多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(三)

说明(1) 用 IntegraCL350 瓶培养杂交瘤细胞的效果很好, 每毫升细胞培养收获上清液中,可以得到 mAb0.5~Img。通常可连续培养 1 个月左右。(2) 处理液体:将培养基在 37°C 水浴预热。这有助于避免培养瓶中的冷凝作用以及细胞的温度休克向细胞培养皿 (白盖) 添加或取出液体时, 要先拧松营养培养室的绿盖,以防止留有空气。放人培养箱孵育之前始终拧紧培养瓶的白盖和绿盖。建议使用 IOmL 血清移液管进行操作。将培养基吸出并加人新鲜的培养基, 为营养维持室换液。(3) 接种的最低细胞浓度为 1.5X106 个细胞/mL[步骤 (2)]。我们尝试降低营养培养基中所需的胎牛血清,但未获成功。一些市场上的新型无血清培养基可以用做营养培养基。(4) 监测细胞数量和状态很重要 [步骤 (3)]。有助于确定是否分离细胞,以减少细胞数量,避免总活细胞数大于 I.OXlO8 个。如果细胞活力大大降低,则需要增加换液......阅读全文

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(三)

说明(1) 用 IntegraCL350 瓶培养杂交瘤细胞的效果很好, 每毫升细胞培养收获上清液中,可以得到 mAb0.5~Img。通常可连续培养 1 个月左右。(2) 处理液体:将培养基在 37°C 水浴预热。这有助于避免培养瓶中的冷凝作用以及细胞的温度休克向细胞培养皿 (白盖) 添加或取出液

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(四)

说明(1) 用 Benzonase 核酸酶处理裂解液 [步骤(3)](EMD/Novagen#7 0 746,Madison,WD,有助于消化核酸和降低黏度 (见本书第 18 章)。(2)500 mmol/LNaCl 清洗 [步骤 (6)] 有助于消除核酸和 NusA, 后者为一种 RNA 聚合酶结

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(二)

3.PR-mAb 的 ELISA-elution 检测法(1) 抗原包被聚苯乙烯微孔板。通常每孔加入 50 含有 30~100ng 抗原的磷酸盐缓冲液 (PBS,PH7.4)。室温孵育 Ih,保证足够的时间使抗原与聚苯乙烯结合。(2) 每孔用 200 斗含 1% 脱脂奶粉的 PBSd%BLOTTO)

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(一)

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于免疫亲和层析一、多羟基反应单克隆抗体我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非变性状态。我们把这

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用

所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收

多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——免疫亲和层析

实验步骤 一、多羟基反应单克隆抗体 我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非

羟基和氨基能反应吗

可以反应,叫羟氨基化。羧基-COOH或酚中的-OH可以与胍基(NH2)2-C=NH(一个碳连2个氨基,双键再连一个亚胺基。碱性与KOH相当)中NH2-反应,发生的是酸碱中和反应,即羟基去H+,NH2-得H+.机理是羧基中羰基的氧诱导作用吸电子,使羧基中—OH氧电负性减弱,对H的束缚能力减小。另外氨基

羟基和氨基能反应吗

可以反应,叫羟氨基化。羧基-COOH或酚中的-OH可以与胍基(NH2)2-C=NH(一个碳连2个氨基,双键再连一个亚胺基。碱性与KOH相当)中NH2-反应,发生的是酸碱中和反应,即羟基去H+,NH2-得H+.机理是羧基中羰基的氧诱导作用吸电子,使羧基中—OH氧电负性减弱,对H的束缚能力减小。另外氨基

红外怎么证明羧基和羟基反应

羧基和羟基反应是有机化学中的一种常见反应,通常需要使用化学试剂来证明其反应。然而,红外光谱也可以用来证明羧基和羟基反应的发生。在红外光谱中,羧基和羟基都有明显的吸收峰。羧基的吸收峰通常在1700-1750 cm^-1附近,而羟基的吸收峰则在3200-3600 cm^-1附近。当羧基和羟基发生反应时,

使用羟基脲片的不良反应介绍

  1.骨髓抑制为剂量限制性毒性,可致白细胞和血小板减少,停药后1~2周可恢复;  2.使用羟基脲片有时出现胃肠道反应,尚有致睾丸萎缩和致畸胎的报道;  3.偶有中枢神经系统症状和脱发,亦有羟基脲片引起药物性发热的报道,重复给药时可再出现。  4.国外有报道,在骨髓增殖异常的病人中,使用羟基脲出现了

羟基磷灰石柱用于蛋白质层析实验(三)

选择合适的缓冲液可以有助于保持目标蛋白质的完整性,同时利于其吸附于 HA。这一步骤在平衡时最好已经完成,平衡时应该没有任何的磷酸盐,然后加载缓冲液。但是在经过几个循环后,填充柱便失效了。研究表明,低至 2rmnol/L 的磷酸盐可以延长层析柱的寿命,同时又兼顾目标蛋白质的纯度。磷酸盐与 ME

单克隆抗体的鉴定实验

1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书

概述单克隆抗体的鉴定实验

  1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。  2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。  ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书

茚三酮是否可用于氨基酸和蛋白质的定性鉴定

可以的,茚三酮也可以用于蛋白质的氨基酸分析。除去脯氨酸之外的大多数氨基酸,水解之后可与茚三酮反应。水解中某些氨基酸的侧链也会被降解。因此对于那些与茚三酮不反应或者发生其他反应的氨基酸需要另作分析。其余的氨基酸经过色谱分离后可以比色定量。在分析化学反应的薄层色谱(TLC)中,它可以用于检测所有的胺类,

