测序反应实验
试剂、试剂盒 循环测序试剂盒引物和模板仪器、耗材 薄壁 PCR 管热循环仪GeneAmpPCRSystem9700 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 或其他循环测序试剂盒2. 核酸和寡核苷酸引物和模板3. 特殊设备DNA 扩增用薄壁 PCR 管热循环仪,GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 仪或相当产品二、方法1. 将适量(如上所述)的引物和模板加入到 PCR 管中。2. 每管加入 4ul Terminator Ready Reaction mix。这是说明书中推荐用董的一半,这一用董已经足够,而且节省试剂。3. 用去离子水补至 20ul, 混匀,稍离心。4. 在 GeneAmp PCR System 9700(Applied Biosyste......阅读全文
溶血反应实验
免疫血清与其相应的抗原细胞,血球、细菌及其组织细胞相遇,并在补体的参与下可出现溶细胞反应。依抗原、抗体的种类不同可有溶血反应、溶菌反应等。实验方法原理溶菌反应只在某些细菌中出现(如霍乱弧菌)。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原(红血球)和抗体(溶血素)进行特异性的结合,并吸
溶血反应实验
实验方法原理 溶菌反应只在某些细菌中出现(如霍乱弧菌)。应用溶血反应是补体结合反应中不可少的因素。溶血反应是由于抗原(红血球)和抗体(溶血素)进行特异性的结合,并吸着了补体,而使红血球在补体的作用下被溶解,于是产生了溶血现象。实验材料 绵羊红血球试剂、试剂盒 溶血素豚鼠血清生理盐水仪器、耗材 小试管
上样并进行-DNA-测序实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液 0.5XTBE 和 或 1XTBE 凝胶 核酸和寡核苷酸 仪器、耗材
用循环测序法检测突变实验
实验材料血液或者其他来自待测个体的 DNA 材料试剂、试剂盒乙酸钠异丙醇TE 缓冲液分子质量标记物寡聚核苷酸测序引物多聚核苷酸激酶反应缓冲液多聚核苷酸激酶双脱氧核苷酸Taq DNA 聚合酶10 X 循环测序反应缓冲液矿物油终止液仪器、耗材热循环仪和管子实验步骤展开
PCR实验技术指南之产物测序
1. DNA 直接测序:指直接分析不经分离的PCR 扩增产物,如果各个位点上碱基序列都是一致的,则所得信号是确定的,否则,在那些有相异碱基的位点出现模糊信号, 如果模板在多数情况下被正确扩增,则少数的突变将被掩盖,这是结果显示的是模板的序列.但是,当扩增的前几轮即出现错误扩增并被后续的循环积累,这时
上样并进行-DNA-测序实验
试剂、试剂盒 缓冲液和溶液0.5XTBE 和 或 1XTBE凝胶核酸和寡核苷酸仪器、耗材 自动微量加液器牛头夹凝胶温度监测条巴斯德吸管带塑料涂层的金属板稳压电源解剖刀片鲨鱼齿梳注射器85°C 水浴和 100°C 烘箱实验步骤 材料缓冲液和溶液贮存液. 缓冲液和试剂的成分见附录 1。稀释贮存液到合适的
上样并进行-DNA-测序实验
DNA 序列可通过酶解或化学降解产生一系列成套的 DNA 片段,这些片段可以通过薄层变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分辨。一个典型的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳能够分辨出编码 15~400 个核苷酸长度的 DNA 序 列。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
试剂、试剂盒 ddNTP 延伸 终止混合物酶及其缓冲液AmpliTaq CS 或其他无外切酶活性的 DNA 聚合酶循环测序缓冲液热稳定的 DNA 聚合酶核酸和寡核苷酸模板 DNA仪器、耗材 小离心管 或者微孔板热循环仪实验步骤 材料溶液和缓冲液贮存液、缓冲液和试剂的配方请参照附录 1。将贮存液稀释到
循环测序:利用-PCR-和引物末端标记进行双脱氧测序实验
本方法成功的关键是模板 DNA 的纯度。琼脂糖、盐和蛋白质的污染都会导致 DNA 聚合酶的提前终止或暂停,而 DNA 和 RNA 降解所产生的寡核苷酸将造成引物错配。这些污染会严重导致假阳性条带或空白出现。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试
环状沉淀反应实验
实验方法原理 当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。实验材料 免疫血清试剂、试剂盒 抗原生理盐水仪器、耗材 小沉淀管毛细吸管橡皮头实验步骤 1. 取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第一管,加时注意不能有气泡。2.
