于双杂交筛选的一些杂交蛋白
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验(三)
4. 免疫印迹检测外源蛋白的展示情况pDTSPLAY-B 空载体生成的噬菌体表面不含外源基因,仅有带有 6 个组氨酸标签和 Myc 标签的锚定蛋白(基因 Ⅲ 编码),此蛋白 SDS-PAGE 中的条带在 65 kDa 的位置(实际 Mr 为 45 kDa)。pDISPLAY-B 载体中插入外
噬菌体展示技术研究RNA结合蛋白实验(一)
实验方法原理 噬菌体展示技术是将外源基因与噬菌体的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌体颗粒的表面就会表达相应的外源蛋白,即外源基因编码的蛋白被展示在噬菌体颗粒的表面。实验材料 载体tRNA抗体寡核苷酸试剂、试剂盒 抗生素储存液BCIP葡萄糖储存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制剂RNase 抑制剂
RIP技术(RNA结合蛋白免疫沉淀)
RIP技术(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA结合蛋白免疫沉淀),是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术,是了解转录后调控网络动态过程的有力工具,能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
探索RNA与蛋白的相互作用,你需要这两种检测
从DNA到蛋白质,这是一个相当复杂的过程。转录DNA的代码,这只是万里长征的第一步。随后,大量蛋白质编辑RNA,带领它从细胞核到细胞质,控制其稳定性,并指导其翻译。 据印第安纳大学的副教授Sarath Chandra Janga介绍,数百个RNA结合蛋白(RBP)参与了这个过程。Janga正在
健康所在RNA结合蛋白调节信使RNA翻译研究中取得新进展
近日,国际学术期刊Molecular and Cellular Biology在线发表了中科院上海生命科学研究院/上海交通大学医学院健康所核酸与分子医学研究组的最新研究进展:AU-Rich Element-Dependent Translation Repression Requires the
液相法筛选cDNA表达文库中RNA结合蛋白实验
将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法是筛选 RNA 结合蛋白研究中最常用的技术。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法原理将 cDNA 文库表达的蛋白固定于硝酸纤维素膜或尼龙膜上,然后用标记的 RNA 对其进行筛选的方法
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RNA分离与分析实验
暂未评分点评实验,有机会获丁当奖励 +收藏 1人收藏RNA分离与分析实验标签: RNA