多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收组分 (一般为抗原),即活性蛋白质。实验步骤一、多羟基反应单克隆抗体我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非变性状态。我们把这种抗体归类为多羟基反应单克隆抗体 (PR-mAb)。我们的实验室研究蛋白质转录。因此,我们分离出的大部分 PRmAb,是原核或真核系统中与转录相关的 mAb。对于主攻分离的科学家,真核生物转录系统具有重大的挑战性, 因为实际上许多因子都是多亚基蛋白质。例如,真核......阅读全文
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用
所有形式的亲和层析法都需要两个组分间形成特异性相互作用,通过这种作用可以纯化其中一种组分。免疫亲和层析即利用抗原和抗体的特异性相互作用,是遵循亲和层析原理的一个分类 [综述见 Subramanian(2002)]。事实上,免疫亲和层析是免疫沉淀程序规模放大的拓展应用,不同的部分在于, 层析后需要回收
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(三)
说明(1) 用 IntegraCL350 瓶培养杂交瘤细胞的效果很好, 每毫升细胞培养收获上清液中,可以得到 mAb0.5~Img。通常可连续培养 1 个月左右。(2) 处理液体:将培养基在 37°C 水浴预热。这有助于避免培养瓶中的冷凝作用以及细胞的温度休克向细胞培养皿 (白盖) 添加或取出液
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(四)
说明(1) 用 Benzonase 核酸酶处理裂解液 [步骤(3)](EMD/Novagen#7 0 746,Madison,WD,有助于消化核酸和降低黏度 (见本书第 18 章)。(2)500 mmol/LNaCl 清洗 [步骤 (6)] 有助于消除核酸和 NusA, 后者为一种 RNA 聚合酶结
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(二)
3.PR-mAb 的 ELISA-elution 检测法(1) 抗原包被聚苯乙烯微孔板。通常每孔加入 50 含有 30~100ng 抗原的磷酸盐缓冲液 (PBS,PH7.4)。室温孵育 Ih,保证足够的时间使抗原与聚苯乙烯结合。(2) 每孔用 200 斗含 1% 脱脂奶粉的 PBSd%BLOTTO)
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于...(一)
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——用于免疫亲和层析一、多羟基反应单克隆抗体我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非变性状态。我们把这
多羟基反应单克隆抗体的鉴定、生产和使用——免疫亲和层析
实验步骤 一、多羟基反应单克隆抗体 我们最先使用了一类特殊的单克隆抗体, 并将其用于免疫亲和层析。这些抗体可以用于温和的免疫亲和层析, 因为洗脱条件只需要联合使用无离液盐和低分子质量的多羟基化合物 (多元醇),此条件下蛋白质呈非
羟基和氨基能反应吗
可以反应,叫羟氨基化。羧基-COOH或酚中的-OH可以与胍基(NH2)2-C=NH(一个碳连2个氨基,双键再连一个亚胺基。碱性与KOH相当)中NH2-反应,发生的是酸碱中和反应,即羟基去H+,NH2-得H+.机理是羧基中羰基的氧诱导作用吸电子,使羧基中—OH氧电负性减弱,对H的束缚能力减小。另外氨基
羟基和氨基能反应吗
可以反应,叫羟氨基化。羧基-COOH或酚中的-OH可以与胍基(NH2)2-C=NH(一个碳连2个氨基,双键再连一个亚胺基。碱性与KOH相当)中NH2-反应,发生的是酸碱中和反应,即羟基去H+,NH2-得H+.机理是羧基中羰基的氧诱导作用吸电子,使羧基中—OH氧电负性减弱,对H的束缚能力减小。另外氨基
红外怎么证明羧基和羟基反应
