表达蛋白检测实验

实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒 完全 MEM-5 培养基胰酶细胞裂解液5 × SDS 样品缓冲液仪器、耗材 6 孔组织培养板Sorvall 离心机95℃ 水浴锅实验步骤 1. 用生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞建立病毒感染细胞培养液(见基本方案 1 步骤 1~5)。2. 用完全 MEM-5 培养基将 5×105 细胞/孔放入 6 孔组织培养板培养(每孔终体积为 2 ml)。直至细胞汇片生长(应小于 24 h)。3. 在使用前,将一定体积的痘苗病毒储液与 0.25 mg/ml 胰酶混合,涡旋混匀。在 37℃ 水浴锅中保温 30 min,并在保温过程中每隔 5~10......阅读全文

表达蛋白检测实验

实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料 生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒

表达蛋白检测实验

免疫印迹法 免疫沉淀法 点印迹法             实验方法原理 当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是

SDSPAGE检测蛋白表达

一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪等;蛋白Mark。

表达蛋白检测实验_点印迹法

实验方法原理本方案用DNA点迹杂交检测噬斑以鉴定重组病毒。像点迹杂交一样,将感染细胞裂解物印迹在硝酸纤维素膜上(可参考「痘苗DNA检测实验」中「斑点杂交法」)。用可以识别外源基因表达蛋白的抗体与膜一起孵育,用125I 标记的蛋白 A 检测结合的抗体,还可应用化学发光检测系统,如 Amersham E

蛋白表达

Protein Construct Expression and Purification Procedures (Gimila's Lab)  Protein Expression (Mark's Lab)  ·         Purification of GST Fused

抑癌基因编码蛋白表达的检测

实验步骤             展开           

抑癌基因编码蛋白表达的检测

实验步骤             展开

新技术同时检测基因和蛋白表达

 美国俄亥俄州立大学的研究人员近日开发出一种新技术,能同时观察细胞中的基因数量和蛋白表达。此技术能够详细分析基因状态以及相应蛋白表达之间的关联,并更透彻地了解癌症及其他复杂疾病。该成果发表在《Neuro-Oncology》上。  这种新技术称为荧光原位基因蛋白分析(fluorescent  in  

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

SDSPAGE检测蛋白表达(protein-expression)

一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪等;蛋白Mar

表达蛋白检测实验_免疫印迹法

实验方法原理当重组病毒通过噬斑纯化和扩增后,免疫印迹可用于鉴定重组蛋白,并检测其是否有预期的大小以及是否从感染细胞中分泌。下面的步骤是介绍检测非分泌性(细胞内)蛋白的,如果重组蛋白是分泌到培养基中的,可按注解中的步骤操作。实验材料生长至汇片的单层 BS-C-1 细胞重组痘苗病毒储液试剂、试剂盒完全

SDSPAGE检测检测蛋白表达的实验操作步骤

一、材料与仪器    30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液,PH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液,PH6.8;电泳缓冲液,PH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板,电泳电源架,电泳槽,电泳仪 

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理    活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、   青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于10

表达蛋白检测实验_免疫沉淀法

实验方法原理使用强大的晚期基因启动子表达的重组蛋白可以用放射性氨基酸标记,再用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。当使用早期或晚期基因启动子时,利用标记蛋白免疫沉淀能提高灵敏性和特异性。试剂、试剂盒磷酸缓冲液(PBS)细胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸仪器、耗材完全 MEM-5 培养基(含和不含蛋氨

NanoString技术检测微创穿刺样品蛋白表达

NanoString技术由于其高灵敏度,高重复性并且检测过程中不需要进行反转录和扩增,一经推出便受到了广泛的关注和认可。现在这项技术广泛的应用在基因表达(mRNA),小RNA(miRNA),拷贝数变异(CNV),长链非编码RNA(lncRNA)等方面的检测,但是这些检测的对象都是核酸,对于细胞蛋白的

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2

表达蛋白的生物学活性的检测

一、MTT比色法检测细胞活性(一)原理活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷,其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。(二)试剂准备1、青链霉素溶液(100X):青霉素100万U,链霉素100万U,溶于100mlddH2

