重组DNA的分离、克隆与测序实验手册7
III. Methods for DNA isolationA. Large scale double-stranded DNA isolationThe method used for the isolation of large scale cosmid and plasmid DNA is an unpublished modification (16) of an alkaline lysis procedure (17,18) followed by equilibrium ultracentrifugation in cesium chloride-ethidium bromide gradients (1). Briefly, cells containing the desired plasmid or cosmid are harvested by centrifugation, incubated in a ......阅读全文
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册7
III. Methods for DNA isolationA. Large scale double-stranded DNA isolationThe method used for the isolation of large scale cosmid and plasmid DNA is a
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册
edited by Bruce A. Roe Judy S. Crabtreeand Akbar S. KhanDepartment of Chemistry and Biochemistry The Uni
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册6
Electroporation ProtocolPreparation of Electro-competent Cells:1. Grow XL1-Blue cells on a tetracycline plate (20 ug tet/ml of LB agar)2. Inoculate 3
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册4
H. Fragment purification on Sephacryl S-500 spin columnsDNA fragments larger than a few hundred base pairs can be separated from smaller fragments by
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册5
C. Random fragment end-repair, size selection, and phosphorylationSince both sonicated and nebulized DNA fragments usually contain single-stranded end
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册2
C. Restriction digestionRestriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restrict
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册3
G. Bacterial cell maintenanceFour strains of E. coli are used in these studies: JM101 for M13 infection and isolation (4), XL1BMRF' (Stratagene) f
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册8
B. Midiprep double-stranded DNA isolationA midi-prep double-stranded DNA isolation has been developed to generate a sufficient amount of template DNA
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA测序技术（非同位素银染测序系统操作技术与T7－DNA...7
在分子生物学研究中，DNA 的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
从丙烯酰胺凝胶上切下潜在的差异表达 cDNA 之后，用同一种锚定-任意引物组合重新扩增 cDNA, 反应条件与最初 PCR 相同。重新扩增的产物，可以进行克隆和测序，以供进一步分析。本实验来源于 PCR 实验指南（第二版），作者：种康，瞿礼嘉。试剂、试剂盒琼脂糖凝胶蒸馏水DNA 点样染料甘油蒸馏水溴
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶蒸馏水 DNA 点样染料甘油蒸馏水 溴酚蓝 二甲苯腈 FF溴化乙锭溶液任意引物（H-AP)cDNAdNTP 混合液未标记的锚定引物载体特异性引物PCR 缓冲液Tris-HClKClMgCl2明胶 TaqDNA 聚合酶仪器、耗材 电泳装置离心管热循环仪薄壁 PCR 管UV 透射
差异表达－cDNA－的重新扩增、克隆与测序实验
试剂、试剂盒 琼脂糖凝胶 蒸馏水 DNA 点样染料 甘油 蒸馏水 溴酚蓝 二甲苯腈 FF 溴化乙锭
测序污染有多危险，如何防范与去除[实验手册]
一些研究表明，目前已经公布的基因组存在多种污染，随着这个问题越来越突出，我们需要找出方法来应对 生物通报道：Supratim Mukherjee在进行数据分析的时候，发现数以百计的微生物基因组中会重复出现同一种噬菌体序列，这令他感到很惊讶。这位来自劳伦斯伯克利国家实验室的生物信息学家最开始是为
DNA重组实验方法
[实验原理]DNA重组是将外源DNA与载体分子连接，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法。 重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。常用的DNA连接酶是T4噬
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
菌落 PCR 分析克隆的重组体实验试剂、试剂盒溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagen
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
实验方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。使用载体上的通用引物，进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
试剂、试剂盒 溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材 无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagene)Tween20，10%
DNA测序技术（非同位素银染测序系统操作技术与T7－DNA聚...
3、质粒膜板制备：参照第一章所述的方法。（二）超螺旋质粒DNA 的碱变性：1、取4mg（约2pmol）超螺旋质粒DNA 至一eppendorf管中，加无离子水到终体积18ml。2、加2ml 2mmol/L NaOH/2mmol/L EDTA 溶液，置于室温(25℃下）保温5分钟。3、加2ml 2mo
DNA片段的亚克隆实验
实验材料 DNA试剂、试剂盒 CIPdNTPDNA聚合酶T4聚合酶DTTATP仪器、耗材 水浴锅电泳仪培养箱实验步骤 1. 在20 μl 反应体积内用合适的酶完全消化DNA。75℃加热15 min，灭活酶。如若无需进一步的酶促处理，接歩骤6。2. 如果5’磷酸需要去除，加入2 μl 10×CIP
DNA片段的亚克隆实验
基本方案 凝胶块中DNA连接 实验材料 DNA 试剂、试剂盒
DNA测序技术（非同位素银染测序系统操作技术与T7－DNA...2
（1）过夜培养的宿主细胞(如NM522或JM101)用3ml TYP肉汁培养基以1:100稀释。在37℃强烈震荡1小时之后，细胞进入对数早期。此时，将一个合适的含有重组M13的噬菌斑(连同琼脂)用滴管转入该细胞培养液中。（2）37℃强烈震荡(300rpm) 培养6小时。（3）把细胞培养液转入两只1.
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3、为阻止Taq DNA 聚合酶延伸非特异性退火引物， 热循环仪必须预热至95℃。温度变换应越快越好。下面的循环时间不包括变温时间。如果你无法确定使用何种模式，建议从模式1开始。 模式1：适用于引物
DNA测序技术（非同位素银染测序系统操作技术与T7－DNA...4
7. 在超纯水中浸洗凝胶两次，每次2分钟，注意在本操作中戴手套拿着胶板边缘避免在胶上印上指纹。8. 将凝胶置于室温干燥或用抽气加热法干燥。在可见光灯箱或亮白，黄色背景(如纸)上观察凝胶，若需永久保存的记录，则可用EDF胶片保留实验结果。[注意] 测序产物的银染是显现序列信息的一种新方法，本系统的成败
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（三）电泳：1、预电泳（1）当凝胶聚合完全后，拨出鲨鱼齿梳，将该梳子反过来，把有齿的一头插入凝胶中，形成加样孔。（2）立即将胶板固定在测序凝胶槽中，一般测序凝胶槽的上下槽是分开的，因而只有在固定好凝胶板后，方能加入TBE缓冲液。（3）稀释10×TBE缓冲液至1×TBE，将该缓冲液加入上下二个电泳槽中
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二、材料待测的DNA 模板，可用双链或单链模板。 三、设备高压电泳仪，测序用电泳槽，照相显影用大号塑料盆，制胶设备，吹风机，放射自显影盒，X-光片。 四、试剂 1、5×T7 DNA 聚合酶缓冲液：200mmol/L Tris・Cl，pH7.5，100mmol/L MgCl2，
重组克隆的概念
中文名称重组克隆英文名称recombinant clone定 义含有重组核酸分子或其片段的分子克隆或细胞克隆。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
北大7位学者历时7年刷新DNA测序精度
日前，北京大学黄岩谊教授带领的团队在《自然—生物技术》期刊上在线发表《基于信息理论来修正错误的高准确度荧光产生DNA测序方法》，这标志着我国学者已成功刷新DNA信息解读的精确程度，从根本上提高了测序方法本身的精度，打破了国外在基因测序领域的技术垄断，极大推动了我国生命科学与医学的研究发展，同时