多聚螯合物酶组化实验
实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架,将特异性抗体和 HRP 结合在一起,形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物,该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时,只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂,孵育 30~60 min 即可完成。勿需再加酶标记第二抗体。实验材料 石蜡切片试剂、试剂盒 蛋白酶PBS蒸馏水H2O2Dako EPOS HRP 试剂DAB树胶二甲苯乙醇仪器、耗材 滴管玻片实验步骤 1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 蛋白酶消化或抗原修复(AR),PBS 洗 3 min×3 次。3. 0.3% 过氧过氢(H2O2)处理 5 min。4. 蒸馏水洗,置于 PBS 中洗 5 min。5. 加入相应的 Dako EPOS/HRP 试剂,室温孵育 30~60 min。6. PBS 洗 3 min×3 次。7. 0.04% DAB- 0.0......阅读全文
介晶(液晶)二聚物、三聚物的概念
介晶(液晶)二聚物、三聚物等------由通常是相同结构的两个、三个或更多连接介晶单元分子构成的介晶化合物;
免疫组化的实验试剂及实验步骤
一、试剂(1)PBS缓冲液(pH7.2~7.4):NaCl 137mmol/L,KCl 2.7mmol/L,Na2HPO4 4.3mmol/L, KH2PO4 1.4mmol/L。(2)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液(CB,pH6.0,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸 0.4g。(3)0.
ATP合酶的组成
ATP合酶主要由F₁(伸在膜外的水溶性部分) 和Fo(嵌入膜内)组成(图1)。不同物种来源的 ATP合酶含的亚基和数目不尽相同。以牛心线粒体 ATP合酶为例,它的F₁含有仅α3、β3、γ、δ、ε共9 个亚基,Fo含a、b2、C10共13个亚基,F₁与Fo之间有OSCP柄相连接,还有抑制蛋白。线粒体F
ATP合酶的组成
ATP合酶主要由F₁(伸在膜外的水溶性部分) 和Fo(嵌入膜内)组成(图1)。不同物种来源的 ATP合酶含的亚基和数目不尽相同。以牛心线粒体 ATP合酶为例,它的F₁含有仅α3、β3、γ、δ、ε共9 个亚基,Fo含a、b2、C10共13个亚基,F₁与Fo之间有OSCP柄相连接,还有抑制蛋白。线粒体F
螯合治疗评估试验:高剂量维生素无心血管获益
美国一项新的研究结果表明,大剂量联合口服含有28种成分的复合维生素和矿物质并未显著减少既往心肌梗死患者的再发心血管事件。 螯合治疗评估试验——2×2多因素试验,由国家心脏、肺和血液研究所(NHLBI)和国家补充和替代医学(NCCAM)中心共同资助,该试验结果在2013美国大学的心内科科
真核基因组的中度重复顺序—多聚家族的基本介绍
多聚家族的基本单位是dT-dG双核苷酸,多个dT-dG双核苷酸串联重复在一起,分散于人体基因组中。已经发现,这个家族的一个成员位于人类δ和β珠蛋白基因之间,含有17个dT-dG双核苷酸组成的串联重复顺序。在人基因组中,dT-dG交替顺序达106拷贝,这些顺序的平均长度为40bp。人们推测,这样一
石蜡切片免疫组化实验步骤
脱蜡和水化1. 将切片依次浸入二甲苯Ⅰ10 min,二甲苯Ⅱ(10 min)。2. 再次浸入无水乙醇Ⅰ(5 min)-无水乙醇Ⅱ(5 min)-95%酒精(5 min)-80%酒精(5 min)-70%酒精(5 min),然后去离子水冲洗2次,每次2 min。 抗原修复 (可选)3. 将组织切片放入
石蜡切片免疫组化实验4
实验方法原理SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从
石蜡切片免疫组化实验2
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸
石蜡切片免疫组化实验3
卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法实验材料蜡块切片试剂、试剂盒多聚甲醛蒸馏水蔗糖过氧化氢甲醇PBS酒精KPBS牛血清白蛋白叠氮纳一抗二抗仪器、耗材冰箱显微镜烧杯实验步骤1. 4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01 M KPBS清洗5
免疫组化双染实验protocol
第一抗体的染色: 1、 将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10分钟,PBS冲洗2分钟×3次 2、 加100ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上,室温孵育10分钟,倒掉(不能冲洗) 3、 加入一抗(按照说明推荐浓度和孵育条件) 4、 使用含有0.05%吐温20的PBS( TPB
免疫组化双染实验流程
一、脱蜡和水化方法同SP法。二、第一抗体的染色1、将切片浸在3%H2O2甲醇溶液(新鲜配制)中10 min,PBS冲洗3 min×3次;2、加100 ul(2滴)血清封闭溶液(试剂1)到切片上,室温孵育10 min,倒掉(不能冲洗);3、加入一抗(按照说明书推荐浓度和孵育条件);4、使用含有0.05
免疫组化实验原理和步骤
实验原理: 抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性,免疫组织化学正是利用了这一原理。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫动物后获得特异性的抗体,再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。由于抗原与抗体的复合物是无色的,因此还必须借助于组织化学的方法将抗原