检测表达的重组蛋白质的方法

检测表达的重组蛋白质的检测方法有,首先采用DNA分子杂交技术,找到目的基因。其次检测目的基因是否转录出了mRNA,最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,进行抗原抗体杂交。

膜蛋白的表达

常用于重组膜蛋白的表达系统有真核表达系统、原核表达系统和近些年来发展的无细胞表达系统。其中以大肠杆菌(E.coli)为代表的原核表达系统因为操作简单、成本相对低廉、遗传背景清楚、方便同位素标记,以及有大量可利用的表达载体和宿主菌株等原因,是当下获取重组膜蛋白的最主要途径。对于一些膜蛋白而言,采用增加

无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音

   1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河,这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此,体外蛋白表达开始为科学界所关注,不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差,使其未能得到进一步发展。    到80年代中期Sp

无细胞表达系统——难度蛋白表达的福音

1964年有两个人开创了体外蛋白表达的先河,这两个人的名字大家必定不会陌生—马太和尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64种翻译密码子。从此,体外蛋白表达开始为科学界所关注,不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差,使其未能得到进一步发展。到80年代中期Spirin等对其进

关于蛋白表达系统—昆虫表达系统的介绍

  昆虫表达系统是一类应用广泛的真核表达系统,它具有同大多数高等真核生物相似的翻译后修饰加工以及转移外源蛋白的能力。昆虫杆状病毒表达系统是国内外十分推崇的真核表达系统。利用杆状病毒结构基因中多角体蛋白的强启动子构建的表达载体,可使很多真核目的基因得到有效甚至高水平的表达。它具有真核表达系统的翻译后加

关于蛋白表达系统—植物表达系统的介绍

  植物能够表达来自动物、细菌、病毒以及植物本身的蛋白质易于大规模培养和生产,且在基因表达与修饰及安全性方面有特别的优势,因此利用植物生产外源蛋白质的研究展现了极其诱人的前景。多种抗体、酶、激紊、血浆蛋白和疫苗等都已通过基因工程的手段在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器官中得到表达,然而提

蛋白质表达检测有哪几种方法

有三种,第一是用DNA探针检测,看目的基因是否存在。第二种是用mRNA做探针,看是否有由DNA转录形成的mRNA,原理和前面是一样的,利用碱基互补配对原则。前面两种都是在分子水平检测,第三种是在个体水平直接检测的。比如:直接拿害虫去侵蚀抗虫棉

Western-blot中蛋白表达差异量检测哪种效果最好?

在检测Western blot中蛋白表达差异量时,数字成像和X光胶片哪种效果最好?哪种方法得出的图像才是我们最想要的?针对此问题,最近,武汉大学生命科学院舒红兵院士实验室特意用“化学发光成像仪”和“胶片”做了一次严谨的对比。通过这次PK,我们发现:1、化学发光成像仪具有灵敏度高、线性好和抑制过曝等优

蛋白质表达检测有哪几种方法

有三种,第一是用DNA探针检测,看目的基因是否存在。第二种是用mRNA做探针,看是否有由DNA转录形成的mRNA,原理和前面是一样的,利用碱基互补配对原则。前面两种都是在分子水平检测,第三种是在个体水平直接检测的。比如:直接拿害虫去侵蚀抗虫棉

使用酶标仪的细胞成像系统检测标签蛋白的表达

优势:   带细胞成像系统的功能模块扩展了微孔读板机的检测应用2.   方便检测每个细胞或每孔的标签蛋白的表达水平3.   按照一般微孔读板机的简单流程4.   细胞可视化数据输出,增加了数据可信性某些细胞蛋白存在或不存在,可代表着细胞对某些刺激的反应、某种分化的状态或特定细胞类型的独特特征或者基因

SDSPAGE检测表达蛋白实验原理和操作步骤

1.目的 学习SDS-PAGE的基本操作,学会用SDS-PAGE检测蛋白。 2.原理 蛋白质在加热变性以后与SDS结合,带上负电荷,在电场的作用下,向正极移动,结果按分子量大小排列在胶板上,含量多的蛋白带纹粗。 3.器材 旋涡混合器,微量移液取样器,