RNA点杂交
RNA点杂交1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到真空器顶部。4.把样品槽插入装置的上部,把湿尼龙膜放在样品槽加样孔的底部,用吸管在膜的表面滚动以去除膜与装置夹层中的气泡。5.加紧夹板,连接真空管。6.加入10×SSC直至液面没过尼龙膜,关掉真空,再用10×SSC充满。 RNA样品准备1.把每个RNA样品(溶解在10μl水)分别与30μl RNA变性液混合。2.65℃温育5 min,然后在冰上冷却。3.向每个样品中加入等体积20×SSC。4.轻轻向印迹装置中吸入10×SSC,直到淹没尼龙膜。 RNA样品的印迹和RNA在膜上的固定1.把所有样品轻......阅读全文
RNA点杂交
1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到真空器顶部。4
RNA点杂交
RNA点杂交1) 纯化的RNA的点杂交和狭线杂交安装印迹装置1.切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。2.在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。3.把两片厚滤纸用20×SSC浸湿,再放到
RNA点杂交实验
实验概要了解RNA点杂交实验,包括纯化的RNA的点杂交和狭线杂交,RNA斑点印迹。实验步骤纯化的RNA的点杂交和狭线杂交:1. 安装印迹装置 1) 切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。 2) 在膜浸泡期间,先用0.1 mo
纯化的RNA的点杂交和狭线杂交
实验方法原理 点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出 的信号的强
纯化的RNA的点杂交和狭线杂交
实验方法原理 点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出 的信号的强度,与已知浓度的标准品信号强度 进行比较,确定待测样品中靶
纯化的RNA的点杂交和狭线杂交
点杂交和狭线杂交技术(Kafatos et al. 1979) 用于在同一固相支持物(通常为带电荷的尼龙膜)上固定几种核酸样品,然后用合适的探针与已固定的样品杂交,并由此判断靶序列的浓度。通过估计样品点发射出的信号的强度,与已知浓度的标准品信号强度 进行比较,确定待测样品中靶序列的量。本实验来源「分
今日技术解析RNA点杂交实验
实验步骤纯化的RNA的点杂交和狭线杂交:1. 安装印迹装置 1) 切一张合适大小的带正电荷尼龙膜。用铅笔标上表示方向的记号。用水把膜简单弄湿,在20×SSC中室温泡1 h。 2) 在膜浸泡期间,先用0.1 mol/L NaOH小心清洗印迹装置,再用无菌水洗干净。 3) 把两片厚滤纸用20
RNA点线杂交
RNA点线杂交(Dot and Slot blotting)· RNA dot blot and slot blot (Beverly Faulkner-Jones)This methods allows the rapid analysis of numerous small sa
DNA点杂交
DNA点杂交l DNA斑点印迹的制备预备1.冰浴中以70W左右的超声波处理基因组DNA 1min,用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小,这些片段大小均应为7~10kb。2.用TE缓冲液将DNA稀释至0.5μg/μl。 斑点印迹的制备1.加热5μg DNA(在10μl TE缓冲液中)至95℃ 1
RNA印迹杂交
RNA印迹杂交1) Northern印迹的制备预备:1.按下述步骤,每泳道加10~20μg总RNA或0.5~1μg poly(A)+RNA进行甲醛/琼脂糖凝胶电泳,将凝胶放在紫外线透照仪上,旁边置一标尺进行拍照。a. 总RNA(10~20μg)用下列溶液在65℃温育5min:总RNA(1
RNA荧光原位杂交
原位杂交:在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子的特点,应带有标记的(有放射性同位素,如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)DAN或 RNA
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列(探针)的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC
RNA的斑点杂交
实验概要本实验介绍了RNA的斑点杂交操作流程及注意事项。主要试剂1. 预杂交液:5×SSC,2×Denhardt液(或采用试剂盒的相应试剂),0.02%(W/V) SDS2. 杂交液DIG Easy Hyb3. 含0.1%SDS 2×SSC和含0.1%SDS 0.1×SSC主要设备杂交袋实验步骤1.
