体外转录合成单链RNA探针
实验方法原理 制备特异性的单链 RNA 探针不仅比 DNA 探针更容易，在杂交反应中一般也比具相同比活性的 DNA 探针产生更强的信号，这可能是由于含有 RNA 的杂合链固有的更高稳定性的缘故（Casey and Davidson 1977)。虽然 DNA 探针仍普遍地应用于 Northern 和 Southern 杂交，但当分析哺乳动物基因的转录时，放射性标记的 RNA 目前是首选探针。由于 RNA 酶 A 既耐用又容易控制，可用 RNA 酶 A 来消化 RNA-RNA 杂合体，而不必用特异性 S1 核酸酶来消化 DNA-RNA 杂合分子，RNA 酶 A 可在较宽的浓度范围内使用而不影响实验结果（Zirmetal. 1983; Mehonetal. 1984)。实验材料 限制性内切核酸酶RNA 聚合酶胰腺 DNA 酶Ⅰ模板 DNA试剂、试剂盒 乙酸铵牛血清白蛋白DTT乙醇酚氯仿胎盘......阅读全文
RNA探针的概念
RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于RNA是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针，这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。
RNA探针技术简介
许多载体如pBluescript, pGEM等均带有来自噬菌体SP6或E.coli噬菌体T7或T3的启动子,它们能特异性地被各自噬菌体编码的依赖于DNA的RNA聚合酶所识别,合成特异性的RNA。在反应体系中若加入经标记的NTP，则可合成RNA探针。RNA探针一般都是单链,它具有单链DNA探针的优点,
依赖核酸序列的扩增技术简述
该技术的检测反应有赖于AMV逆转录酶、噬菌体T7RNA多聚酶、核糖核酸酶H、两种特别设计的特异性寡核苷酸引物和分子信标探针共同协作而完成。 NASBA全称是nucleic acid sequence-based amplification，即依赖核酸序列的扩增技术。 依赖核酸序列的扩增技术，是
分子杂交的分类
分子杂交基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。下面分别介绍这几种探针。DNA探针DNA探针是最常用的核酸探针，指长度在几百碱基对以上的双链DN
核酸分子杂交法介绍
这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下（适宜的温度及离子强度等）可按碱基互补原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记，以利于杂交信号的检测。 所谓
简述DNA和RNA的基本组成单位
DNA的基本组成单位有：腺嘌呤脱氧核糖核苷酸（A），鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸（G），胞嘧啶脱氧核糖核苷酸（C），胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（T）。RNA的基本组成单位有：腺嘌呤脱氧核糖核苷酸（A），鸟嘌呤脱氧核糖核苷酸（G），胞嘧啶脱氧核糖核苷酸（C），尿腺嘧啶脱氧核糖核苷酸（U）。在碱基互补配对时，胸腺嘧
武汉植物园等长链非编码RNA调控基因转录研究获进展
长链非编码RNA(long noncoding RNA, lncRNA)一般指长度大于200个核苷酸的非编码RNA，目前已在多种生物中发现了大量lncRNA，然而只有少数lncRNA的精细作用机理被阐明。 中国科学院武汉植物园汪志伟博士在植物种群遗传学科组王艇研究员支持和中国科学院留学
RNA探针合成方法和合成效率检测方法介绍
相关专题制备RNA探针在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度m
3.1.2－RNA－大量转录合成
RNA 标准转录体系的一般回收率为 lugRNA/ug 质粒 DNA, 使用下面的方法，可以提高回收率至 5〜l0ug RNA/ug 质粒 DNA。大量制备 RNA 可以用于体外翻译。实验材料模板 DNA 或质粒试剂、试剂盒TETE 饱和酚氯仿异内醇3mol LNaAc无水乙醇5X 转录缓冲液lOO
RNA转录的技术特点
转录时，细胞通过碱基互补的原则来生成一条带有互补碱基的mRNA，通过它携带密码子到核糖体中可以实现蛋白质的合成。与DNA的复制相比，转录有很多相同或相似之处，亦有其自己的特点。转录中，一个基因会被读取并复制为mRNA。就是说，以特定的DNA片段作为模板，以DNA依赖的RNA聚合酶作为催化剂，合成前体
信使RNA转录的调控
一、遗传信息的表达有时序调控和适应调控，转录水平的调控是关键环节，因为这是表达的第一步。转录调控主要发生在起始和终止阶段。 二、操纵子是细菌基因表达和调控的单位，有正调节和负调节因子。阻遏蛋白的作用属于负调控。环腺苷酸通过其受体蛋白（CRP）促进转录，可促进许多诱导酶的合成。操纵子可构成综合性
3.1.1－RNA－标准转录反应
利用 DNA 聚合酶 I 的大片段（Klenow 酶）的 3＇— 5＇外切酶活性将 3＇黏性末端转化成平末端。具体方法是在体外转录体系尚未加入核苷酸和 RNA 聚合酶时，加入 Klenoow 片段 (终浓度为 5U/ug)，于 22℃ 孵育 15mim, 然后再加入核苷酸混合物和RNA 聚合酶实验材
关于体外转录的基本介绍
转录通常发生在生物体内，如果我们将含有RNA转录酶、NTP等条件，在体外无细胞系统中，用DNA作为模板，模仿体内转录过程生成RNA，这样的技术则能够控制转录的基因、转录的过程和转录后RNA的用途，该技术被称为体外转录。
