RNA蛋白复合物中寡核苷酸靶向的RNaseH切割保护实验
实验方法原理 寡核苷酸靶向的 RNase Ⅱ 酶解实验是分析 RNA 蛋合复合物（RNP，核糖核蛋白颗粒）的方法，无论是对于粗提物还是提纯后的样品，对分析 RNP 的结构域的结构都非常有效。实验材料 蛋白酶 KAMV 反转录酶试剂、试剂盒 缓冲液DNase ⅠDNase Ⅰ 缓冲液酚氯仿溶液乙酸钠RNasinE.coli RNase HTBE 缓冲液过硫酸铵溶液尿素凝胶点样缓冲液转移缓冲液SSPE 缓冲液核苷酸溶液琼脂糖丙烯酰胺RNP 凝胶点样缓冲液仪器、耗材 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳电转移设备尼龙膜实验步骤 一、材料与设备所有的缓冲液和溶液必须无 RNA 酶污染。1. RNP 制备和 DEAE 层析(1) 缓冲液 D : 20 mmol/L HEPES ( pH 8.0 )，100 mmol/L KCl，0.2 mmol/L EDTA。20% 甘油，高压灭菌。在使用前加 DTT 至 1 mmol/L。加苯甲磺酰氟（PMSF）至 ......阅读全文
简并寡核苷酸诱变实验
本方法的一个重要特点就是将单链的简并寡核苷酸转变成同源双链分子后直接克隆进常规载体。由于不同的寡核苷酸可通过其3’末端的回文结构杂交，因此，寡核苷酸实际上起互为引物的作用，在大肠杆菌DNA聚合酶I klenow片段作用下延伸。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒DNA聚合酶dNTP甘油NaClEDTASDS
CRISPR/Cas9蛋白切割DNA过程中的调控和校验机制
清华大学生命科学学院陈春来研究组在《Cell Reports》杂志发表了研究论文，题目为“The Conformational Dynamics of Cas9 Governing DNA Cleavage Are Revealed by Single-Molecule FRET”（利用单分子F
免疫沉淀法的主要类型
个别免疫沉淀法(IP)：用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫共沉淀法(Co-IP)：研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP)：用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP)：和ChIP相近，但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术（RNA Binding
蛋白质复合物的结构
蛋白质复合物的分子结构可以通过实验技术确定，例如X射线晶体学，单颗粒分析或核磁共振。蛋白质-蛋白质对接的理论选择也越来越多。是通常用于识别一个meomplexes方法是免疫沉淀。最近，Raicu及其同事开发了一种确定活细胞中蛋白质复合物的四级结构的方法。该方法基于确定像素级Förster共振能量转移
蛋白质复合物的组装
正确组装多蛋白复合物很重要，因为组装错误会导致灾难性的后果。为了研究通路组装，研究人员研究了通路中的中间步骤。一种允许这样做的技术是电喷雾质谱法，它可以同时识别不同的中间状态。这导致发现大多数复合物遵循有序的组装路径。在可能发生无序组装的情况下，由于无序组装导致聚集，从有序状态到无序状态的改变导致复
染色体显微切割实验
实验方法原理试剂、试剂盒RPMI1640完全培养基秋水仙胺固定液Giemsa染液仪器、耗材倒置显微镜玻璃针实验步骤一、显微切割中期染色体的制备1.取0.5mL外周血与含PHA的4.5mLRPMI1640培养液混合，在37℃培养细胞64〜68h。2.收获细胞前20min在培养基中加入25ml秋水仙胺（
染色体显微切割实验
基本方案 实验方法原理 试剂、试剂盒 RPMI1640完全培养基
染色体显微切割实验
实验方法原理 试剂、试剂盒 RPMI1640完全培养基秋水仙胺固定液Giemsa染液仪器、耗材 倒置显微镜玻璃针实验步骤 一、显微切割中期染色体的制备1.取0.5mL外周血与含PHA的4.5mLRPMI1640培养液混合，在37℃培养细胞64〜68h。2.收获细胞前20min在培养基中加入25ml秋