羧基和羟基反应是有机化学中的一种常见反应,通常需要使用化学试剂来证明其反应。然而,红外光谱也可以用来证明羧基和羟基反应的发生。在红外光谱中,羧基和羟基都有明显的吸收峰。羧基的吸收峰通常在1700-1750 cm^-1附近,而羟基的吸收峰则在3200-3600 cm^-1附近。当羧基和羟基发生反应时,
使用羟基脲片的不良反应介绍
1.骨髓抑制为剂量限制性毒性,可致白细胞和血小板减少,停药后1~2周可恢复; 2.使用羟基脲片有时出现胃肠道反应,尚有致睾丸萎缩和致畸胎的报道; 3.偶有中枢神经系统症状和脱发,亦有羟基脲片引起药物性发热的报道,重复给药时可再出现。 4.国外有报道,在骨髓增殖异常的病人中,使用羟基脲出现了
单克隆抗体的鉴定实验
1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书
概述单克隆抗体的鉴定实验
1.杂交瘤细胞染色体的检查采用秋水仙素裂解法进行。 2.单克隆抗体的类型、亚型的测定:购买兔抗小鼠Ig类型和亚型的标准抗血清,采用琼脂扩散法或ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型。 ELISA夹心法测定单抗的Ig类型和亚型的试剂盒说明书
羟基醇和酰氯反应是首先跟羟基反应还是羧基
羟基醇和酰氯反应是首先跟羟基反应还是羧基如果是羟基酸和酰氯反应,那自然是优先和羟基反应,因为羟基的酸性比羧基弱,羟基的亲核性比羧基强。
海星多羟基甾体皂甙Linckoside-A和B首次全合成
在一些海洋无脊椎动物,特别是海星和海参中,存在大量的皂甙类化合物。这些次级代谢产物被认为是行动缓慢的海星和海参的防御性物质,用于抵抗被捕食、寄生和感染等。因此,人们相信这类化合物具有诸如抗肿瘤和抗微生物等生理活性,有希望被发展成为治疗药物。然而,这些化合物结构复杂多样,难以分离获取,也因此难以开
羧酸羧基中羟基的取代反应
羧基中的羟基在一定条件下,可被羟氧基(-OR)、卤素(-X)和酰氧基取代,分别生成酯、酰卤和酸酐等羧酸衍生物。 (1)酯的生成:羧酸与醇在强酸(如硫酸等)催化下,生成酯和水的反应,称为酯化反应。该反应是羧酸分子中羧基上的羟基与醇分子中羟基上的氢原子结合生成水,其余部分结合生成酯。 (2)酰卤
单克隆抗体的使用范围和方法
使用范围用于小鼠单克隆抗体Ig类、亚类的鉴定以及相关内容的研究。使用方法1.首先将试剂盒恢复室温(大约30分),然后用纯水把清洗液配成工作浓度(一份浓缩清洗液加19份纯水)。2.取出酶标板。每个标本需要6孔,阳性对照6孔。多余的用自封袋保存,记得放入干燥剂。3.将细胞培养上清(或特异亲和纯化的抗体)
单克隆抗体技术的鉴定单抗特性
⑴ 单克隆性的确定 包括杂交瘤细胞的染色体分析、单抗免疫球蛋白重链和轻链类型的鉴定和单抗纯度鉴定等。 ⑵ 单抗理化特性的鉴定。从实用意义上说,单抗对温度和PH变化的敏感性以及单抗的亲合力都是理化特性鉴定的主要项目,它们可为单抗的使用和保存提供重要依据。 ⑶ 单抗与相应抗原的反应性测定。单抗与
单克隆抗体(monoclonal-antibody,McAb)的生产
获得稳定的杂交瘤细胞系后,即可根据需要大量生产单抗,以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统,一是动物体内生产法,这是国内外实验室所广泛采用;另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止,通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法,鉴于绝大多数动物用杂交瘤
单克隆抗体鉴定实验试剂原理介绍
本试剂盒利用双抗体夹心法鉴定小鼠淋巴细胞杂交瘤培养上清中单克隆抗体或特异亲和纯化的单克隆抗体的类和亚类(可区分出IgG1\IgG2a\IgG2b\IgG3\IgM\IgA)。采用小鼠抗体共有位点的二抗包被微孔板,与加入的培养上清中的小鼠抗体结合,再加入HRP标记的抗小鼠各类、亚类的抗体来分别反应
多羟基海星皂甙首次实现全合成
中科院上海有机化学研究所俞飚课题组完成了对Linckoside A和B的全合成,这是世界上对多羟基海星皂甙的化学全合成的首次报道。研究成果近日发表于《美国化学会会志》。 在一些海洋无脊椎动物,特别是海星和海参中,存在大量的皂甙类化合物。这些次级代谢产物被认为是行动缓慢的海星和海参的防御性物质,