环状沉淀反应实验
环状沉淀反应广泛应用于法医学的血迹鉴别和食物掺假的测定。通常这些可疑材料作为抗原,用标准抗血清加以鉴定。它具有用材少的优点,例如衣服等物品上的血迹用生理盐水洗下就可作为抗原进行检查。实验方法原理可溶性抗原例如细菌的提取物,血清、病毒溶液等与相应抗体反应,在有电解质的情况下,会产生细微的沉淀称为沉淀反
肥达反应实验
实验方法原理 用已知的伤寒杆菌H,O抗原和甲,乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中有无相应抗体,根据抗体含量的多少及增长情况,可帮助诊断伤寒及副伤寒。实验步骤 1. 取小试管28支,分四排置于试管架上,每排7支,于每排第一管分别标记H,O,PA,PB 符号。2. 于各
凝集反应实验
实验方法原理 玻片凝集法可利用已知抗血淸鉴定未知细菌,优点是极端快速,为诊断肠道传染病时鉴定病入标本中肠道细菌的重要手段。血清学反应的基本组成成分除抗原与相对应的抗体外,尚需加入电解质(一般用生理盐水)。电解质的作用主要是消除抗原抗体结合物表面上的电荷,使其失去同电相斥的作用而转变为互相吸引,否则即
环状沉淀反应实验
最简单、古老的一种沉淀试验。即在小口径试管内加入已知抗血清,沿管壁加入待检抗原于血清表面,若抗体与相应抗原发生反应,两层液面交界处出现白色环状沉淀,是为阳性,主要用于抗原的定性实验。实验方法原理当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。实验材
蛋白质的微量测序分析实验
本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质 试剂、试剂盒
化学发光双脱氧DNA测序实验
标准的双脱氧DNA测序可以很容易和很有效地使用非同位索标记的化学发光法进行检测。在测序反应中,使用生物素标记的引物。用非同位素标记如生物素衍生化的引物,可用于为5’-末端标记引物而设的入测序反应的工作方案。实验材料DNA试剂、试剂盒生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPd
蛋白质的微量测序分析实验
基本方案1 测定N-末端封闭蛋白质的内部序列 实验材料 蛋白质
蛋白质的微量测序分析实验
实验材料 蛋白质试剂、试剂盒 凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材 电泳仪微量注射器实验步骤 1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4.
化学发光双脱氧DNA测序实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 生物素Tris·ClMgCl2DNA聚合酶dATPdCTPdGTPdTTP仪器、耗材 热循环仪尼龙膜滤纸离心机实验步骤 1. 在微量离心管中混匀下列试剂,配制DNA摸板混合物(1)1 μg 单链DNA模板或1~3 μg 变性双链DNA模板(2)0.5 pmol 生物素
化学发光双脱氧DNA测序实验
利用生物素标记引物 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
焦磷酸测序(Pyrosequencing)实验技术及方法
先进的基于焦磷酸测序(Pyrosequencing)的PSQ96 MA技术平台,能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外,还提供短片段的测序服务(50-100 bp),适用于细菌和病毒分型等研究领域。基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点,完
关于银镜反应的反应的实验操作
1.实验前使用热的氢氧化钠溶液清洗试管,再用蒸馏水清洗。 2.取一支试管,加4~6滴酒石酸钾钠溶液和1ml蒸馏水,再加10滴甲酸钠溶液,振荡后加8~10滴银氨溶液,溶液呈淡棕色,再滴入1~2滴浓氨水,振荡后溶液变成无色。在50~70℃水浴中加热约30~40秒即有银镜生成。 3.在试管中加入3
转运反应成分的制备实验——转运反应
试剂、试剂盒磷酸肌酸肌酸磷酸激酶ATPGTP仪器、耗材微量离心管实验步骤1. 将反应混合物加入一在冰上放置的微量离心管中。能量重建系统成分如下:5 mmol/L 磷酸肌酸20 单位/ml 肌酸磷酸激酶0.5 mmol/L ATP0.5 mmol/L GTP2. 滴一滴孵育混合物到一片位于带盖子的湿盒
细胞组分的化学反应实验——Brachet反应
实验方法原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后,其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应,一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力,且这两种染料的作用有选择性,甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色,呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分
实验反应釜——开式反应釜特点
1.釜盖的开启:普通型是用8-M20螺栓紧固,开启时需要一个一个将螺母扭下,费力费工。而快开釜则是用卡环及相应的螺栓顶压紧固,开启时只要将每个顶丝松几下即可取下卡环,实现釜盖快速开启。 2.釜体的取料:普通型为人工用两手先取下釜盖,再提出釜体并翻转,才能将料倒出。而快开釜使用手摇丝杠,可轻
直接凝集反应实验——玻片凝集反应
实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材载玻片毛细吸管显微镜实验步骤1. 取清洁玻片一张,用蜡笔划为三格,并注明号码。无菌操作下,用接种环于1、2格内加1:10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴,第三格加1~2滴生理盐水。2. 无菌操作下,用接种环取伤寒杆菌培养物少许,混于第三格中,再混于第一格
直接凝集反应实验——试管凝集反应
实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材试管吸管实验步骤一、操作步骤1. 取洁净小试管14只分两排排列于试管架上,每排7只依次用蜡笔注明号码,于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。2. 在第1排1管中加入1:10稀释伤寒H血清0.5毫升,于管内连续吹吸3次,使血清与盐水充分混合,而后吸出0.
蛋白质的微量测序分析实验2
测定N-末端封闭蛋白质的内部序列实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙酸NaOH丽春红染料三氟乙酸仪器、耗材纤维素膜离心管滤膜实验步骤1. 电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2. 将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 mi
焦磷酸测序(Pyrosequencing)实验方法及技术
先进的基于焦磷酸测序(Pyrosequencing)的PSQ96 MA技术平台,能提供基于序列测定的SNP检测、等位基因频率分析和甲基化检测服务。另外,还提供短片段的测序服务(50-100 bp),适用于细菌和病毒分型等研究领域。 基于Pyrosequencing的SNP分析具有快速、高通量的特点,
蛋白质的微量测序分析实验1
验材料蛋白质试剂、试剂盒凝胶缓冲液谷胱甘肽疏基乙酸考马斯亮蓝仪器、耗材电泳仪微量注射器实验步骤1. 制备分离胶和积层胶溶液灌制变性微型凝胶。 2. 组装垂直凝胶电泳装置。 3. 将80 ml 4×凝胶缓冲液稀释至320 ml。将200 ml 1×凝胶缓冲 液倒入下层缓冲液槽。4. 剩余的1×