免疫组化实验注意事项
当免疫组化染色没有出现预期结果时,应系统地查找原因,而每一次只能排除一种可能的原因。那么在做免疫组化实验注意事项有哪些呢?下面我们来详细了解一下: 对照/标本无染色 ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂,包括一抗、二抗、三抗及底物等。 ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入,是否孵育
dna多聚酶的正常值及临床意义是什么
正常值 25cpm。 临床意义 (1) 升高:乙肝病毒持续感染者、急性乙型肝炎潜伏期、初期、繁殖期、乙型慢性肝炎、乙型慢性肝炎的e抗体阳性、DNA多聚酶高值时说明肝功能恶化。(2) 降低:乙型慢性肝炎的e抗原阳性者。
免疫组化方法免疫酶标方法简介
免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是最常用的技术。该方法与免疫荧光技术相比的主要优点是:定位准
植物组织中几种酶的组化定位鉴定
原理 在植物生理学的研究中,可利用组织化学的方法,来说明植物体内的生理活动问题。例如,当需要检定某种物质性质和在植物体内分布时,用组织化学的方法,可以达到定位和定性的目的,而且有时比用剥离的官或组织,作生化测定更能说明问题。植物组织中酶的组化鉴定的基本原理,是以某物质为底物在专一酶作
简述多聚磷酸的应用
在有机合成中用作失水剂、环化剂、酰化剂,是缩合、环化、重排、取代等反应的催化剂或溶剂。有时用多聚磷酸酯(PPE)类以增加多聚磷酸在有机溶剂中的溶解度。此外多聚磷酸也用作正磷酸的代用品及分析试剂。
生物多聚体的概念
中文名称生物多聚体英文名称biopolymer定 义由分子量较低的基本结构单元首尾相连形成的多聚化合物。如氨基酸组成的蛋白质和核苷酸组成的核酸等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)
生物多聚体的定义
中文名称生物多聚体英文名称biopolymer定 义由分子量较低的基本结构单元首尾相连形成的多聚化合物。如氨基酸组成的蛋白质和核苷酸组成的核酸等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),总论(二级学科)
科研人员提出环氧环己醇类天然产物生物合成新策略
真菌聚酮合酶(polyketide synthases, PKSs)是一类高度程序化的迭代型I型聚酮合酶,通过一组功能结构域的迭代和交替使用,可以精确合成具有特定结构的聚酮产物,如降胆固醇药物洛伐他汀等。依据所合成聚酮产物骨架结构的还原程度,真菌PKSs被分为三大类,即高度还原型聚酮合酶(hig
固定化酶到聚酯的实验
基本方案 实验方法原理 聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过
固定化酶到聚酯的实验
实验方法原理聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚形成的,在这两步过程中三氯化锑作为催化剂(图 1)。用过量的乙烯乙二醇,最初形成一个低分子质量的具有末端竣基的聚合物再通过乙烯
固定化酶到聚酯的实验
实验方法原理 聚酯是通过二羧酸和二醇试剂的缩合合成的。频繁使用的聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET,Terylene,Trevira,Diolen)是通过对苯二酸盐和乙烯乙二醇的缩聚形成的,在这两步过程中三氯化锑作为催化剂(图 1)。用过量的乙烯乙二醇,最初形成一个低分子质量的具有末端竣基的聚合物再通
DAKO-EPOS免疫组化一步染色法
自Nakane(1966)建立了免疫酶标记技术以来,这门技术得到了迅速的发展。DAKO EPOS先进的多聚螯合物免疫组化一步染色法,是一种即用型快速而有效的方法,具有更为简便、更为敏感和高特异性的特点。1.、材料和方法(1)材料均为本院日常活检组织共32例,其中肉瘤5例,淋巴瘤7例,上皮癌12例,胶
检测自身免疫病:铁蛋白多聚抗原和多聚二抗检测
自身免疫疾病是机体针对自身抗原产生大量自身抗体后引起的慢性全身性疾病。因此,检测患者体内特异性的自身抗体是诊断该病的主要指标。例如,用ELISA检测原发性干燥综合征(Primary Sjogren's syndrome, pSS)患者血清中的抗M3及α-fodrin抗体,为其诊断提供了重
荧光组化实验中的注意事项
1.每种荧光染料,均有自己的最适PH值,此时荧光最强。当pH改变时,不仅荧光强度减弱,而且波长将有所改变,因此荧光检测时要在一定的PH值的缓冲液中进行。2.放荧光染色在20。C以下时荧光比较稳定,温度升高常出现温度猝灭。3.在荧光观察中,常因激发光的增强而使样品荧光很快衰竭,造成观察和照相困难。为此
免疫组化实验原理和步骤(二)
免疫组化问题解答1、染色过强 a 抗体浓度过高戒孵育时间过长 。降低抗体滴度、抗体孵育时间:室温1小时、或4度过夜 b 孵育温度过高超过37度。 一般在室温20-28度 c DAB显色时间过长戒浓度过高 显色时间不超过5-12分钟,以显微镜下观察为准。2、非特异性背景染色a 操作过程中冲洗不充分 :
免疫组化实验原理和步骤(三)
免疫组化技术的关键问题1.组织处理恰当的组织处理是做好免疫组化染色的先决条件,也是决定染色成败的内部因素,在组织细胞材料准备过程中,不仅要求保持组织细胞形态完整,更要保持组织细胞的抗原性不受损戒弥漫,防止组织自溶。如果出现自溶坏死的组织,抗原已经丢失,即使用很灵敏的检测抗体和高超的技术,也很难检出所
免疫组化实验中常用染色方法
根据标记物的不同分为免疫荧光法,免疫酶标法,亲和组织化学法,后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位,其中生物素—抗生物素染色法最常用。