核酶切割RNA专一位点
实验材料 合成的核酶分子切割底物RNA试剂、试剂盒 Tris-HClMgCl2实验步骤 一、材料与设备1)500 mmol/LTris-HCl(pH7.4)2)100 mmol/LMgCl23) 合成的核酶分子4) 切割底物 RNA二、操作方法1) 制备切割混合构:不超过 l0 pmol 底物 RNA,l pmol 合成的核酶分子,加水至 8ul, 加 l ul 500 mmol/L Tris-HCl(PH7.4),混匀。2) 于 75℃ 加热 1 min, 然后置于冰上。3) 加 1ul 100 mmol/L,MgCl2 于 42℃ 孵育 lh。4) 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,回收。注意事项 1) 切割底物 RNA 和核酶可以通过体外转录的方式获得。2) 切割底物 RNA 要与核酶匹配,若底物与核酶具较长的碱基配对则可以提髙酶切的特异性,但会降低切割转换数,因此一般选择 5-7 个核苷酸作为互补匹配区。3) 为获得最佳的切割......阅读全文
核酶实验——发夹型核酶实验
实验方法原理作为有催化活性的 RNA,发夹型核酶在生物体内的作用是位点特异的核酸酶以及 RNA 连接酶。发夹型核酶的催化基序最先是在烟草环斑病毒负链的卫星 RNA 中发现的,它表现一种可逆的自切割反应,最终使滚环复制的产物形成成熟的病毒核酸。发夹型核酶与锤头型核酶都能催化产物的连接,但是发夹型核酶的
关于核酶的重要作用的介绍
随着对核酶的深入研究,已经认识到核酶在遗传病,肿瘤和病毒性疾病上的潜力。 比如,对于艾滋病毒HIV的转录信息来源于RNA而非DNA,核酶能够在特定位点切断RNA,使得它失去活性。如果一个能专一识别HIV的RNA的核酶存在于被病毒感染的细胞内,那么它就能建立抵抗入侵的第一防线。甚至,HIV确实进
核酶的具体作用介绍
随着对核酶的深入研究,已经认识到核酶在遗传病,肿瘤和病毒性疾病上的潜力。比如,对于艾滋病毒HIV的转录信息来源于RNA而非DNA,核酶能够在特定位点切断RNA,使得它失去活性。如果一个能专一识别HIV的RNA的核酶存在于被病毒感染的细胞内,那么它就能建立抵抗入侵的第一防线。甚至,HIV确实进入到了细
RNA甲基化位点分析新方法
继上次QB期刊给大家推荐了WendyV. Gilbert教授的《关于pre-mRNA存在的修饰形式及其对剪接的影响》综述后,小编看到读者们的热情度特别高。借此机会,再给大家推荐一篇来自德克萨斯大学西南医学中心,QBRC、BICF中心主任谢阳教授实验室在QB期刊上发表的最新关于分析MeRIP-Se
核酶实验——锤头型核酶实验
核酶(ribozyme ) 是一类具有酶特性的 RNA 分子,通过催化靶位点 RNA 链中磷酸二酯键的断裂,特异性地剪切底物 RNA 分子,从而阻断基因的表达。核酶广泛存在于从低等到高等的多种生物中,参细胞内 RNA 及其前体的加工和成熟过程。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编:郑晓飞。实验方法
核酶实验
锤头型核酶实验 发夹型核酶实验 其他类型的核酶 实验方法原理 锤头型核酶是最简单的一类核酶,而且其靶序列也比较简单。锤头型核酶发现于几种植
核酶实验
实验方法原理 锤头型核酶是最简单的一类核酶,而且其靶序列也比较简单。锤头型核酶发现于几种植物病毒的卫星 RNA、一种类病毒 RNA 和蝾螈核卫星 DNA 的转录产物中。它催化一些类病毒 RNA 和一些与类病毒 RNA 相似的只复制产物的不可逆自我剪切„实验材料 ATPT4多核苷酸激酶RNasinDT
核酶发现的意义及其应用