免疫沉淀法的类型
个别免疫沉淀法(IP)：用来分离某个细胞萃取物中的已知特定蛋白质免疫沉淀法免疫共沉淀法(Co-IP)：研究整个蛋白质复合体染色质免疫沉淀法(ChIP)：用来研究DNA上的特定蛋白质RNA免疫沉淀法(RIP)：和ChIP相近，但RNA免疫沉淀法是用来研究会与RNA结合的蛋白质RIP技术（RNA Bin
RIP技术（RNA结合蛋白免疫沉淀）
RIP技术（RNA Binding Protein Immunoprecipitation，RNA结合蛋白免疫沉淀），是研究细胞内RNA与蛋白结合情况的技术，是了解转录后调控网络动态过程的有力工具，能帮助我们发现miRNA的调节靶点。RIP这种新兴的技术运用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合
蛋白质靶向的历史
1970年，GünterBlobel进行了蛋白质跨膜转运实验。Blobel，当时是洛克菲勒大学的助理教授，在他的同事GeorgePalade的工作基础上建立起来。Palade之前已经证明，非分泌蛋白是由胞质溶胶中的游离核糖体翻译的，而分泌蛋白（通常是靶蛋白）是由与内质网结合的核糖体翻译的。当时的候选
我国科学家首次解析病毒RNA与宿主蛋白质互作网络
以流感为代表的由RNA病毒引发的疾病严重威胁人类健康，甚至影响社会经济发展。RNA作为RNA病毒的遗传物质，在致病过程中发挥着关键作用，但很少有研究报道病毒RNA与宿主蛋白间的相互作用。近期，我国科学家首次解析了多种病毒RNA与宿主蛋白质互作的关系网络，研究成果发表在《Cell Research
Nat－Biotechnol：利用CRISPRCsm复合物实现精准的RNA靶向
哺乳动物细胞由于亚细胞区室的存在而具有固有的复杂性，因而使得在分子生物学实验室中进行强有力的转录本靶向具有一定的挑战性。如今，在一项新的研究中，来自美国加州大学伯克利分校的研究人员将一种新的复合物整合到CRISPR-Cas系统中。相关研究结果近期发表在Nature Biotechnology期刊
水切割的切割技术概述
由于能量梯度的作用，激光、气体等离子、射流等切割手段在切面越深时（距喷嘴越远），切割能力越差，所以所形成的切割面往往不垂直于工件表面，被称之为切割斜度，这是所有切割手段的一个固有缺陷。虽然通过提高切割能量或降低切割速度可以部分减小切割斜度，但依然存在不能完全垂直切割的问题。于是，可倾斜切割头的设
蛋白质靶向分选
线粒体大多数线粒体蛋白被合成为含有摄取肽信号的胞质前体。胞质伴侣将前蛋白递送至线粒体膜中的通道连接受体。具有针对线粒体的前序列的前蛋白在外膜处与受体和通用输入孔(GIP)结合，统称为外膜转位酶(TOM)。然后它作为发夹环通过TOM易位。前蛋白通过膜间隙运输通过小的TIM（也充当分子伴侣）到内膜的TI
我国科学家首次解析病毒RNA与宿主蛋白质互作网络
以流感为代表的由RNA病毒引发的疾病严重威胁人类健康，甚至影响社会经济发展。RNA作为RNA病毒的遗传物质，在致病过程中发挥着关键作用，但很少有研究报道病毒RNA与宿主蛋白间的相互作用。近期，我国科学家首次解析了多种病毒RNA与宿主蛋白质互作的关系网络，研究成果发表在《Cell Research
我国科学家首次解析病毒RNA与宿主蛋白质互作网络
以流感为代表的由RNA病毒引发的疾病严重威胁人类健康，甚至影响社会经济发展。RNA作为RNA病毒的遗传物质，在致病过程中发挥着关键作用，但很少有研究报道病毒RNA与宿主蛋白间的相互作用。近期，我国科学家首次解析了多种病毒RNA与宿主蛋白质互作的关系网络，研究成果发表在《Cell Research
简并寡核苷酸基因混编实验
实验材料 pBSII KS 质粒大肠杆菌 DH5α试剂、试剂盒 Pfx 聚合酶碱性磷酸酶通用缓冲液覆盖液刚果红溶液脱色液桦木木聚糖底物溶液PAHBAH 储液实验步骤 我们以 DNA 重组 D.thermophilum Rt46B.1 木聚糖酶基因（ xynB) 及其 5 个相关的木聚糖酶基因为例
简并寡核苷酸基因混编实验
简并寡核苷酸基因混编 实验材料 pBSII KS 质粒 大肠杆菌 DH5α
简并寡核苷酸基因混编实验