RNA原位杂交实验
原位杂交(msituhybridization,ISH),也称作杂交组织化学或细胞学的杂交,是一种能够从形态学上证明特异性的 DNA 或 RNA 序列存在于制备的个别细胞、组织部分、单细胞或染色体中的技术。原位杂交是研究异质细胞群中 DNA 和 RNA 序列的细胞定位的唯一方法。本实验来源「RNA
RNA斑点杂交方法
每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
RNA原位杂交实验
实验方法原理 原位杂交的原理是含有互补序列(探针)的被标记的单链 DNA 或 RNA 片段在适当 的条件下与细胞的 DNA 或 RNA 杂交形成稳定的杂交体。无论是 DNA( dsDNA、寡核苷酸和 ssDNA ) 或是 RNA( SSC RNA) 探针均能用于定位 DNA 和 mRNA,并
DNA、RNA斑点杂交
实验概要将RNA 或DNA 变性后直接点样于硝酸纤维素膜上,同探针进行杂交,用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究,称为斑点印迹。与Southern 及Nouthern 印迹法相比,其优点是简单、迅速,可在一张膜上同时进行多个样品的检测,特别是对于核酸粗提样晶的检测。缺点是不能鉴定所测基
RNA斑点杂交方法介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
什么是反向点杂交技术
PCR是聚合酶链式扩增的英文缩写.反向点杂交是将探针固顶在玻璃芯片或尼龙膜上,用于检测扩增产物中是否含有目标基因的技术.此技术较为成熟,在国内应用较多,如HPV分型诊断试剂、地中海贫血诊断试剂等.
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析杂交和放射自显影试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
Northern印迹和总RNA杂交实验
试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材 凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤 1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模,梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液(300 ml 1% 琼脂糖凝胶):琼脂糖,3.0 g10x RNA 电泳缓冲液,30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析 杂交和放射自显影 试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
总RNA提取与Northern杂交(1)
一、 总RNA的提取1、 取组织10-50毫克,剪切成大小在0.5厘米以内的碎片,加入×5的RNA later(约2毫升)。样品在37度可保存1天。室温下1周,4度下1个月。2、 匀浆:用Rnase Erase spray(ICN)清理匀浆器头部(7mm),用DEPC水和乙醇清洗,将上述样品用镊
总RNA提取与Northern杂交(2)
4、Loading buffer(10ul每个样) 总体积 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
RNA测序发现杂交蝉遗传证据
据英国《通讯·生物学》杂志近日发表的一项动物学研究,日本科学家通过RNA测序,出乎意料地发现了13年蝉与近亲17年蝉杂交的遗传证据,而这两种蝉至少221年才相遇一次。研究显示,杂交蝉在极其漫长时间里都维持了各自不同的生命周期,目前科学家无法就这种平行趋异演化给出遗传学解释。长期以来,周期蝉的生命
RNA斑点杂交方法过程介绍
与上法类似,每个样品至多加10μg总RNA(经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化),方法是将RNA溶于5μl 焦碳酸二乙酯(DEPC)水,加5μl 甲醛/SSC缓冲液(10×SSC中含6.15mol/L甲醛),使RNA变性,然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上,烘干。
总RNA提取与Northern杂交(3)
第二天:将上述物品揭开,将胶正面朝下,膜正面朝上,用铅笔作好标记。将胶浸泡在EB中1-2分钟,用DEPC H2O清洗,将膜放在滤纸上面,夹好,4度下保存,或者直接进行预杂交。UV杂交(有助于RNA结合到膜上面)。五、预杂交和杂交预杂交和杂交 buffer: 100ul20×SSC 25ml (5×S
RNA的电泳,转膜和杂交
实验原理:基本同 Southern Blotting,但因RNA 是单链分子,必须消除局部区域形成的二级结构,在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小,因而需使用变性胶进行电泳;另应特别注意防止RNA 的降解。实验材料:经检测质量好的 RNA实验步骤:1.制胶:Agarose 1%-1.2% , 1×
在原位杂交中-为什么rna可以和dna杂交
因为碱基互补配对啊。RNA不光和DNA杂交,还可以和RNA杂交。RNA原位核酸杂交又称RNA原位杂交组织化学或RNA原位杂交。该技术是指运用cRNA或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内RNA表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的RNA核苷酸片段,按核酸杂交
Northern印迹和总RNA杂交实验——杂交和放射自显影
实验材料mRNA试剂、试剂盒甲酰胺SSPEDenhardt 试剂SDS仪器、耗材滤膜实验步骤1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。在 42℃:50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 试剂0.1% SDS或者在 68℃:6x SSC2x Denhardt 试剂0.1% SDS2. 把已变性