羟基醇和酰氯反应是首先跟羟基反应还是羧基

羟基醇和酰氯反应是首先跟羟基反应还是羧基如果是羟基酸和酰氯反应,那自然是优先和羟基反应,因为羟基的酸性比羧基弱,羟基的亲核性比羧基强。

应用于生产酶的固态反应器介绍

浅盘式生物反应器,通风室式、池式、箱式,圆盘式或转鼓式通风培养设备,柱式反应器。除此之外,还有各式各样为特殊用途而开发的固态生物反应器。固态生物反应器的设计开发都应该满足固态发酵的技术特点,并尽量朝着大型化、机械化、自动化、连续化的生产要求发展。

噬菌体用于细菌的鉴定和分型

  作为分子生物学研究的试验工具  噬菌体是遗传调控、复制、转录与翻译等方面的生物学基础研究和基因工程中的重要材料或工具。遗传学中的转导作用就是以噬菌体作为媒介,在2株细菌间传递遗传物质。  用于细菌的鉴定和分型  噬菌体只能侵染相应的细菌,具有高度的特异性,可用于细菌鉴定。同时,噬菌体具有型的特异

质粒DNA的分离、纯化和鉴定-(三)

操作步骤    一、 细菌的培养和收集    将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。    二、 质粒DNA

噬菌体的应用用于细菌的鉴定和分型

噬菌体只能侵染相应的细菌,具有高度的特异性,可用于细菌鉴定。同时,噬菌体具有型的特异性,可对细菌进行分型鉴定。可以利用噬菌体对沙门氏菌、大肠杆菌和伤寒菌等进行分型。

海星多羟基甾体皂甙Linckoside-A和B首次全合成

  在一些海洋无脊椎动物,特别是海星和海参中,存在大量的皂甙类化合物。这些次级代谢产物被认为是行动缓慢的海星和海参的防御性物质,用于抵抗被捕食、寄生和感染等。因此,人们相信这类化合物具有诸如抗肿瘤和抗微生物等生理活性,有希望被发展成为治疗药物。然而,这些化合物结构复杂多样,难以分离获取,也因此难以开

研究报告用于捕获甲醛的聚羟基聚氨酯水凝胶和涂层

  甲醛( FA)是一种有害的化学产品,主要用于生产生活空间中的树脂。滤出树脂的残留FA会造成室内空气污染,并导致一些重要的健康问题。能够捕获这种挥发性有机化合物的系统是非常理想的;然而,传统的吸附剂通常仅限于空气过滤系统。  最近 , 科研人员 报告了一种新型水性涂料,用作室内空气净化的FA海绵。

羧酸羧基中羟基的取代反应

  羧基中的羟基在一定条件下,可被羟氧基(-OR)、卤素(-X)和酰氧基取代,分别生成酯、酰卤和酸酐等羧酸衍生物。  (1)酯的生成:羧酸与醇在强酸(如硫酸等)催化下,生成酯和水的反应,称为酯化反应。该反应是羧酸分子中羧基上的羟基与醇分子中羟基上的氢原子结合生成水,其余部分结合生成酯。  (2)酰卤

单克隆抗体的使用范围和方法

使用范围用于小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。使用方法1.首先将试剂盒恢复室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(一份浓缩清洗液加19份纯水)。2.取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。3.将细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗体)

单克隆抗体技术的鉴定单抗特性

  ⑴ 单克隆性的确定 包括杂交瘤细胞的染色体分析、单抗免疫球蛋白重链和轻链类型的鉴定和单抗纯度鉴定等。  ⑵ 单抗理化特性的鉴定。从实用意义上说,单抗对温度和PH变化的敏感性以及单抗的亲合力都是理化特性鉴定的主要项目,它们可为单抗的使用和保存提供重要依据。  ⑶ 单抗与相应抗原的反应性测定。单抗与

单克隆抗体(monoclonal-antibody,McAb)的生产

获得稳定的杂交瘤细胞系后,即可根据需要大量生产单抗,以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统,一是动物体内生产法,这是国内外实验室所广泛采用;另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止,通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤

使用茴三硫的注意事项和不良反应

  一、茴三硫的注意事项:  1、胆道完全梗阻者禁用。  2、慎用:  (1)甲状腺功能亢进者慎用;  (2)孕妇或哺乳期妇女慎用。  3、茴三硫解酒作用显著,酒前5~10min服用效果最佳。  二、茴三硫的不良反应  1、有时可发生腹胀、腹泻、腹痛、恶心、肠鸣等胃肠反应及荨麻疹、发热、头痛等过敏反

单克隆抗体鉴定实验试剂原理介绍

  本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类和亚类(可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗体结合,再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应

单克隆抗体的制备(三)

3.2 免 疫 B 细胞的制备血清效价有意义(>1 : 1000)的免疫后动物可以提供抗原反应性B 细胞用于融合。这些细胞可以从脾脏或淋巴结中获得。动物用吸人CO2 处死,在无菌操作下取组织,放 在 4°C无血清培养基中,最多可放lh 。用慑子或针头轻轻打开组织脾脏或淋巴结的外包膜获得单细胞

多羟基海星皂甙首次实现全合成

  中科院上海有机化学研究所俞飚课题组完成了对Linckoside A和B的全合成,这是世界上对多羟基海星皂甙的化学全合成的首次报道。研究成果近日发表于《美国化学会会志》。  在一些海洋无脊椎动物,特别是海星和海参中,存在大量的皂甙类化合物。这些次级代谢产物被认为是行动缓慢的海星和海参的防御性物质,

糖的呈色反应(color-reaction)和定性鉴定(2)

试剂试剂甲:称取34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。试剂乙:称取125g NaOH 137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中,贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。临用前,将试剂甲和试剂乙等量混合。1%葡萄糖溶液;1%蔗糖溶液;1%淀粉溶液。操作方法取试管,编号,各加入Fehlin试剂甲和乙1mL。摇匀后,分