测序反应实验
试剂、试剂盒 循环测序试剂盒引物和模板仪器、耗材 薄壁 PCR 管热循环仪GeneAmpPCRSystem9700 仪实验步骤 一、材料1. 缓冲液和溶液ABI PRISM Big Dye Terminator Ready Reaction mix(Applied Biosystems) 或其他循环测序试剂盒2. 核酸和寡核苷酸引物和模板3. 特殊设备DNA 扩增用薄壁 PCR 管热循环仪，GeneAmp PCR System9700(Applied Biosystems) 仪或相当产品二、方法1. 将适量（如上所述）的引物和模板加入到 PCR 管中。2. 每管加入 4ul Terminator Ready Reaction mix。这是说明书中推荐用董的一半，这一用董已经足够，而且节省试剂。3. 用去离子水补至 20ul, 混匀，稍离心。4. 在 GeneAmp PCR System 9700(Applied Biosyste......阅读全文
直接凝集反应实验——玻片凝集反应
实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材载玻片毛细吸管显微镜实验步骤1. 取清洁玻片一张，用蜡笔划为三格，并注明号码。无菌操作下，用接种环于1、2格内加1：10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴，第三格加1~2滴生理盐水。2. 无菌操作下，用接种环取伤寒杆菌培养物少许，混于第三格中，再混于第一格
实验反应釜——开式反应釜特点
1.釜盖的开启：普通型是用8-M20螺栓紧固，开启时需要一个一个将螺母扭下，费力费工。而快开釜则是用卡环及相应的螺栓顶压紧固，开启时只要将每个顶丝松几下即可取下卡环，实现釜盖快速开启。 2.釜体的取料：普通型为人工用两手先取下釜盖，再提出釜体并翻转，才能将料倒出。而快开釜使用手摇丝杠，可轻
细胞组分的化学反应实验——Brachet反应
实验方法原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分
直接凝集反应实验——试管凝集反应
实验材料诊断血清试剂、试剂盒生理盐水仪器、耗材试管吸管实验步骤一、操作步骤1. 取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依次用蜡笔注明号码，于每管中分别加入0.5毫升生理盐水。2. 在第1排1管中加入1：10稀释伤寒H血清0.5毫升，于管内连续吹吸3次，使血清与盐水充分混合，而后吸出0.
补体结合反应实验
实验材料伤寒的抽出液试剂、试剂盒豚鼠血清兔血清绵羊红血球仪器、耗材小试管试管架水浴锅实验步骤一、预备试验预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。1. 溶血素效价的滴定：按照下表加入各物凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管（即1：4
间接凝集反应实验
实验方法原理 间接血球凝集试验是根据红血球表面的吸附作用而建立起来的。将细菌可溶性抗原提出使之吸附于红血球表面，此时红血球即称为“致敏红血球”。这种致敏的红血球具有细菌的抗原性，与相应的抗血清相遇可产生凝集现象。间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的多糖物质浸出，去除类脂以免干扰红血球的吸
细菌肥达反应实验
实验方法原理试管凝集反应是一种半定量的凝集反应。常用已知抗原测定受检血清中有无相应抗体及其含量，以辅助临床诊断或供流行病学调查分析。实验材料伤寒杆菌“H”菌液伤寒杆菌“O” 菌液试剂、试剂盒诊断血清生理盐水仪器、耗材小试管吸管实验步骤1． 取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依次用蜡笔注
希尔反应的观察实验
实验方法原理希尔反应（Hill reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应。氧化剂2，6－二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受电子和H＋后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计，还可以对还原量进行精确测定。实验材料菠菜试剂、试剂盒2-6－二氯酚
补体结合反应实验
实验材料 伤寒的抽出液试剂、试剂盒 豚鼠血清兔血清绵羊红血球仪器、耗材 小试管试管架水浴锅实验步骤 一、预备试验预备试验包括溶血素效价的滴定，补体效价的滴定，抗原效价的滴定及被检血清的处理。1. 溶血素效价的滴定：按照下表加入各物凡最高稀释度的溶血素可呈现完全溶血者为一个单位。依上表结果第10管（
细菌肥达反应实验
实验方法原理 试管凝集反应是一种半定量的凝集反应。常用已知抗原测定受检血清中有无相应抗体及其含量，以辅助临床诊断或供流行病学调查分析。实验材料 伤寒杆菌“H”菌液伤寒杆菌“O” 菌液试剂、试剂盒 诊断血清生理盐水仪器、耗材 小试管吸管实验步骤 1． 取洁净小试管14只分两排排列于试管架上，每排7只依
直接凝集反应实验
实验材料 诊断血清试剂、试剂盒 生理盐水仪器、耗材 载玻片毛细吸管显微镜实验步骤 1. 取清洁玻片一张，用蜡笔划为三格，并注明号码。无菌操作下，用接种环于1、2格内加1：10稀释伤寒杆菌诊断血清1-2滴，第三格加1~2滴生理盐水。2. 无菌操作下，用接种环取伤寒杆菌培养物少许，混于第三格中，再混
希尔反应的观察实验
实验方法原理 希尔反应（Hill reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应。氧化剂2，6－二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受电子和H＋后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计，还可以对还原量进行精确测定。实验材料 菠菜试剂、试剂盒 2-6－
银镜反应的实验操作
1.实验前使用热的氢氧化钠溶液清洗试管，再用蒸馏水清洗。2.取一支试管，加4~6滴酒石酸钾钠溶液和1ml蒸馏水，再加10滴甲酸钠溶液，振荡后加8~10滴银氨溶液，溶液呈淡棕色，再滴入1~2滴浓氨水，振荡后溶液变成无色。在50~70℃水浴中加热约30~40秒即有银镜生成。3.在试管中加入3~4滴甲酸钠
希尔反应的观察实验
实验方法原理：希尔反应（Hill reaction）是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水，放出氧气，同时还原电子受体的反应。氧化剂2，6－二氯酚靛酚是一种蓝色染料，接受电子和H＋后被还原成无色，可以直接观察颜色的变化，也可用分光光度计，还可以对还原量进行精确测定。实验材料：菠菜试剂、试剂盒：2-6－
沉淀反应实验：火箭电泳(rocket－electrophoresis)实验
