多聚螯合物酶组化实验
实验方法原理 采用一种具有惰性的多聚化合物(葡聚糖)为骨架,将特异性抗体和 HRP 结合在一起,形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物,该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时,只需在组织切片上加入相应的酶标记特异性抗体 EPOS 试剂,孵育 30~60 min 即可完成。勿需再加酶标记第二抗体。实验材料 石蜡切片试剂、试剂盒 蛋白酶PBS蒸馏水H2O2Dako EPOS HRP 试剂DAB树胶二甲苯乙醇仪器、耗材 滴管玻片实验步骤 1. 石蜡切片常规脱蜡至水,PBS 洗 3 min×3 次。2. 蛋白酶消化或抗原修复(AR),PBS 洗 3 min×3 次。3. 0.3% 过氧过氢(H2O2)处理 5 min。4. 蒸馏水洗,置于 PBS 中洗 5 min。5. 加入相应的 Dako EPOS/HRP 试剂,室温孵育 30~60 min。6. PBS 洗 3 min×3 次。7. 0.04% DAB- 0.0......阅读全文
金属螯合亲和层析实验——MCAC纯化带组氨酸尾可溶融合蛋白
经遗传工程改造的使其氨基端或羧基端带上6个连续的组氨酸残基的重组蛋白,可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子固相化的层析介质加以提纯,是为金属螯合亲和层析。实验材料蛋白质试剂、试剂盒IPTGNiSO4蛋白酶抑制剂MCAC-EDTATriton仪器、耗材层析柱转子实验步骤1. 接种含以
甲基化和异戊烯化作用检测—多聚类异戊二烯取代物确证
实验材料蛋白试剂、试剂盒牛血清白蛋白氢氧化氨仪器、耗材试管实验步骤1. SDS-PAGE 和电洗脱分离目的蛋白。2. 洗脱的蛋白中加牛血清白蛋白载体使最终浓度为 0.1 mg/ml,并用 5 倍体积的含 1.5% 氢氧化氨的冰冷丙酮处理 30 分钟以沉淀蛋白。3. 离心收集沉淀蛋白,倒掉上清,在真空
功能性微量元素螯合物技术创新应用-破译猪的营养密码
“您吃猪肉吗?” “吃一点。” “您为什么要研究猪饲料?” “因为事关民生。” 瘦肉精、抗生素、重金属残留,曾一度让人谈猪肉而色变。中国工程院院士、中国科学院亚热带农业生态研究所(以下简称中科院亚热带生态所)研究员印遇龙带领团队,对猪的营养密码展开了30多年的破译。 “我们希望从猪嘴
上海药物所镍螯合物诱导手性非天然氨基酸研究取得进展
镍螯合物诱导手性非天然氨基酸的不对称合成 非天然氨基酸是许多上市药物中的重要合成砌块,将此类氨基酸引入肽链中,可以改变肽的生理活性和构型构象,对多肽类似物的药物开发具有重要意义。而将它们引入小分子化合物中,可以改变配体和受体的相互作用模式,为化学类新药设计与发现提供新的思路。 为
欧盟评估赖氨酸和谷氨酸铜螯合物可作为饲料添加剂
2019年6月18日,据欧盟食品安全局(EFSA)消息,应欧盟委员会的要求,欧盟动物饲料添加剂和产品(FEEDAP)研究小组对赖氨酸和谷氨酸铜螯合物(copper chelates of lysine and glutamic)作为所有动物饲料添加剂的安全性和有效性进行了评估。 FEEDAP
蛋白质和铜离子能否发生螯合反应
可以的,就是传说中的铜盐聚乳。蛋白质会和重金属离子结合,导致自身结构变化,失去活性,就会聚沉。
慢性重金属中毒·毒性元素尿液螯合分析
由于不良生活方式与环境污染,现代人极容易出现慢性重金属在体内累积,过度的重金属累积是影响健康的重要原因。血液检测最常用于急性重金属中毒,对于慢性重金属的累积血液检测并不能有效反映出来。头发与尿液螯合分析是用来检测慢性重金属中毒的可靠指标。虽然头发检测与尿液螯合都可以反映体内元素的长期蓄积水平,但尿液
上海有机所在II型聚酮合酶研究方面获进展
11月6日,中国科学院上海有机化学研究所刘文课题组在《自然-合成》(Nature Synthesis)上,在线发表了题为Analysis of siderochelin biosynthesis reveals that a type II polyketide synthase catalys
乙型肝炎病毒——血清DNA多聚酶检测
测定HBV特异的DNA聚合酶活性是反映HBV增殖的一个有用指标。HBVDNA聚合酶活性与HBsAg滴度及HBeAn阳性有关,一般说HBeAg阳性,Dane颗粒增殖多,DNA聚合酶活性也高。HBVDNA聚合酶常存在于Dane颗粒核心内,但30%-50%HBV感染者的血清内还有可溶性游离HBVDNA
多聚酶链式反应技术(PCR技术)(2)
(2)反应增强剂:PCR反应中加入一定浓度的增强剂如1%~10%二甲基亚砜(DMSO)、5%~20%甘油、非离子去污剂、1.25%~10%甲酰胺和10~100 μg/ml牛血清白蛋白等可提高反应特异性和产量,有些反应只能在这些辅助剂存在时才能进行。(3)热启动PCR:如果PCR反应混合物置于低于Tm
多聚酶链式反应技术(PCR技术)(1)
多聚酶链式反应即PCR(polymerase chain reaction)技术,应用这一技术可以将微量目的基因(DNA片段)扩增一百万倍以上。PCR反应理论的提出和技术的完善对于分子生物学的发展具有特殊的意义,它以敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等优点迅速成为分子生物学研究中应
临床化学检查方法介绍DNA多聚酶介绍
DNA多聚酶介绍: 基因是遗传的物质基础,它决定了病原体的生物特性。除个别病毒外,现知的所有微生物均是以核酸为遗传物质。乙肝病毒的基因是脱氧核糖核酸(DNA),与病毒复制所必需的DNA聚合酶关系密切。因此基因检测成为乙肝检测组成部分。DNA多聚酶正常值: 25cpm。DNA多
免疫组化实验
