组织和细胞RNA的制备——（异硫氰酸胍法）
[试剂主要]1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4.0。4．异丙醇5．无水乙醇、70%乙醇6．酚：氯仿：异戊醇（25：24：1）7．DEPC H2O：100ml ddH2O中，加入DEPC 0.1ml，弃分振荡，37℃孵育过夜。15磅高压灭茵，4℃保存备用。 [操作步骤 ] 1．样品处理： （１）培养细胞：收集细胞，离心，500g×5min。对于贴壁培养细胞，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化后，用PBS重悬细胞并转移至10ml离心管中；悬浮培养细胞可直接转移离心管；离心：500g×5min；PBS洗涤2次。弃上清，置冰浴。加预冷变性液2 ml，充分摇动，使细胞裂解完......阅读全文
组织和细胞RNA的制备——（异硫氰酸胍法）
[试剂主要]1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助溶。4℃保存备用。3．2 M乙酸钠：pH 4
异硫氰酸胍酚法植物组织总RNA的制备
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提 RNA纯度高完整性好较适合纯化mR
植物组织总RNA的制备：异硫氰酸胍—酚法
异硫氰酸胍—酚法提取RNA的原理如下：GIT与β－巯基乙醇共同作用抑制RNase的活性；GIT与 十二烷基肌氨酸钠 （Sarcosyl）作用使蛋白质变性，从而释放RNA；酸性条件下DNA极少发生解离，同蛋白质一起变性被离心下来，RNA则溶于上清中。该法所提RNA纯度高完整性好较适合纯化mRNA，
动物组织细胞总RNA的提取（异硫氰酸胍法和TRIzol法）2
（二）TRIzol试剂提取RNA1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的Trizol液 1ml 于玻璃匀浆器中，在冰浴中迅速匀浆15～30s，以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一1.5ml Ep管中，于室温下静置5min。2.加入200μl氯仿，剧烈振摇15s混匀后，室温静
动物组织细胞总RNA的提取（异硫氰酸胍法和TRIzol法）1
一、实验原理RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形
组织和细胞RNA的制备
一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助
TRIzol法提取组织和细胞总RNA
（一）试剂准备1 ． TRIzol 试剂。2 ．氯仿3 ．异丙醇4 ． 75% 乙醇（ DEPC H2O 配制）5 ． DEPC H2O （二）操作步骤 1 ． 样品处理： （１）培养细胞：收获细胞 1-5×10 7 ，移入 1.5ml 离心管中，加入 1ml Trizol ，混匀，室温
动物组织/细胞总RNA的制备及检测
实验目的：使学生掌握采用Trizol抽提法从动物新鲜组织或细胞制备总RNA的实验技术，以及用紫外分光光度法检测RNA的纯度及定量、用琼脂糖电泳法检测RNA的完整性及质量。实验原理：Trizol是一种新型的总RNA即用型制备试剂，适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA。Trizol 试剂是由苯酚
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
实验方法原理 同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA
用一步法从细胞和组织中同时制备DNA、RNA和蛋白质
实验方法原理 同 Chomczynski 和 Sacchi 两人于 1987 年报道的 RNA 快速提取法一样，这种方法包括用含异硫氰酸胍和酚的一种单相液来裂解细胞。加入氯仿产生了第二相（有机相），DNA 和蛋白质在有机相中被抽提，RNA 则被留在上层水相中。实验材料 源细胞或组织试剂、试剂盒 氯仿
RNA提取心得（组织RNA提取和培养细胞的RNA提取）
一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80℃或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4℃，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
实验材料 细胞和组织 试剂、试剂盒 氯仿 氯化铯溶液 二硫苏糖醇 EDTA
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
实验材料 细胞和组织试剂、试剂盒 氯仿氯化铯溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇异硫氰酸胍裂解缓冲液异丙醇N-月桂酰肌氨酸氯化锂液氮β-巯基乙醇苯酚仪器、耗材 离心机和转子研钵和杵超速离心管实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿氯化铯溶液，5.7mol/L(5.7mol/L 氯化铯，25 mmol/L
异硫氰酸胍/氯化铯超速离心法制备－RNA－实验
这种方法源自于对 Chirgwin 等（1979) 所拟方案的修改。对 Chirgwin 等所规定的试剂，许多试剂盒中常用，且用于分离和纯化 RNA 的试剂也是常见的。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料细胞和组织试剂、试剂盒氯仿氯化铯溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇异硫
用异硫氰酸胍(guanidinium－isothiocyanate)和有机溶剂提取RNA