体外转录siRNAs的技术特点
以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的
体外转录的概念和过程
转录通常发生在生物体内，如果我们将含有RNA转录酶、NTP等条件，在体外无细胞系统中，用DNA作为模板，模仿体内转录过程生成RNA，这样的技术则能够控制转录的基因、转录的过程和转录后RNA的用途，该技术被称为体外转录。
RNA探针的合成方法和合成效率检测
在RNA的杂交检测实验中，应用标记的RNA 探针将获得高灵敏度的杂交检测结果，与DNA 探针相比，检测灵敏度提高10-100倍。因为对于不同的杂交体类型来说，RNA-RNA杂交体的结合强度高于RNA-DNA和DNA-DNA杂交体。对于通过Northern blots检测低浓度mRNA，以及原
分子杂交技术（一）
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
分子杂交技术（一）
一、概述 前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交
RNA探针的应用介绍
这类RNA探针主要用于研究目的，而不是用于检测。例如，在筛选逆转录病毒人类免疫缺陷病毒（HIV）的基因组DNA克隆时，因无DNA探针可利用，就利用HIV的全套标记mRNA作为探针，成功地筛选到多株HIV基因组DNA克隆。又如进行中的转录分析（nuclear run on transcrip－tion
常见RNA探针及其特点
常见RNA探针及其特点：RNA探针是指带有标记的能与组织内相对应的核苷酸序列互补结合的一段单链cDNA或cRNA分子。根据在RNA杂交中所使用的探针依其来源可分为三种：即特异性cDNA、cRNA探针和人工合成寡核苷酸探针。 cRNA探针：是以cDNA为模板，通过体外转录而获得的。因为它是一种单链探针
分子杂交
一、杂交通过碱基对之间非共价键（主要是氢键）的形成即出现稳定的双链区，这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的
RNA探针的基本信息介绍
RNA探针是一类很有前途的核酸探针，由于RNA是单链分子，所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针，这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的，标记效率往往不高，且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的，而不是用于检测。例如，
双链DNA探针标记法
分子生物研究中，最常用的探针即为双链DNA探针，它广泛应用于基因的鉴定、临床诊断等方面。 双链DNA探针的合成方法主要有下列两种:切口平移法和随机引物合成法。 1.切口平移法(nick translation) 当双链DNA分子的一条链上产生切口时,E.coli DNA聚合酶Ⅰ就可将核苷酸连
真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录的区别
真核生物RNA的转录与原核生物RNA的转录过程在总体上基本相同，但是，其过程要复杂得多，主要有以下几点不同： 1、真核生物RNA的转录有的是在细胞核内进行的，而蛋白质的合成则是在细胞质内进行的。且真核生物线粒体和叶绿体的遗传信息系统被称为真核细胞的第二遗传信息系统，或核外基因及其表达体系。这是
新型冠状病毒核酸检测与PCR技术应用
首先需要采集患者的病毒样本，而由于采集的临床标本中病毒含量往往是非常少的，提取分离出的遗传物质更加少，需要扩增到可检测数量，才能做出诊断，即需要做PCR反应，它叫作聚合酶链式反应（PolymeraseChain Reaction），实际上就是一个基因的扩增反应。由于2019新型冠状病毒为RNA病毒
RNA的转录与逆转录相关介绍
转录是以DNA为模板合成RNA的过程，经过转录DNA分子中的贮存信息传递到RNA分子中，再由mRNA做为模板合成蛋白质分子。逆转录也是从RNA的一个特定位置开始的，以RNA分子中的一条链为模板，在逆转录酶的作用下，以四种脱氧核苷酸为原料，合成方向仍是5'→3'，完成cDNA的合成。大
体外转录合成siRNAs的方法特点
以DNA Oligo为模版，通过体外转录合成siRNAs，成本相对化学合成法而言比较低，而且能够比化学合成法更快的得到siRNAs。不足之处是实验的规模受到限制，虽然一次体外转录合成能提供足够做数百次转染的siRNAs，但是反应规模和量始终有一定的限制。而且和化学合成相比，还是需要占用研究人员相当的
关于体外转录的操作步骤介绍
1. 提取cDNA质粒； 2. 线性化质粒：（利用单一的酶切位点线性化有利于转录） 3. 纯化质粒：（尽量避免RNase污染） ① 加等体积的Tris-苯酚：氯仿（1:1）到100μL限制内切酶消化体系，涡旋振荡20s, 13000g离心5min； ②上清转移，加入2倍体积无水乙醇和1/10
体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
实验材料 质粒 DNA 模板 试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水 [35S] 标记的甲硫氧酸 TN
体外转录与体外翻译耦联的快速反应系统
实验材料 质粒 DNA 模板试剂、试剂盒 无核酸酶污染的水 [35S] 标记的甲硫氧酸 TNT 快速超级混合液 T7TNTPCR 增强液仪器、耗材 一 70°C 冰箱 冰浴 微量移液器 离心机 水浴槽 聚丙烯酰胺凝胶电泳装置实验步骤 ―、材料与设备1) 无核酸酶污染的水。2)[35S] 标记的甲硫氧