蛋白酶生化性质的改善可以通过对该酶基因的错掺突变和 DNA 混编方法实现。混编技术可用于同一基因的一组突变体，或者对相关家族基因的片段进行新的组合，产生嵌合突变基因产物。本实验来源「现代蛋白质工程实验指南」〔德〕K.M.阿恩特、K.M.米勒编著。实验材料pBSII KS 质粒大肠杆菌 DH5α试剂、
抗CRISPR蛋白的原理机制研究
CRISPR 基因座和 Cas 蛋白在原核生物中提供针对入侵的噬菌体和质粒的适应性免疫。作为回应，噬菌体已经进化出广谱的抗 CRISPR 蛋白（抗 CRISPR）来抵消和克服这种免疫途径。迄今为止，已经鉴定出许多抗 CRISPR，它们抑制单亚基 Cas 效应器（在 CRISPR 2 类、II、V
凝胶迁移实验（EMSA）——凝胶迁移
凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）可以：（1）研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用；（2）可用于DNA定性和定量分析；（3）用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。实验方法原理一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初
反义亲和层析法纯化及去除核蛋白复合物实验
实验材料 HeLa 细胞试剂、试剂盒 NaCl 洗液Laemmli 上样缓冲液ATP磷酸肌酸无菌蒸馏水尿素缓冲液MD 0.1MD 0.6KCl 洗液链亲和素琼脂糖凝胶封闭缓冲液NP-40仪器、耗材 链亲和素琼脂糖凝胶Dounce 玻璃匀浆器微量透析杯透析袋实验步骤 一、材料与设备1. AAS 法纯化
反义亲和层析法纯化及去除核蛋白复合物实验
实验材料HeLa 细胞试剂、试剂盒NaCl 洗液Laemmli 上样缓冲液ATP磷酸肌酸无菌蒸馏水尿素缓冲液MD 0.1MD 0.6KCl 洗液链亲和素琼脂糖凝胶封闭缓冲液NP-40仪器、耗材链亲和素琼脂糖凝胶Dounce 玻璃匀浆器微量透析杯透析袋实验步骤一、材料与设备1. AAS 法纯化 RNP
反义亲和层析法纯化及去除核蛋白复合物实验
实验材料 HeLa 细胞 试剂、试剂盒 NaCl 洗液 Laemmli 上样缓冲液 ATP
蛋白质复合物的功能介绍
蛋白质复合物的形成有时起到激活或抑制一个或多个复合物成员的作用，因此，蛋白质复合物的形成可以类似于磷酸化。单个蛋白质可以参与各种不同蛋白质复合物的形成。不同的复合体执行不同的功能，并且相同的复合体可以执行取决于多种因素的非常不同的功能。其中一些因素是：包含复合物时，复合物存在于哪个隔室中复合物存在于
蛋白质复合物的类型介绍
专性vs非专性蛋白质复合物如果蛋白质可以在体内自身（没有任何其他相关的蛋白质）形成稳定的折叠良好的结构，则由这种蛋白质形成的复合物称为“非专性蛋白质复合物”。但是，某些蛋白质不能单独产生稳定的折叠结构，而可以作为稳定复合蛋白质的蛋白质复合物的一部分而被发现。这样的蛋白质复合物被称为“专性蛋白质复合物
EMSA凝胶迁移（一）
实验原理凝胶迁移或电泳迁移率实验（EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术zui初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常将纯化的蛋白和细胞粗提液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保
组建CRISPRCas9库，让标记DNA和靶向切割更精准
CRISPR-Cas9系统，被称为第三代基因编辑技术。自3年前发明这一技术以来，由于它能够很容易地结合并切割非常特异的DNA序列、失活基因，CRISPR-Cas9如暴风般横扫基因组学领域。这为靶向基因疗法治愈遗传疾病，及发现疾病的病因带来了巨大的希望。 相比于它的两位前辈ZFN系统和TALEN
错配固相化学切割法实验
试剂、试剂盒退火缓冲液B&W(结合洗脱）缓冲液dNTP溶液甲酰胺染液羟胺KMnO4 TEAC嘧啶Taq DNA聚合酶Taq DNA聚合酶缓冲液待测和对照基因组DNA仪器、耗材磁力架微孔滴定板或微管振荡器链霉抗生物素蛋白包被的磁珠热循环仪实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂（1）退火缓冲液，2X: