单细胞westernblot解析乳腺癌发生过程的细胞异质性
乳腺癌起源于乳腺上皮细胞，原因是乳腺上皮细胞发生基因改变，导致随后组织稳态丧失。科学家们经过大量研究将乳腺上皮细胞分为几个不同的亚群，但依然无法完全了解上皮细胞异质性和分化谱。 加州大学欧文分校（University of California, Irvine）的科学家，在最新一期Nature Communication上发表文章，采用单细胞mRNA测序(ScRNAseq)分析来自7个不同乳腺增生病人的25,790个人乳腺上皮细胞的转录组，使用无偏聚分析揭示了三种不同的上皮细胞群的存在，一种是基底细胞，另一种是导管腔上皮细胞，分为激素分泌型L1和激素反应L2型细胞。 文章作者从单细胞测序数据发现，KRT8在L2型细胞中比L1性表达水平高。 为了阐述KRT8蛋白质表达异质性，作者选择了ProteinSimple Milo单细胞western blot。Milo可将细胞分为三个亚群：阴性，低表达，高表达......阅读全文
单细胞western－blot解析乳腺癌发生过程的细胞异质性
乳腺癌起源于乳腺上皮细胞，原因是乳腺上皮细胞发生基因改变，导致随后组织稳态丧失。科学家们经过大量研究将乳腺上皮细胞分为几个不同的亚群，但依然无法完全了解上皮细胞异质性和分化谱。 加州大学欧文分校（University of California, Irvine）的科学家，在最新一期Na
单细胞western－blot解析乳腺癌发生过程的细胞异质性研究
乳腺癌起源于乳腺上皮细胞，原因是乳腺上皮细胞发生基因改变，导致随后组织稳态丧失。科学家们经过大量研究将乳腺上皮细胞分为几个不同的亚群，但依然无法完全了解上皮细胞异质性和分化谱。加州大学欧文分校（University of California, Irvine）的科学家，在最新一期Nature Com
Milo单细胞蛋白质检测技术解析乳腺癌发生的细胞基础
乳腺癌起源于乳腺上皮细胞，原因是乳腺上皮细胞发生基因改变，导致随后组织稳态的丧失。科学家们经过大量研究将乳腺上皮细胞分为几个不同的亚群，但依然无法完全了解上皮细胞异质性和分化谱加州大学欧文分校（University of California, Irvine）的科学家，在最新一期Nature Com
SCIENCE－ADVANCES：单细胞Western揭秘胚胎发育异质性
近日，美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using ope
SCIENCE－ADVANCES：单细胞Western揭秘胚胎发育异质性
近日，美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using ope
SCIENCE－ADVANCES：单细胞Western揭秘胚胎发育异质性
近日，美国加利福尼亚大学伯克利分校的科学家，利用单细胞Western技术在期刊SCIENCE ADVANCES（IF：12.804）发表文章：Assessing heterogeneity among single embryos and single blastomeres using ope
westernblot实验过程
Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品
单细胞蛋白质定量技术解析干细胞异质性
干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞。体内或体外研究表明, 干细胞具有表型及功能的异质性, 这一特性也决定了其不同的分化和再生能力。越来越多的证据表明, 干细胞自我更新及分化的分子机制以及与干细胞功能失调的相关疾病的产生都是在单细胞水平发生的, 基于异质性的干细胞群体的研究结果
刘澎涛博士：单细胞RNAseq解析干细胞异质性
最近，在国际著名学术期刊《Genome Biology》发表的一项研究中，来自英国威康信托基金会桑格研究所、剑桥大学、上海交通大学等处的研究人员，采用单细胞转录组分析来解析造血干细胞（HSCs）的分子异质性。这项研究论证了单细胞转录学用于解析干细胞区室中的细胞过程和谱系异构性的效用。 英国威康
Cell：单细胞测序深度解析三阴乳腺癌
美国MD安德森癌症中心联合瑞典卡罗林斯卡学院的研究人员利用单细胞测序对三阴乳腺癌展开分析，表明耐药性是来源于现有的带有基因突变的克隆。这些结果于周四发表在《Cell》杂志上，将对这种癌症的诊断、预后和治疗具有临床意义。 三阴乳腺癌是指雌激素受体、孕激素受体和原癌基因Her-2均为阴性的乳腺癌。
单细胞分析揭示癌症异质性
2013年度基因组生物学大会(The Biology Of Genomes 2013)于5月7日晚在美国纽约冷泉港实验室召开。这是基因组学领域最大的会议之一，吸引了多个著名研究所的大牛参加。会议主题包括高通量基因组学和遗传学、复杂性状的遗传学、功能和癌症基因组学、计算基因组学、进化基因组学以
Western－Blot－(AP)
主要试剂1. Membrane Blocking buffer:5% Milk 0.05% of Tween 20 PBS2. antibody dilution buffer: PBS 0.05% of Tween20 1.0% Milk(or BSA) 3. washing buffer:
Western－Blot－Protocol
一、提取抗原蛋白将提取RNA途中留存的样品，加入150μl 100%酒精充分混匀，静置5min(RT), 2000×g , 4℃离心5min, 吸取上清至新管中, 加入750μl异丙醇, 混匀, 静置10min(RT), 12000×g, 4℃离心10min, 弃上清, 加入1ml 0.3mol/L
western－blot原理
Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的蛋白质样品，转移到固相载体上，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检