1、核酶发现的意义“RNA世界”假说支持“RNA世界”假说的证据RNA也可以充当遗传物质,很多病毒以RNA为遗传物质RNA可以充当酶,而且可以催化多种不同的反应现代的细胞里,有各种不同的RNA,它们具有多项不同的功能RNA也能参与转录校对细胞合成核苷酸是先合成RNA的组成单位核糖核苷酸,然后再合成D
概述核酶的重要作用
随着对核酶的深入研究,已经认识到核酶在遗传病,肿瘤和病毒性疾病上的潜力。 比如,对于艾滋病毒HIV的转录信息来源于RNA而非DNA,核酶能够在特定位点切断RNA,使得它失去活性。如果一个能专一识别HIV的RNA的核酶存在于被病毒感染的细胞内,那么它就能建立抵抗入侵的第一防线。甚至,HIV确实进
Nature子刊:最大、最精确的RNA编辑位点列表
由布朗大学领导的一个研究小组编译出了一份最大型、经最严格验证的果蝇RNA编辑位点列表。该研究生成了关于这一模式生物基础生物学的一些新见解,研究结果发表在9月29日的《自然结构和分子生物学》(Nature Structural & Molecular Biology)杂志上。 这一“主列
剪接位点
中文名称剪接位点英文名称splicing site;splice site定 义剪接体可识别的RNA前体中内含子和外显子连接边界的序列和接头位点。根据位置不同可以分为供体和接纳体剪接位点。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)
识别位点
中文名称识别位点英文名称recognition site定 义限制性内切酶特异结合的核苷酸序列。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞遗传(二级学科)
根据催化功能将脱氧核酶分类
根据催化功能的不同,可以将脱氧核酶分为5大类:切割RNA的脱氧核酶、切割DNA的脱氧核酶、具有激酶活力的脱氧核酶、具有连接酶功能的脱氧核酶、催化卟啉环金属螯合反应的脱氧核酶。其中以对RNA切割活性的脱氧核酶更引人注意,不仅能催化RNA特定部位的切割反应,而且能从mRNA水平对基因进行灭活,从而调控蛋
脱氧核酶的分类介绍
根据催化功能的不同,可以将脱氧核酶分为5大类:切割RNA的脱氧核酶、切割DNA的脱氧核酶、具有激酶活力的脱氧核酶、具有连接酶功能的脱氧核酶、催化卟啉环金属螯合反应的脱氧核酶。其中以对RNA切割活性的脱氧核酶更引人注意,不仅能催化RNA特定部位的切割反应,而且能从mRNA水平对基因进行灭活,从而调
脱氧核酶的分类
根据催化功能的不同,可以将脱氧核酶分为5大类:切割RNA的脱氧核酶、切割DNA的脱氧核酶、具有激酶活力的脱氧核酶、具有连接酶功能的脱氧核酶、催化卟啉环金属螯合反应的脱氧核酶。其中以对RNA切割活性的脱氧核酶更引人注意,不仅能催化RNA特定部位的切割反应,而且能从mRNA水平对基因进行灭活,从而调控蛋
核酶的特点及应用
核酶科学家在研究RNA的转录后加工时发现某些RNA有催化活性,可以催化RNA的剪接,这些由活细胞合成、起催化作用的RNA称为核酶。许多核酶的底物也是RNA,甚至就是其自身,其催化反应也具有专一性。已经阐明的天然核酶有锤头状核酶、发夹状核酶、I型内含子、Ⅱ型内含子、丁型肝炎病毒核酶、核糖核酸酶P、肽基
细胞化学基础核酶
科学家在研究RNA的转录后加工时发现某些RNA有催化活性,可以催化RNA的剪接,这些由活细胞合成、起催化作用的RNA称为核酶。许多核酶的底物也是RNA,甚至就是其自身,其催化反应也具有专一性。已经阐明的天然核酶有锤头状核酶、发夹状核酶、I型内含子、Ⅱ型内含子、丁型肝炎病毒核酶、核糖核酸酶P、肽基转移
核糖核酸的种类核酶
科学家在研究RNA的转录后加工时发现某些RNA有催化活性,可以催化RNA的剪接,这些由活细胞合成、起催化作用的RNA称为核酶。许多核酶的底物也是RNA,甚至就是其自身,其催化反应也具有专一性。 已经阐明的天然核酶有锤头状核酶、发夹状核酶、I型内含子、Ⅱ型内含子、丁型肝炎病毒核酶、核糖核酸酶P、肽基转