收集细胞，离心5000r/min ，5分钟，弃上清，加入异硫氰酸胍变性液（异硫氰酸胍4mol/L；柠檬酸钠25mmol/L，Sarkosy10.5%,β-巯基乙醇0.1mol /L）500ml，混匀，振荡10秒，加2 mol/L醋酸钠50ml，水饱和酚500m l和氯仿/异戊醇（49：1）1
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定2
试剂和器材试剂1.DNA标准溶液(须经定磷确定其纯度)：取小牛胸腺DNA钠盐以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成200 µg/mL的溶液。2.样品待测液：准确称取DNA干燥制品以0.01mol/L氢氯化钠溶液配成100 µg/mL左右的溶液。在测定RNA制品中的DNA含量时，要求RNA制品的每mL待
动物肝脏RNA的制备(苯酚法)和纯度测定1
原理细胞内大部分RNA 均与蛋白质结合在一起，以核蛋白的形式存在。因此分离RNA时必须使RNA与蛋白质解离，并除去蛋白质。除去蛋白质的方法主要有：（1）用氯仿－辛醇混合液剧烈振荡，使蛋白质变性。（2）在冷的2mol/L盐酸胍溶液中沉淀RNA，大部分蛋白质仍处于溶解状态。（3）以去污剂如十二烷基硫
酵母蛋白质和－RNA－的制备（稀碱法）
实验概要本实验介绍了从酵母中分离制备蛋白质和 RNA 的原理和方法。实验原理酵母细胞富含蛋白质和核酸。用稀碱液（0.2% 的氢氧化钠）处理酵母使细胞裂解，离心收集上清液，得到酵母核蛋白抽提液。用盐酸调节抽提液 pH 至 3.0 （核蛋白的等电点），核蛋白溶解度下降大量沉出，离心收集沉淀物为酵母蛋白质
组织/细胞RNA快速提取
操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）提示： 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇! 操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。1. 组织培养细胞a. 收
动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取
一、材料 水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备 研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高
CsCl法从组织中提取RNA
试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液 乙酸钠 酚 氯仿
CsCl法从组织中提取RNA
试剂、试剂盒 液氮 组织胍溶液 十二烷基肌氨酸钠 CsCl 组织重悬液 乙酸钠酚 氯仿 异戊醇 异戊醇 无水乙醇仪器、耗材 组织捣碎机 离心机实验步骤 一 材料与设备1）液氮2）组织胍溶液：590.8 g 异硫氰酸胍溶于 400ulDEPC 处理的水中，加入 25 mmol/LTris-Cl(p
植物RNA的制备实验——酚/SDS法
由于RNA的种类来源很多，因而提取制备方法各异，一般有苯酚法，去污剂法和盐酸胍法，其中苯酚法实验室最常用。组织匀浆后用苯酚处理离心，RNA即溶于上层被酚饱和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮状沉淀析出。此法较好除去DNA和蛋白质，且获得生物活性的RNA。实验材料RNA试剂、试剂盒TELi
细胞/组织裂解液的制备
溶液准备 2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚蓝 , 2%DTT PBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）1
从细胞中分离RNA的纯度于完整性对于许多分子生物学实验至关重要。如Northern印迹与杂交分析、寡聚（dT）纤维素选择分离 mRNA，cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上决定于RNA的质量。RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染。快速一步法提取总RNA组织及有核细胞在匀浆过程中
真核细胞总RNA的制备（Total－RNA－Isolation）2
Total RNA Isolation Guanidine-based isolation Objective: To obtain total RNA from zebrafish embryos. Required Materials Denaturing Solution
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品 试剂、试剂盒 甲酰胺 消化缓冲液 乙醇 肝糖
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
实验材料 石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒 甲酰胺消化缓冲液乙醇肝糖异丙醇苯酚 氯仿蛋白酶 KTrizol二甲苯仪器、耗材 微量离心管恒温箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂去离子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水消化缓冲液（lmol/L 异硫氰酸胍,25 mmol/Lβ-巯基乙醇
从石蜡包埋固定的组织中制备－RNA－实验
该方案是由 Godfrey 等改进 Fisher 的方案发表的。此前已有从固定组织中纯化 RNA 的方案发表。Ambion 和 Roche 发明了从石蜡包埋的组织中纯化 RNA 的商品化试剂盒。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。实验材料石蜡包埋的组织样品试剂、试剂盒甲酰胺