用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的RNA
实验方法原理 在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。实验材料 细胞和组织试剂、试剂盒 氯仿乙醇异丙醇液氮苯酚磷酸缓冲盐溶液 PBS乙酸钠溶液 D（变性液）仪器、耗材 比色杯组织匀浆器研棒和研钵聚丙烯管水浴实验步骤 一、材料1. 溶液与缓冲液氯仿：异戊醇（49:1，V/V）乙醇异丙醇液氮苯酚磷酸缓冲盐溶液 PBS（仅供悬浮细胞和单层细胞用）乙酸钠（2 mol/L，pH 4.0）溶液 D（变性液）去离子甲酰胺（可选）细胞和组织2. 离心与转子Sorvall SS-34 (或与之相当的转子）；Sorvall H1000 (或与之相当的转子）3. 专用设备测 260 nm 吸光率的比色杯组织匀浆器用 DEPC 水处理过、预冷的研棒和研钵聚丙烯管65℃ 水浴二、方法1. 选取从组织或细胞中提取 RNA 的适宜方法(1) 组织① 分离......阅读全文
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
实验方法原理 在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。实验材料 细胞和组织试剂、试剂盒 氯仿乙醇异丙醇液氮苯酚磷酸缓冲盐溶液 PBS乙酸钠溶液 D（变性液）仪器、耗材 比色杯组织匀浆器研棒和研钵
用酸性酚硫氰酸胍氯仿提取法纯化组织和细胞中的－RNA
实验方法原理 在提取过程的第一阶段细胞的 RNA 酶应尽快灭活。一旦内源的 RNA 酶被破坏，RNA 受损的可能就大大降低，而纯化的过程就可以按合适的速度进行。 实验材料
RNA的分离与纯化
包括Northern杂交在内的许多分子生物学实验均是以RNA为材料，mRNA的制备也需要一定质量的总RNA样品，RNA的数量、纯度与完整性将直接影响这些实验的结果。RNA中rRNA的数量最多，占总量的80%～85%；tRNA及核内小分子RNA占15%～20%；mRNA仅占1%～5%。由于各种rRNA
基因扩增检验标本的处理保存及核酸提取方法(3)
RN A提取方法 下面以异硫氰酸胍结合氯仿-酚提取法介绍RNA的提取。 异硫氰酸胍是一种强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎， 核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。 RNase虽可耐受多种处理，（如煮沸）而不失活，但却会被4mol/L异硫
组织和细胞RNA的制备——（异硫氰酸胍法）
[试剂主要]1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4
异硫氰酸胍酚法植物组织总RNA的制备
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较适合纯化mR
植物组织总RNA的制备：异硫氰酸胍—酚法
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提RNA纯度高完整性好较适合纯化mRNA，
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
这种方法源自于对 Chirgwin 等（1979) 所拟方案的修改。对 Chirgwin 等所规定的试剂，许多试剂盒中常用，且用于分离和纯化 RNA 的试剂也是常见的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料细胞和组织试剂、试剂盒氯仿氯化铯溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇异硫
动物RNA提取实验原理
RNA提取技术不仅是分子生物学技术的重要组成部分，也是功能基因组 学科研技术的重要基础。从RNA水平研究生物体内基因的调控机制，已成为分子生物学研究的一个重要手段。对某一生物或组织进行性状研究，首先要获得该性状基因，从组织细胞中分离完整的RNA对于分子克隆 和基因表达分析等实验是至关
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
实验材料 细胞和组织 试剂、试剂盒 氯仿 氯化铯溶液 二硫苏糖醇 EDTA
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
实验材料 细胞和组织试剂、试剂盒 氯仿氯化铯溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇异硫氰酸胍裂解缓冲液异丙醇N-月桂酰肌氨酸氯化锂液氮β-巯基乙醇苯酚仪器、耗材 离心机和转子研钵和杵超速离心管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿氯化铯溶液，5.7mol/L(5.7mol/L 氯化铯，25 mmol/L
2.2.2－从富含多糖的植物组织中提取和纯化－RNA
实验方法原理硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时，可产生无 RNase 的环境□组织抽提后，以中等转速离心匀浆液，以除去小溶性多搪。用苯酚：氯仿将上清液抽提出，RNA 位于水相，DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来，然后用氯化锂选择性地将
从富含多糖的植物组织中提取和纯化－RNA
实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时，可产生无 RNase 的环境□组织抽提后，以中等转速离心匀浆液，以除去小溶性多搪。用苯酚：氯仿将上清液抽提出，RNA 位于水相，DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面