Western－Blot详解
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术: 一、原理 二、分类
单细胞分析是研究细胞异质性的有效手段
单细胞分析是研究细胞异质性的有效手段 单细胞分析研究细胞异质性的关键就在于能否实现对单个细胞进行较多参数的分析，这就是“单细胞分析”的概念。事实上，自从“细胞”学说被提出后，人类一直在努力寻求分析单个细胞的技术方法。 但是，单细胞分析有一个巨大的挑战，那就是样品量及其有限，一个典型的人类细
单细胞精度解析人类T淋巴细胞起源及胸腺器官发生
T淋巴细胞是宿主适应性免疫系统中最重要的免疫细胞之一，在抵抗病原入侵、维持机体稳态以及抗肿瘤等方面起到不可或缺的作用【1,2】。胸腺是T淋巴细胞发育的必需场所【3】。胎肝或骨髓来源的胸腺定植祖细胞（thymus seeding progenitor, TSP）迁移定植到胸腺后，即为早期胸腺祖细胞
高通量单细胞ChIPseq确定了乳腺癌染色质状态的异质性
近日，法国巴黎文理研究大学等科研人员在Nature Genetics上发表了题为“High-throughput single-cell ChIP-seq identifies heterogeneity of chromatin states in breast cancer”的文章，利用高通
单细胞－RNA－测序揭示了体内不同的细胞异质性
植入体内的生物材料和设备具有广泛的临床应用，如组织再生和细胞移植。在细胞微环境的组成部分中，结构特征（宏观，微观和纳米特征）在指导细胞行为方面起着至关重要的作用。 2021年5月26日，四川大学满毅团队在Science Advances 在线发表题为“Dissecting the microe
如何提细胞的组蛋白做western－blot
你的意思就是提取核蛋白，提取核蛋白和提取全蛋白用的裂解液是不一样的。一般情况下我们都是买试剂盒，里面包含有细胞裂解液和核裂解液，按照说明书实用就行了。120mmol/L的Hepe（PH7.9）2420mmol/LNaCl31.5mmol/LMgCl242%Igepal50.5mmo/LEDTA620
Western－Blot细胞组织裂解液的选择
裂解液是**普遍使用的蛋白提取试剂,可根据文献或经验自行配制,也可购买商业化的产品。常见的细胞裂解液有 NP40、Triton X-100、RIPA buffer 等。下表是根据目的蛋白的不同定位选择裂解液的建议。虽然裂解液的使用范围比较广泛,能够满足总蛋白的提取,但是无法做到特异蛋白的提取,特别是
Western－Blot－with－Platelet－Protein
OUTLINEWestern blot is a wide used technique to identify a target protein/s for the certain antibody.PROTOCOLPrepare platelets.Lyse washed platelets (
Western－Blot详解－原理
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。 原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检
Western－Blot详解（三）
3.抗体 T.做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？ 解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。 U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的E
Western－Blot详解（一）
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一、原理二、分类i.放射自显影ii.底物化学
Western－Blot详解（八）
DDDD.显色目的条带又细又浅，靶蛋白是27KD的bcl-xl和67KD 的c-myc，应该是高表达。每个涌道上50-70μg蛋白，开始用半干转移，后来用湿转14v，16h，用PVDF膜转移。胶转移后染色检测，发现小分子量的基本转移走了，可是为什么条带老是不粗不浓呢?解答：可能跟你的一抗有关
Western－Blot详解（三）
3.抗体T.做细胞信号传导，要做磷酸化某因子Western Blot，其二抗有何要求？解答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。U.同一公司的另外抗体用这个稀释度做出来效果很好，所以没做预试，怕费时间，用什么样的稀释度比较好呢？我用的ELL+plus试剂盒显色。转膜过夜，
Western－Blot详解（四）
还有一种离子交换型膜是羧甲基（CM）修饰的纤维素膜，它可以结合蛋白和多肽分子，以及其他的一些带正电荷的样品，最适结合pH范围在4-7。结合的多肽分子可以从CM膜上洗脱下来，用于氨基酸系列分析或微测序。5.Marker的相关疑问MM.我用的是可视marker（BIO_RAD），但是电泳总跑不全8条带，
western－blot试验心得
前两天做了一个western blot,现在把试验中的一点小小的体会发上来，与大家交流，希望大家多多指点！1 本实验室采用的脱脂奶粉已经存放了近两年了，虽然是四摄氏度保存，但是其封闭质量还是难以保证的。所以本人的试验结果中出现了小斑点。建议最好使用BSA或专用的脱脂奶粉进行封闭，虽然贵点，但还是有个
Western－Blot详解（六）
GGG.我想尽量提高转膜的效率（我的实验要求转到膜上的蛋白越多越好，不管是什么大小蛋白）不知道有那些办法？解答：不管怎么转都会存在蛋白转移不完全（电压过小时间过短）或过度转移（电压过大时间过长）的问题，鱼（小分子量蛋白）和熊掌（大分子量蛋白）不可得兼呵呵。建议把胶切成两半，比如以35KD为界，分别进