实验方法原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水
脂肪酸合酶的测定实验
基本方案 实验方法原理 酰基 CoA:丙二酰 CoA C-转酰基酶(脱羧、异丁基还原、烯酰还原与硫酯水解)。乙酰-CoA+n 丙二酰-CoA+2n NADPH
脂肪酸合酶的测定实验
实验方法原理酰基 CoA:丙二酰 CoA C-转酰基酶(脱羧、异丁基还原、烯酰还原与硫酯水解)。乙酰-CoA+n 丙二酰-CoA+2n NADPH+2n H+ → CH3-(CH2-CH2)n-CO-CoA+n CoA+n CO2+2n NADP++n H2O式中,n=6~8。实验材料脂肪酸合酶试剂
用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B-分离磷酸肽实验
用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B 分离磷酸肽实验 试剂、试剂盒 EDTA 乙酸铵
用亚氨基二乙酸(铁螯合)Sepharose6B-分离磷酸肽实验
在进行蛋白质(phosphorylated protein) 的结构与功能分析时,接蛋白质水解后即能将磷酸肽与未修饰的(未磷酸化的)肽分开是很有助益的。可利用的最有效的方法之一是使用载有铁 (正铁离子)的金属螯合填料。本实验来源于蛋白质纯化与鉴定实验指南,作者:朱厚础。暂未评分点评实验,有机会获丁当
什么是多酶复合物?
几个酶嵌合而成的复合物成为多酶复合物。
天然的异戊烯聚合物与其他多聚物的区别
天然的异戊烯聚合物与其他多聚物的共同点为:①由具有通用结构的重复单位所组成(异戊烯骨架相当于糖,氨基酸或核苷酸单位);②此单位的结构在细节上可有所变动(例如在类异戊二烯中的双键)并按顺序排列;③链长变化极大,小到两个单位聚合而成单萜,多至数百倍的单位聚合而成的橡胶。不同点为:①重复单位以C-C键连接
dna多聚酶的注意事项及相关疾病
注意事项 (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2) 可作为乙肝病毒复制及有传染性的标志。 相关疾病 慢性迁延性肝炎
免疫组化实验原理
首先来谈一下免疫组织化学(IHC, Immunohistochemistry)、免疫细胞化学(ICC, Immunocytochemistry)和免疫荧光(IF, immunofluorescence technic )的共通之处和区别。 平常说的 免疫组化 就是用石蜡切片做的免疫组织
dna多聚酶的临床意义及注意事项
临床意义 (1) 升高:乙肝病毒持续感染者、急性乙型肝炎潜伏期、初期、繁殖期、乙型慢性肝炎、乙型慢性肝炎的e抗体阳性、DNA多聚酶高值时说明肝功能恶化。(2) 降低:乙型慢性肝炎的e抗原阳性者。 注意事项 (1) 此酶的活性可在乙肝病毒感染的早期发现,甚至于在HBsAg出现前检出。(2)
关于多聚酶链反应的基本原理介绍
多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)又称体外核酸扩增技术,即对特定DNA片段进行非细胞依赖性扩增,其基本过程是将已提取的待测DNA在一对寡核苷酸引物、三磷酸核苷及耐热DNA多聚酶存在的情况下,分别于90℃、55℃和72℃下经变性、退火和核苷酸链的延伸,如此循
免疫组化实验方法
一、免疫组化(Immunohistochemistry,IHC/ Immunocytochemistry, ICC)原理免疫组化是应用免疫学基本原理--抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质
用固化-Ni2+吸收色谱纯化带组氨酸标签的蛋白实验
多聚组氨酸能与多种过渡金属和过渡金属螯合物结合,因此带暴露的 His-6 的蛋白能结合于固化 Ni2+树脂,用适当缓冲液冲洗去除其他蛋白后,再用可溶的竞争性螯合剂洗脱可以回收靶蛋白。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料表达带多聚组氨酸标
何新建等拟南芥叶酸多聚谷氨酰基化研究获进展
2013年7月23日,北京生命科学研究所何新建实验室在《The Plant Cell》杂志在线发表题为“Folate polyglutamylation is involved in chromatin silencing by maintaining global DNA methyl
多聚体的概念
多聚体是由单体(monomers)结合而成的分子。生物分子(如蛋白质、核酸、糖)都是多聚体(polymers)。
多聚磷酸的制备
工业上多磷酸的制备是通过磷酸高温聚合脱水(500℃以上)制得。控制酸流和热气流可得到不同含量的多磷酸(100%、105%、115%、117%甚至更高)。因为热法的磷酸杂质含量更少,所以用热法磷酸聚合的多磷酸品质更好。
β半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验
实验方法原理 实验材料 小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体试剂、试剂盒 磷酸盐缓冲液(PBS)冰冷β-半乳糖苷酶固定剂β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液β-半乳糖苷酶染色液仪器、耗材 5 mL或10 mL的聚苯乙烯或聚丙烯帽盖的试管或1.5〜2 mL的离心管转动平台染色用密闭箱附有盖玻片的下陷载玻片或箱式载玻片
β半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验
半乳糖苷酶活性的整体封片染色和免疫组化检测 准备大组织的厚切片进行β-半乳糖苷酶染色 实验方法原理 实验材料