从富含多糖的植物组织中提取和纯化－RNA
实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时，可产生无 RNase 的环境□组织抽提后，以中等转速离心匀浆液，以除去小溶性多搪。用苯酚：氯仿将上清液抽提出，RNA 位于水相，DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来，然后用氯化锂选
2.1.7－从新鲜和冰冻血液中提取RNA
全血中含有有核白细胞，因此从血液中抽提 RNA 比较方便，但是红细胞富含核糖核酸酶，所以从血液中分离 RNA 奋其持殊的难度。因此若能先将有核白细胞与红细胞分离开来，从血液中抽提 RNA 更易成功。下述方法是酸-酚. 胍法•硫氰酸胍吋裂解细胞，并有效地灭活核糖核酸酶。试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液淋巴细胞
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方
动物组织细胞总RNA的提取（异硫氰酸胍法和TRIzol法）1
一、实验原理RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形
动物组织细胞总RNA的提取（异硫氰酸胍法和TRIzol法）2
（二）TRIzol试剂提取RNA1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的Trizol液 1ml 于玻璃匀浆器中，在冰浴中迅速匀浆15～30s，以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一1.5ml Ep管中，于室温下静置5min。2.加入200μl氯仿，剧烈振摇15s混匀后，室温静
分离纯化总RNA
1） 用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取纯化组织和细胞中的RNA1. 选取从组织细胞或细胞中提取RNA的适宜方法组织a. 分离组织并立即置于液氮中。b. 将约100 mg冰冻组织含液氮的研钵中，用研棒研磨。研磨过程中可加入液氮使组织保持冰冻状态。c.
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA
试剂、试剂盒 R N A 消化液 β-巯基乙醇 蛋白酶 K（20 mg ml) 水平衡苯酚 氯仿 糖原 TE
从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA
试剂、试剂盒 R N A 消化液 β-巯基乙醇 蛋白酶 K（20 mg ml) 水平衡苯酚 氯仿 糖原 TE 缓冲液异丙醇无水乙醇乙醇 DEPC 水实验步骤 一 材料与设备1）RNA 消化液：每 100ml 包含 40ml 4mol/L 硫氰酸胍，3mllmol/L Tris-HC(PH7.6),2
用异硫氰酸胍(guanidinium－isothiocyanate)和有机溶剂提取RNA
收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,β-巯基乙醇0.1mol /L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）1
2.1.8－从福尔马林固定、石蜡包埋的组织中提取RNA
从病理科取来的经福尔马林固定、石蜡包埋的组织可用于RNA 表达分析.常规固定和石蜡包埋后，从活组织、手术、尸体组织中分离出来的 RNA 并不完全降解.并且即使在切除后未立即固定,富含 RNase 的器宫如胰腺内仍存在大约 100 个碱基或更长的 RNA碎片。下面介绍一种从 6〜8 um 组织切片中提
总RNA的提取和纯化的操作规程
完整RNA 的提取和纯化，是进行RNA 方面的研究工作，如Nothern杂交、mRNA 分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）
动物组织/细胞总RNA的制备及检测
实验目的：使学生掌握采用Trizol抽提法从动物新鲜组织或细胞制备总RNA的实验技术，以及用紫外分光光度法检测RNA的纯度及定量、用琼脂糖电泳法检测RNA的完整性及质量。实验原理：Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂，适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA。Trizol 试剂是由苯酚
总RNA的提取
完整RNA的提取和纯化,是进行RNA方面的研究工作,如Nothern杂交、mRNA分离、RT-PCR、定量PCR、cDNA合成及体外翻译等的前提。所有ＲＮＡ的提取过程中都有五个关键点，即１）：样品细胞或组织的有效破碎；２），有效地使核蛋白复合体变性；３），对内源ＲＮＡ酶的有效抑制；４）有效地将ＲＮ
总RNA提取实验——试剂盒快速提取法
总RNA提取可以：（1）获得高纯度、高质量的总RNA；（2）可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。实验方法原理一些公司推出的总RNA 提取试剂盒，可以用来制备高质量的可用于建库的RNA 。该总RNA 纯化系统采用两种著名的RN
植物总RNA的分离
实验概要认识真核生物RNA的组成及分离的原理；学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法。实验原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一个典型的真核细胞约含有10-5~10-6mg的RNA，其中80-85%为rRNA，其余15-20%主要由各种低分子量RNA组成（如tRNA、核内小分子