糖的呈色反应(color-reaction)和定性鉴定(1)
目的要求(1) 学习鉴定糖类及区分酮糖和醛糖的方法。(2) 了解鉴定还原糖的方法及其原理。Ⅰ. Molish反应——α-萘酚反应实验原理糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下脱水形成糠醛及其衍生物与α-萘酚作用形成紫红色复合物,在糖液和浓硫酸的液面间形成紫环,因此又称紫环反应。自由存在和结合存在的糖均呈阳性反应
糖的呈色反应(color-reaction)和定性鉴定(2)
试剂试剂甲:称取34.5g硫酸铜溶于500mL蒸馏水中。试剂乙:称取125g NaOH 137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中,贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。临用前,将试剂甲和试剂乙等量混合。1%葡萄糖溶液;1%蔗糖溶液;1%淀粉溶液。操作方法取试管,编号,各加入Fehlin试剂甲和乙1mL。摇匀后,分
使用美多芭的不良反应介绍
1、血液和淋巴系统:极个别病例报道有溶血性贫血、一过性白细胞减少和血小板减少。因此在长期使用含左旋多巴的药物治疗时,应定期检查血细胞以及肝、肾功能。 2、代谢和营养:报道有厌食症。 3、精神症状:接受美多芭治疗的患者可能出现抑郁,但这亦可能属于帕金森病和多动腿综合症患者的一种临床表现。老年患
使用兰悉多的不良反应介绍
1.过敏反应:偶有皮疹、瘙痒等症状,如出现上述症状时请停止用药。 2.血液系统:偶有贫血、白细胞减少,嗜酸球增多等症状,血小板减少之症状极少发生 3.消化系统:偶有便秘,腹泻,口渴,腹胀等症状。偶有GOT、GPT、ALP、LDH、γ-GTP上升等现象,所以须细心观察,如有异常现象就应采取停药
使用磺胺多辛的不良反应介绍
1.过敏反应较为常见,可表现为药疹,严重者可发生渗出性多形红斑、剥脱性皮炎和大疱表皮松解萎缩性 皮炎等;也有表现为光敏反应、药物热、关节及肌肉疼痛、发热等血清病样反应。 2.中性粒细胞减少或缺乏症、血小板减少症及再生障碍性贫血。患者可表现为咽痛、发热、苍白和出血倾向。 3.溶血性贫血及血红蛋
使用曲拉马多的不良反应
使用曲拉马多的不良反应: 1、与其他镇痛药相似,可能出现出汗(尤其静脉注射太快时)、头晕、恶心、呕吐、食欲缺乏、口干、疲劳、嗜睡、精神迟钝,尤其在患者处于精神紧张时,不良反应更易出现。 2、较少发生皮疹、低血压和排尿困难。 3、静脉注射过快往往会出现面红、发热、出汗、心动过速。 4、极少
使用多西霉素的不良反应介绍
1.多西霉素可沉积在牙齿和骨骼中,致牙齿产生不同程度的变色黄染、牙釉质发育不良及龋齿,并可致骨发育不良。 2.胃肠道症状:口服多西霉素可引起恶心、呕吐、上腹不适、腹胀、腹泻等胃肠道症状。 3.肝脏损害:大剂量服用多西霉素可引起肝脏损害,通常为肝脂肪变性。原有肝功能不全者、妊娠后期妇女更易发生
使用里葆多的不良反应介绍
以下引自国外上市的盐酸多柔比星脂质体的临床文献资料。 对AIDS-KS病人进行的临床开放和对照研究显示,与盐酸多柔比星脂质体相关的最常见的不良反应是骨髓抑制,几乎近一半病人发生。 白细胞减少是病人最常见的不良反应,也可见贫血和血小板减少。这些反应一般在治疗早期便可见,但仅是暂时性的。临床试验
使用多塞平的不良反应介绍
1、用法和用量 由于剂型及规格不同,用法用量请仔细阅读药品说明书或遵医嘱。 2、不良反应 不良反应较少。 ①少数患者可有轻度兴奋、失眠、口干、便秘、视物模糊等,某些症状可在继续用药中自行消失。 ②局部外用也可出现困倦和其他系统反应。最常见的局部反应是烧灼感与针刺感。 3、禁忌症 对
使用多奈哌齐的不良反应
1.常见恶心、呕吐、腹泻、乏力、倦怠、肌肉痉挛、食欲缺乏等,症状常为一过性、轻度的反应,继续用药可缓解。实验室检查可见血肌酸激酶轻微升高,其他检验值尚未发现明显异常。 2.较少见头晕、头痛、精神紊乱(幻觉、易激动、攻击行为)、抑郁、多梦、嗜睡、视力减退、胸痛、关节痛、胃痛、胃肠功能紊乱、皮疹、