火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为：在电场作用下，抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动，二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线，而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系，因此本法可以测定样品中抗原的含量。1、材料（1）诊断血清（抗体）：抗人IgG或IgA免疫血清（2）待检血清（抗原）：
沉淀反应实验：琼脂扩散(agar－diffusion)实验
琼脂扩散实验琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时，便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时，便依各自扩散速度的差异，在适当部位形成独立的沉淀线，因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散实验可根据抗原
制备DNA测序模板实验——双脱氧测序的双链质粒DNA的碱变性
实验材料DNA试剂、试剂盒NaOHEDTA乙酸钠乙醇仪器、耗材离心管离心机摇床实验步骤1. 加入约0.5 pmol 重组质粒DNA于0.5 ml 微量离心管中，如果体积大于20 μl 应以乙醇沉淀，重溶于20 μl 水。2. 如果体积小于20 μl，用水补足20 μl。3. 加入2 μl 2
DNA测序的测序原理
DNA测序的测序原理是：利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸
DNA测序的测序技术
高通量测序技术（High-throughput sequencing）又称“下一代”测序技术（Next-generation sequencing technology），以能一次并行对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定和一般读长较短等为标志。根据发展历史、影响力、测序原理和技术不同等，主要有以
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册4
H. Fragment purification on Sephacryl S-500 spin columnsDNA fragments larger than a few hundred base pairs can be separated from smaller fragments by
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册2
C. Restriction digestionRestriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restrict
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册6
Electroporation ProtocolPreparation of Electro-competent Cells:1. Grow XL1-Blue cells on a tetracycline plate (20 ug tet/ml of LB agar)2. Inoculate 3
DNA测序实验室的基本条件
DNA测序实验室应具备分子生物学实验室的基本条件,避免外源污染对DNA测序结果的干扰。对生物制品生产检定用菌毒株和动物细胞基质进行DNA测序时,应符合相应级别的生物安全要求,严格遵守相关法律、法规。操作人员应具备相应的分子生物学实验技能,并能熟练使用DNA测序仪。
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
从丙烯酰胺凝胶上切下潜在的差异表达 cDNA 之后，用同一种锚定-任意引物组合重新扩增 cDNA, 反应条件与最初 PCR 相同。重新扩增的产物，可以进行克隆和测序，以供进一步分析。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒琼脂糖凝胶蒸馏水DNA 点样染料甘油蒸馏水溴
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册8
B. Midiprep double-stranded DNA isolationA midi-prep double-stranded DNA isolation has been developed to generate a sufficient amount of template DNA
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册7
III. Methods for DNA isolationA. Large scale double-stranded DNA isolationThe method used for the isolation of large scale cosmid and plasmid DNA is a
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册5
C. Random fragment end-repair, size selection, and phosphorylationSince both sonicated and nebulized DNA fragments usually contain single-stranded end
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶蒸馏水 DNA 点样染料甘油蒸馏水 溴酚蓝 二甲苯腈 FF溴化乙锭溶液任意引物（H-AP)cDNAdNTP 混合液未标记的锚定引物载体特异性引物PCR 缓冲液Tris-HClKClMgCl2明胶 TaqDNA 聚合酶仪器、耗材 电泳装置离心管热循环仪薄壁 PCR 管UV 透射
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册3
G. Bacterial cell maintenanceFour strains of E. coli are used in these studies: JM101 for M13 infection and isolation (4), XL1BMRF' (Stratagene) f
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶 蒸馏水 DNA 点样染料 甘油 蒸馏水 溴酚蓝 二甲苯腈 FF 溴化乙锭