RNA点杂交
1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到真空器顶部。4
RNA点杂交
RNA点杂交1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到
核酶的应用介绍
随着对核酶的深入研究,已经认识到核酶在遗传病,肿瘤和病毒性疾病上的潜力。锤头状核酶,为白血病的基因治疗带来了新的希望。HIV的遗传信息来源于RNA。如果一个能专一识别HIV的RNA的核酶存在于被病毒感染的细胞内,那么它就能切断病毒的RNA,建立抵抗病毒入侵的防线。核酶还被设计成靶向丙型肝炎病毒、非典
核酶的功能特点
到目前为止发现的各种核酶有以下特点。(1)核酶的化学本质为RNA或RNA片段。有些核糖核蛋白也有催化作用,但活性中心位于其蛋白质成分上,并不属于核酶,例如端粒酶。然而,如果核糖核蛋白的RNA含活性中心,则该RNA组分就是核酶,例如核糖核酸酶P分子中的M1RNA。(2)核酶的底物种类比较少,大多数是自
核酶的功能特点
到目前为止发现的各种核酶有以下特点。 (1)核酶的化学本质为RNA或RNA片段。有些核糖核蛋白也有催化作用,但活性中心位于其蛋白质成分上,并不属于核酶,例如端粒酶。然而,如果核糖核蛋白的RNA含活性中心,则该RNA组分就是核酶,例如核糖核酸酶P分子中的M1RNA。(2)核酶的底物种类比较少,大多数是
核酶种类哪些核酶属于天然核酶
目前发现的天然核酶其化学本质均为RNA,其催化作用主要有:①核苷酸转移作用,②水解反应,即磷酸二酯酶作用,③磷酸转移反应,类似磷酸转移酶作用,④脱磷酸作用,即酸性磷酸酶作用,⑤RNA内切反应,即RNA限制性内切酶作用.而人工合成的核酶其化学本质为DNA,故又称为脱氧核酶,其催化作用为水解RNA分子的
脱氧核酶的研究前景
对于脱氧核酶的研究有望成为基因功能研究、核酸突变分析、治疗肿瘤、对抗病毒及肿瘤等疾病的新型基因治疗药物的新型核酸工具酶。尽管自然界没有发现脱氧核酶,但实验已证明DNA具有酶活性。由于脱氧核酶比核酶更加稳定,且相对生产成本低廉,脱氧核酶的开发应用已成为新药开发的热门课题。目前对脱氧核酶的结构和功能已有
关于脱氧核酶的研究前景和展望介绍
对于脱氧核酶的研究有望成为基因功能研究、核酸突变分析、治疗肿瘤、对抗病毒及肿瘤等疾病的新型基因治疗药物的新型核酸工具酶。 尽管自然界没有发现脱氧核酶,但实验已证明DNA具有酶活性。由于脱氧核酶比核酶更加稳定,且相对生产成本低廉,脱氧核酶的开发应用已成为新药开发的热门课题。目前对脱氧核酶的结构和
什么是核酶有何生物学意义
核酶又称核酸类酶、酶RNA、类酶RNA,是具有催化活性的RNA,其化学本质是核糖核酸(RNA),却具有酶的催化功能.核酶的作用底物可以是不同的分子,有些作用底物就是同一RNA分子中的某些部位.核酶的功能很多,有的能够切割RNA,有的能够切割DNA,有些还具有RNA 连接酶、磷酸酶等活性.与蛋白质酶相
进入位点
中文名称进入位点英文名称entry site定 义特指氨酰tRNA进入核糖体的部位。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
加帽位点
中文名称加帽位点英文名称cap site定 义mRNA中加帽结构的部位,该位点在前体mRNA的5'端。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)
RNA点杂交实验
实验概要了解RNA点杂交实验,包括纯化的RNA的点杂交和狭线杂交,RNA斑点印迹。实验步骤纯化的RNA的点杂交和狭线杂交:1. 安装印迹装置 1) 切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。 2) 在膜浸泡期间,先用0.1 mo